Ваз 2199 коробка передач схема: Устройство коробки передач Ваз-2109 | Автолюбители

Устройство коробки передач Ваз-2109 | Автолюбители

Коробка передач

1 – задняя крышка картера коробки передач;
2 – ведущая шестерня V передачи;
3 – шариковый подшипник первичного вала;
4 – ведущая шестерня IV передачи первичного вала;
5 – первичный вал;
6 – ведущая шестерня III передачи первичного вала;
7 – картер коробки передач;
8 – ведущая шестерня II передачи первичного вала;
9 – шестерня заднего хода;
10 – промежуточная шестерня заднего хода;
11 – ведущая шестерня I передачи первичного вала;
12 – роликовый подшипник первичного вала;
13 – сальник первичного вала;
14 – сапун;
15 – фланец муфты;
16 – подшипник выключения сцепления;
17 – направляющая втулка муфты;
18 – роликовый подшипник вторичного вала;
19 – вторичный вал;
20 – ось сателлитов;
21 – ведущая шестерня привода спидометра;
22 – шестерня полуоси;
23 – коробка дифференциала;

24 – сателлит;
25 – картер сцепления;
26 – пробка для слива масла;

27 – ведомая шестерня главной передачи;
28 – регулировочное кольцо;
29 – роликовый конический подшипник дифференциала;
30 – сальник полуоси;
31 – ведомая шестерня I передачи вторичного вала;
32 – синхронизатор I и II передач;
33 – ведомая шестерня II передачи вторичного вала;
34 – стопорное кольцо;
35 – упорное полукольцо;
36 – ведомая шестерня III передачи вторичного вала;
37 – синхронизатор III и IV передач;
38 – ведомая шестерня IV передачи вторичного вала;
39 – шариковый подшипник вторичного вала;
40 – ведомая шестерня V передачи вторичного вала;
41 – синхронизатор V передачи;
42 – игольчатый подшипник;
43 – вилка переключения передач.

Привод переключения передач

1 – рычаг переключения передач;
2 – ось рычага;
3 – палец рычага переключения передач;
4 – шаровая опора рычага;

5 – защитный чехол тяги;
6 – тяга привода переключения передач;
7 – рычаг штока выбора передач;
8 – рычаг выбора передач;
9 – картер коробки передач;

10 – картер сцепления;
11 – шток выбора передач;
12 – втулка штока;
13 – сальник штока;
14 – защитный чехол;
15 – корпус шарнира;
16 – втулка шарнира;
17 – наконечник шарнира;
18 – хомут.

Описание конструкции

Коробка передач — с ручным переключением, механическая, двухвальная, с четырьмя или пятью передачами переднего хода и одной заднего, с синхронизаторами на всех передачах переднего хода. Она конструктивно объединена с дифференциалом и главной передачей. Выпуск четырех- и пятиступенчатых коробок с индексами 2108 и 21083 соответственно к настоящему времени прекращен. На конвейер и в запасные части поставляют коробку 2109. Она отличается иным расположением сапуна вентиляции картера — на картере сцепления (раньше был на задней крышке), наличием щупа уровня масла, другой системой смазки. Передаточные числа остались прежними.

Корпус коробки передач состоит из трех частей (отлитых из алюминиевого сплава): картера сцепления, картера коробки передач и крышки. Для улучшения теплоотвода их поверхность оребрена.

Первичный вал — с индексом 21083. Он выполнен как блок ведущих шестерен, которые находятся в постоянном зацеплении с ведомыми шестернями всех передач переднего хода. Вторичный вал — также с индексом 21083. Его шестерни вращаются на игольчатых подшипниках. Шестерня главной передачи выточена заодно с валом.

Часть коробок 2109 комплектуются валами 2110 (шестерни вторичного вала 2110 — для снижения шума — вращаются на втулках). Шестерня главной передачи выполнена съемной, на шлицах. На валу она фиксируется стопорным кольцом. Внутри вторичного вала 2110 выполнена проточка для подачи смазки к втулкам шестерен.

Шестерни — цилиндрические, косозубые, постоянного зацепления, за исключением прямозубой шестерни заднего хода. На каждой шестерне имеется дополнительный прямозубый венец, с которым соединяются скользящие муфты синхронизаторов при включении передачи. В шестернях 2108 выполнены радиальные отверстия для подвода масла (смазка разбрызгиванием), шестерни 2110 смазываются маслом, поступающим из вала. Наборы шестерен невзаимозаменяемы из-за разницы посадочных отверстий и поставляются вместе с валом.

Передние подшипники валов — роликовые, задние — шариковые. Радиальный зазор в роликовых подшипниках не должен превышать 0,07 мм, в шариковых — 0,04 мм. Под передним подшипником вторичного вала коробки с валами 2110 расположен маслосборник, направляющий поток масла внутрь вала.

Дифференциал — конический, двухсателлитный. К фланцу коробки дифференциала крепится ведомая шестерня главной передачи. На коробку дифференциала напрессована ведущая шестерня привода спидометра, вращающая ведомую шестерню, расположенную в корпусе привода спидометра, который крепится к картеру коробки передач.

Привод управления коробкой состоит из рычага переключения передач, шаровой опоры, тяги, штока выбора передач и механизмов выбора и переключения передач.

На внутреннем конце штока закреплен рычаг, который действует на трехплечий рычаг механизма выбора передач. Этот механизм выполнен отдельным узлом и крепится к плоскости картера сцепления.

В корпусе механизма выбора передач имеются две оси. На одной установлены трехплечий рычаг выбора передач и две блокировочные скобы. Другая ось проходит через отверстия блокировочных скоб, что предотвращает их проворачивание. Одно плечо рычага выбора передач служит для включения передач переднего хода, другое — для включения заднего хода, а на третье плечо действует рычаг штока выбора передач. На оси установлена вилка включения заднего хода. Механизмы выбора передач 2108 и 21083 устанавливаются соответственно на четырех- и пятиступенчатую коробку передач. У механизма 2108 на оси нет пружины.

В коробку передач на заводе заливают трансмиссионное масло, рассчитанное на 75 000 км пробега. Его допустимо заменять на «Лукойл TM4-12», «ТНК ТРАНС КП» (80W-85;GL-4), из импортных подойдут «ESSO GEAR OIL TDL» (75W-90, 80W-90; GL-4/5) и «MULTIGEAR S» (75W-90; GL-4/5).

 

Похожие статьи

• Устройство Ваз 2109

Сборка коробки передач ВАЗ 2108 2109 VAZ (восьмёрка, девятка)

			1. Запрессуйте с помощью соответствующей оправки сальники в картеры сцепления и коробки передач. Cмажьте рабочую кромку сальников смазкой Литол-24.	Внимание Сальники запрессовывайте рабочей кромкой внутрь коробки (металлической обоймой наружу).	2. Запрессуйте передние подшипники первичного и вторичного валов в картер сцепления и смажьте их трансмиссионным маслом. При сборке коробки передач смазывайте все детали тем же трансмиссионным маслом, которое потом будете заливать в коробку передач.
			3. Запрессуйте наружные кольца подшипников дифференциала в картеры сцепления и коробки передач Подберите регулировочное кольцо требуемой толщины при замене одной из следующих деталей: картера сцепления или коробки передач, корпуса дифференциала или подшипников дифференциала (смотрите п. 12.9.4.).	4. Вставьте в отверстие картера шток переключения передач. Затем установите на шток рычаг.	5. Нанесите клей ТБ-1234 на резьбу болта (предварительно обезжирив его) и заверните болт крепления рычага моментом 34,0 Н·м (3,4 кгс·м).
			Примечание Болты крепления рычага и шарнира на штоке имеют разную длину. Болт крепления рычага темного цвета (фосфотирован) имеет длину 19,5 мм, а болт крепления шарнира золотистого цвета (кадмированный) – 24 мм.	6. Установите на шток защитный чехол.	7. Надвиньте кромку защитного чехла по всему периметру на отбортовку.
			8. Установите шарнир на шток.	9. Нанесите клей ТБ-1234 на резьбу болта (предварительно обезжирив его) и заверните болт крепления шарнира моментом 19,0 Н·м (1,9 кгс·м).	10. Надвиньте кромку защитного чехла по всему периметру на фланец шарнира.
			11. Установите механизм переключения передач так, чтобы рычаг механизма попал между лапок рычага штока.	12. Заверните три болта крепления механизма переключения передач моментом 5–8,3 Н·м (0,5–0,83 кгс·м).	13. Вставьте вал привода спидометра в корпус. Затем установите уплотнительное кольцо.
			14. Вставьте привод спидометра в картер сцепления и закрутите гайку крепления моментом 4,5–7,2 Н·м (0,45–0,72 кгс·м).	15. Установите дифференциал в картер сцепления.	16. Вставьте в полуосевую шестерню дифференциала оправку (можно использовать старый внутренний ШРУС). Обязательно зафиксируйте полуосевую шестерню со стороны картера сцепления, чтобы шестерни не сместились со своих посадочных мест, иначе при установке валов привода могут возникнуть трудности.
			17. Введите шестерни первичного и вторичного валов в зацепление.	18. В таком положении установите валы в картер сцепления.	19. Смажьте втулку промежуточной шестерни заднего хода трансмиссионным маслом.
			20. Установите промежуточную шестерню заднего хода в картер сцепления.	21. Вставьте ось промежуточной шестерни заднего хода.	22. Установите рычаг включения заднего хода на ось механизма переключения передач.
			Примечание Конец рычага включения заднего хода должен располагаться в проточке промежуточной шестерни.	23. Установите стопорное кольцо.	Примечание Если стопорное кольцо рычага включения заднего хода имеет люфт, сожмите концы кольца плоскогубцами.
			25. Установите вилку переключения 3-ей и 4-ой передач на шток и сдвиньте ее головке штока. Вставьте вилку в проточку муфты синхронизатора 3-ей и 4-ой передач.	26. Опустите шток в отверстие картера и поверните его, введя головку штока в зацепление с рычагом переключения передач. Заверните болт крепления вилки на штоке моментом 12,0–18,0 Н·м (1,2–1,8 кгс·м).	27. Установите вилку переключения 1-ой и 2-ой передач на шток и сдвиньте ее головке штока. Вставьте вилку в проточку муфты синхронизатора 1-ой и 2-ой передач.
			28. Опустите шток в отверстие картера и поверните его, введя головку вилки в зацепление с блокировочной скобой. Заверните болт крепления вилки на штоке моментом 12,0–18,0 Н·м (1,2–1,8 кгс·м).	29. Очистите магнит от металлических частиц и вставьте его в картер.	30. Установите уплотнительную прокладку.
Примечание Порваные и сильно обжатые уплотнительные прокладки замените. Перед установкой рекомендуется смазывать прокладки тонким слоем смазки Литол-24, чтобы они не смещались во время сборки.				31. Установите картер коробки передач на картер сцепления.	32. Обильно смажьте трансмиссионным маслом детали коробки передач.
			33. Заверните гайки крепления картеров моментом 16,0–26,0 Н·м (1,6–2,6 кгс·м).	34. Установите стопорные кольца на задние подшипники валов.	35. Установите пластину крепления подшипников.
			36. Заверните четыре винта крепления пластины. Затем затяните их с помощью ударной отвертки.	37. Вставьте шарик с пружиной фиксатора передачи заднего хода и заверните пробку моментом 29,0–45,0 Н·м (2,9–4,5 кгс·м). Вверните выключатель света заднего хода моментом 29,0–46,0 Н·м (2,9–4,6 кгс·м).	38. Установите шарики с пружинами фиксаторов передач и заверните пробки моментом 29,0–45,0 Н·м (2,9–4,5 кгс·м).
			39. Установите заднюю опору силового агрегата.	40. Заверните два болта крепления опоры моментом 62,0–100,0 Н·м (6,2–10,0 кгс·м).	41. Установите упорную шайбу.
			42. Установите шестерню 5–ой передачи на первичный вал.	43. Установите на вторичный вал втулку до упора, а затем игольчатый подшипник. Смажьте подшипник трансмиссионным маслом.	44. Установите дистанционное кольцо.
			45. Установите на вторичный вал шестерню 5–ой передачи.	46. Вставьте в синхронизатор 5–й передачи упорную пластину со стороны выступов на муфте.	47. С другой стороны синхронизатора вставьте блокирующее кольцо так, чтобы малые выступы кольца были расположен напротив пазов с фиксаторами ступицы синхронизатора.
			48. Вставьте вилку включения в проточку муфты синхронизатора.	49. Установите одновременно синхронизатор на вторичный вал и вилку на шток, придерживая снизу блокирующее кольцо. Напрессуйте синхронизатор на вал, прикладывая усилие к ступице.	50. Включите 3–ю или 4–ю передачу.
			51. Включите 5–ю передачу, сдвинув муфту синхронизатора вниз.	52. Заверните гайки первичного и вторичного валов моментом 123,0–150,0 Н·м (12,3–15,0 кгс·м).	53. Зафиксируйте гайки на валах, закернив их.
			54. Заверните болт крепления вилки на штоке моментом 12,0–18,0 Н·м (1,2–1,8 кгс·м).	55. Установите уплотнительную прокладку.	56. Установите заднюю крышку с кронштейном и закрутите гайки крепления моментом 16,0–26,0 Н·м (1,6–2,6 кгс·м), а также болт крепления кронштейна.

ВАЗ 21099 | Переключение передач

Переключение передач

Переключение передач и положение рычага

Ручная коробка передач

Положения рычага переключения передач показаны на его ручке. Перед включением задней передачи необходимо поднять кольцо под ручкой рычага.

При переключении передач полностью выжмите педаль сцепления и затем плавно ее отпустите. Не рекомендуется вести автомобиль, держа одну руку на рычаге переключения, это повышает износ коробки передач.

При переключении с пятой на четвертую передачу не нажимайте на рычаг в боковом направлении, чтобы случайно не включить вторую передачу, что может вызвать превышение допустимых оборотов двигателя и его повреждение.

Перед включением задней передачи убедитесь, что автомобиль находится в покое и Ваша нога не на педали акселератора. Передвиньте рычаг из нейтрального положения вправо до отказа, а затем включите задний ход.

В приведенной ниже таблице указаны скорости движения, при которых следует включать следующую передачу для максимальной экономии топлива.

Смена передачи	Скорость движения
1-2	25 км/час
2-3	40 км/час
3-4	65 км/час
4-5	75 км/час

Переключение передач — автоматическая трансмиссия

У основания рычага селектора имеется циферблат с подсветкой, на котором изображены символы положений диапазонов селектора.

«P» — Стоянка
«R» — Задний ход
«N» — Нейтральное положение

Передачи для движения вперед:

«D» — 1-я — 4-я передачи
«3» — 1-я — 3-я передачи
«2» — 1-я — 2-я передачи
«1» — только 1-я передача

Нельзя устанавливать положение «P», «R», или «N» при движении автомобиля. При повторной установке положения движения это может привести к аварии или повреждению коробки передач.

Положения рычага селектора

Нажатие на педаль акселератора при перестановке рычага селектора может вызвать повышенный износ трансмиссии.

При установке положения движения всегда держите ногу на педали тормоза. Не следует держать руку на рычаге селектора, поскольку это может вызвать износ трансмиссии.

Рычаг переключения передач

Между установкой рычага в положение движения и разгоном следует делать паузу в несколько секунд, чтобы дать возможность включиться передаче.

В некоторых положениях рычаг селектора блокируется, и для его передвижения необходимо нажать кнопку на ручке рычага. Блокировка имеет место между следующими положениями.

«D» ›»3″
«N» › «R»
«R» › «P»
«P» › «R»
«3» › «2»

«P»

Это положение может быть установлено только при стоящем автомобиле. Рычаг селектора и трансмиссия заблокированы. Может быть произведен запуск двигателя.

«R»

Это положение может быть установлено только при стоящем автомобиле. Необходимо нажать кнопку на ручке рычага.

Перед троганием следует подождать несколько секунд, чтобы включилась передача заднего хода.

«N»

В этом положении двигатель отсоединен от трансмиссии. Может быть произведен запуск двигателя. Во избежание качения автомобиля по склону следует применять ручной тормоз.
Во избежание перегрева двигателя и трансмиссии следует устанавливать положение «N» при продолжительных остановках автомобиля (например, в автомобильных пробках). При ожидании разрешающего движение сигнала светофора следует устанавливать положение «D».

«D»

Это положение применяется при вождении в обычных условиях. Автомобиль трогается с места на первой передаче, и затем происходят автоматические переключения между 2-й, 3-й и 4-й передачами. Момент переключения зависит от положения педали акселератора и скорости движения.

«3»

В этом положении 4-я передача заблокирована. Автомобиль трогается с места на первой передаче и затем происходят автоматические переключения между 2-й и 3-й передачами.
Положение 3 рекомендуется при вождении по извилистым дорогам и в плотном городском движении. При перестановке рычага из положения «D» в положение 3 трансмиссия немедленно переключается на 3-ю передачу, что вызывает сильный эффект торможения двигателем. Этого не следует делать при скорости свыше 130 км/час.

«2»

Это положение рекомендуется при движении по горным дорогам. При этом лучше используется мощность двигателя и возрастает эффект торможения двигателем. Трансмиссия автоматически переключается между первой и второй передачами. Третья и четвертая передачи заблокированы.

При перестановке рычага из положения «D» или из положения 3 в положение 2 переключение с третьей передачи на вторую происходит только при скорости движения меньшей, чем некоторая заранее заданная скорость, во избежание увеличения оборотов двигателя до недопустимых значений.

«1»

Это положение рекомендуется при подъеме на очень крутые склоны и при спуске с них. С одной стороны, обеспечивается эффективное торможение двигателем, с другой стороны, ликвидируются постоянные переключения передач, приводящие к перегреву рабочей жидкости трансмиссии.

Если перевести рычаг из положения «D» в положение 1, то происходит немедленное переключение на 3-ю передачу; далее, по мере того как скорость уменьшится до 70 км/час, произойдет переключение на 2-ю передачу; и далее по мере того как скорость уменьшится до 30 км/час, произойдет переключение на 1-ю передачу. Не следует устанавливать рычаг селектора в это положение при скоростях, превышающих 130 км/час. Ручное переключение также нежелательно на обледенелой дороге. При этом положении рычага селектора не происходит переключения на высшие передачи.

Выжимание педали акселератора до пола («кик-даун»)

При выжимании педали акселератора до пола — в положение «кик-даун» — происходит переключение на низшую передачу, чтобы обеспечить запас мощности, например для обгона. Переключение на следующую передачу происходит только при высоких оборотах двигателя или при отпускании педали акселератора.

Коробка передач ВАЗ 21099: схема переключения, принцип работы

Ответить на вопрос какая деталь или узел автомобиля нужнее всего, ответить невозможно. Машина — это совокупность узлов сочетание которых дает возможность агрегату выполнять свои функции. В данной статье постараемся рассказать про коробку переключения передач автомобиля ВАЗ 21099. Принцип действия, возможные неполадки, методы устранения неисправностей.

Принцип работы

КПП по сути является набором ведущих и ведомых шестерней которые имеют синхронизаторы (задняя скорость синхронизаторов не имеет) объединенных с дифференциалом. Они передают разный крутящий момент (в зависящий от включенной передачи) от мотора к колесам автомобиля.

Если задаться вопросом какая коробка передач на ВАЗ 21099, ответить не сложно. Машины линии ВАЗ 2109, 08, и так далее, схожи по строению и местам посадки узлов так, что можно сказать, что узлы этих агрегатов взаимозаменяемы, но лучше всего использовать детали предназначенные именно для Вашей модели. Они могут иметь четыре или пять передач, это определяется комплектацией.

Устройство КПП

В строение КПП входят следующие детали:

1. Первичный и вторичный валы.
2. Набор ведущих и ведомых шестерен.
3. Шестерня задней передачи.
4. Дифференциал.
5. Крышка картера.
6. Переключатель передающего момента.
7. Рычаг переключения скоростей.
8. Тяга шаровая опора.
9. Синхронизатор.

Проявления, причины и способы ликвидации неполадок

При поломке любого узла автомобиля сопровождаются определенными признаками КП не исключение.

Первый признак — КПП издает шум (гул).

Причины — износились подшипники или шестерни, понижение количества масла в коробке передач.

Устранение неполадки — заменить вышедшие из строя части, добавить масло, если нужно поменять сальники.

Второй признак — тяжело переключать передачи.

Причины — деформация тяг механизма, снижение фиксации рычага штока определения передач, слабая фиксация шарнира, плохо отрегулирован привод, неисправность пластиковых деталей привода.

Устранение неполадки — выровнять или поменять тяги, поменять поломанные элементы, откорректировать параметры привода.

Третий признак — самостоятельное отключение передачи.

Причины — износ или поломка синхронизаторов, разрушение резиновых задних опор, плохо отрегулирован привод, некорректно установлен чехол.

Устранение заменить вышедшие из строя элементы, откорректировать привод, пере установить чехол.

Четвертый признаки — характерный шум и треск при включении передачи.

Причины — разрушение стопорного кольца синхронизатора, неполадки сцепления.

Устранение — заменить стопорное кольцо, отрегулировать сцепление.

Пятый признак — падение уровня масла.

Причины — износ сальников и уплотнителей, отвинтились крепления картера или крышки КПП, послабление крепления закрывающего сливное отверстие.

Устранение — замена сальников и уплотнителей, затянуть болты крепления, подтянуть крышку сливного отверстия.

Как снять КПП

Если проявился любой из признаков выхода из строя коробки переключения скоростей не стоит затягивать с ремонтом. Своевременная замена поломанной детали поможет избежать полной замены узла. Демонтаж КПП, это довольно трудоемкий процесс и в одиночку сделать это будет сложно. Но если нет лишних средств на ремонт узла на сервисе, можно его провести в своем гараже (желательно с помощником). Снять блок с автомобиля можно следующим образом:

1. Отсоединить клеммы аккумулятора.
2. Слить масло с КПП.
3. Снять защиту картера.
4. Отсоединить провода «массы».
5. Ослабить болты крепления троса и отсоединить его.
6. Отсоединить провод от реле, снять стартер.
7. Изъять «палец» из нужного рычага, отсоединить шарнир от кулака первого элемента.
8. Демонтировать ШРУС выдавив и отведя в сторону первый элемент. Со вторым ШРУС надо поступить также.

После этих нехитрых манипуляций можно извлекать КПП.

Замена коробки передач ВАЗ 2199.

Ремонт ОТ и ДО

Комментарии к теме Замена коробки передач ВАЗ 2199

Икар

А какие симптомы были? на какой скорости пиналась? Почему такой шаг при выборе болта?

Дианна

Миша…буквы в букваре, а в машине автомат знаки, значки, режимы, передачи,обозначе ния

Alora

ауди и мбв лучшие, а динамика считаю, что одинаковая

Подолев Женёк

уменя газель 406 дв пробег330т еще неменял цепь надо менять двиг не шумит

Джавид

уровень проверяется на заведенном двигателе

Иннокентий

рубль по какому курсы? то что говариш обайдется например 20 тыс., у нас можно делать за 5-6тыс. руб

Нурдаулет Эненс

Крутой аппарат

Bick

У вас такие классные плакаты-схемы используются в видео о принципах действия тех или иных агрегатов и систем (например схема циркуляции охлаждения АКПП и т. п.). Где-то можно найти подобные ‘картинки» для своего авто? LR3 v8

Раст

На … эти дикие звуки — ты что, поп-звезда что ли?

Лот

В глаза бросились только тряпочки с логотипом Air Astana) за родную авиакомпанию обидно немного). А так видосик прикольный. Интересно посмотреть. Удачи вам ребята!??

Cortland

Оператор от бога.

Пук Свекольников

у меня была сти отсечка 6800 на 2 передаче 100 набирал

Кучма

The best teacher

Артемка

Андрей, подскажите на рафе 2016г.в. какой вариатор(модель)

Красина

Ждал пока покажет как он новый сальник будет устанавливать. Столько пустой болтавни, а потом вот сальник новый уже стоит. Учитесь, он сам встал.

Оман Берепелов

ты как вскрыл фару? стекло чем отковырял а? давай говори

Кудин

Расскажи пожалуйста подробно как сателиты меняются

Amram

хотелось бы узнать ваше мнение о двигателях hyundai-kia 2. 4л

Salisbury

Автомат может у нее только в багажнике лежать?

Досуг

Вот теперь вопрос: каким … думали инженеры автоваза? Даyны тупорылые.

Шкрабо Амелин

Скажите пожалуйста, заднюю влючил и чуть проехал назад. Переключаю на первую не переключается, то есть скорость остался на заднем положений. На нейтралку не выходит. Подскажите пожалуйста в чем дело. Может кулису ремонтировать

Муса

Спасибо большое помогло

Петруха Рахматов

Голос вернулся, уже лучше смотреть

Бач

7:39 spellzone.com

Дэвид

… других слов нет… из разряда вредные советы!

Шин

Вместо бла-бла-бла, лучше бы качество подтянули. А так УАЗ это не убиваемый авто.

Джалиля

Using clutch.?

Neoma

Был обладателем 1срв и 2й тоже.Первая 6 лет была,служила надёжной и ничего не ломалось. Но 14 лет дало знать кузову.А вот 2 кузов достался 6 летним 2006г.Всё устраивало,кроме стартера при нагреве переставал работать.И сборка Англии меня разочаровала.Кузов под задними стойками весь в трещинах и колёса стоят домиком.Пришлось избавляться.А так идёт мягко,но движок жрёт масло,при пробеге 120000км.да просвет маловат.

Fogarty

М5 уступает: дизайн, престиж марки, старый 4,4 литра, не спорт коробка(по сравнению с роботом), в управлении, в отделке салона, в динамике(50 сил её не спасут). За М5, пойдет,обманыва ться’, не авто гурман. Имея такие ресурсы, идти в BMW…?

Прокомментировать

Опубликовать

Запчасти авто рено 9 в украине 3В тюнинг на русском

Запчасти авто рено 9 в украине 3В тюнинг на русском Opel в топ гир, 3В тюнинг на русском

Локальный ремонт характеризуется тем, что для его выполнения не требуется снятие кузова.  А значит, сохраняется нетронутой заводская сборка. Только маленький повреждённый участок подвергается корректировке, что делает процедуру быстрой и доступной. И это, пожалуй, ключевое преимущество, которое сохраняет клиентам и деньги, и время. К сожалению, не для всех повреждений актуален именно локальный подход. Тюнинг на киа рио 3 хэтчбек Запчасти авто рено 9 в украине
 Спасибо Сергею Ивановичу за качественно выполненную работу! Привезли к нему Тигуан 2011 года ударенный так, что аж лонжероны повело, всё вытянули и поставили на место! К качеству никаких претензий, и что немаловажно за разумные деньги! Всем советую. Автозапчасти ваз самара отзывы gay video
 Запчасти авто рено 9 в украине Евгений: Интересует время работ и  стоимость качественного удаления коррозии и частичная покраска нескольких элементов автомобиля: небольшая часть порога, низ водительской двери, кромка заднего левого крыла. Также требуется удаление коррозии с обратной стороны (скрытой полости) крыла. Могу выслать фото для предварительной оценки.  3В тюнинг на русском
 Выполнять профессиональную полировку самостоятельно не рекомендуется, так как неправильное выполнение полировальных работ может привести к истончению слоя лака. Тогда ситуацию сможет спасти только покраска автомобиля. Лучше всего данные работы предоставить специалистам в Центре Кузовного Ремонта «КАН АВТО»! Мы позаботимся о том, чтобы Ваш автомобиль блестел как новый! Kia сзао
 Автозапчасти круглосуточно фиат Авторазборка Мотормолл на Амурской занимается продажей б/у запчастей для легковых автомобилей с разбора, в наличие большой выбор запчастей для большинства иномарок в Москве. У разборке можно купить б/у запчасти подвески, детали салона, расходные материалы, запчасти тормозной системы, фары, кузовные запчасти,крылья, бампера, двери, пороги, багажник, оптика, решетки и множество остальных запчастей для вашего авто в наличие Лада гранта тюнинг решетка радиатора Фольксваген поло хэтчбек круглые фары

Запчасти авто рено 9 в украине

Рассмотрим основные технологические стадии кузовного ремонта: мойка и обезжиривание, зачистка поверхности, шпатлевание, нанесение грунтов и отделочных покрытий.   Лада гранта тюнинг решетка радиатора
 Вызов мастера и точная  диагностика машин (частичная разборка, выявление причины неисправности, окончательная  сборка оборудования) осуществляется абсолютно  бесплатно. Фольксваген поло хэтчбек круглые фары Adult only
 Kia сзао В указанном типе красок при нанесении разной толщины слоя можно получить кардинально разнящиеся оттенки. Вначале это не особо заметно, но при сборке это видно сразу. 
 Молодцы, ребята. Так держать. Мне, ничего не понимающей в запчастях, менеджер все популярно объяснил, быстро заказал, посоветовал где поменять. Цены приемлемые. В общем ... 
 Автозапчасти ваз самара отзывы Также сайты предлагают ознакомиться не только с ценами, но и предоставляют полное описание автозапчастей, в некоторых случаях прилагается фото. Компании, которые давно занимаются сбытом контрактных запчастей, имеют свои склады, поэтому многие комплектующие можно заказать прямо со склада. Если же нет, тогда любезные поставщики привезут нужную деталь по предзаказу.   Тюнинг на киа рио 3 хэтчбек

3В тюнинг на русском

 
У нас Вы всегда можете купить запчасти для европейских, японских и корейских марок автомобилей. Благодаря сотрудничеству с крупными иностранными компаниями, мы можем в полной мере обеспечить клиента оригинальными и лицензионными автозапчастями. В кратчайшие сроки доставляем заказанные запчасти в Калининград и просто мгновенно обслуживаем заявки по товару, уже имеющемуся в наличии. Надеемся, что ценовая политика нашего интернет магазина станет весомым аргументом для сотрудничества на постоянной основе.  Запчасти авто рено 9 в украине
 Благодаря наличию у нас высококлассных специалистов, современного оборудования и отличных материалов мы можем выполнять задачи, которые не всегда по силам другим.  vypolnim arenda krana
 Колёсные диски для кайрон Теперь нужно убрать с машины всё, что может помешать окрашиванию — бамперы, поворотные указатели, фары, антенну. Всё, что можно снять — снимайте, тоже , просушите и пока отложите.  
 Opel в топ гир Наши специалисты обладают должными знаниями в данной сфере и имеют соответствующий опыт, так что вы можете быть спокойны за свой автомобиль. Кузовной ремонт, цены на который вас обязательно порадуют, позволит вернуть вашему авто прекрасный и привлекательный внешний вид! Не откладывайте на завтра ремонт своей машины, подарите ей вторую жизнь! 
 Девятка тюнинг акула где лучше покупать cyberpunk 2077  Ларгус кросс тюнинг казань

Автозапчасти круглосуточно фиат

 
Производим ремонт, диагностику АКПП, МКПП, CVT, замена ДВС, АКПП, замена масла в ДВС, АКПП, МКПП, CVT, охлаждающей жидкости, спецжидкости гидроусилителя руля и др. Гарантия при нашей установке.  Тюнинг бампер 210
 игра cyberpunk 2077 пк  Adult only 
Тонировка окон в квартире ярославль Вы сможете сэкономить 13000р, если установите у нас новые усиленные пневморукава на все 4 пневмобаллона всего за 40000р. с гарантией один год без ограничения пробега! Автозапчасти круглосуточно фиат
 Бекас авто тюнинг ружья Подготовительные работы к покраске автомобиля и сам процесс осуществляется только мастерами К2.  У них имеются сертификаты о профессиональной подготовке. Все прошли специализированные курсы, чем мы гордимся.  Карина 91 тюнинг
 Ремонт рулевых реек любой сложности. Ремонт подвески. Замена ГРМ, цепей, ремней, масла. Ремонт тормозной системы. Эвакуация. Шиномантаж. Кузовной ремон любой сложности. Электрика. Заправка кондиционеров. Замена автостекл. Высота ворот 4м  Хендай акцент тюнинг тагаз

Фольксваген поло хэтчбек круглые фары

 
У нас оборудована современная покрасочная камера. Эмали, шпаклевки, лаки, грунтовки закупаются только у проверенных поставщиков. Есть прибор автоматического подбора краски для кузова машины. Не переживайте о сложности ремонта, звоните нам, мы поможем всегда! Телефон +7(8452)33-94-01.  Ходовые огни на авто лада гранта
 Штампованные стальные диски обладают самой низкой ценой. При этом в процессе эксплуатации они быстро теряют привлекательный внешний вид. Поставляются обычно в базовой комплектации автомобиля.  Рекомендуются для использования при ограниченном бюджете в зимнее время в связке с комплектом зимней резины. Для летнего времени рекомендуется использовать кованые или литые диски с комплектом летней резины.  справка о несудимости
 Противотуманные фары для лачетти седан Само собой, расценки на покраску автомобиля варьируются в зависимости от того, красите ли Вы алкидной краской без лака, либо же красите в металлик под лак, не говоря уже о цветах-хамелеонах. В каждой мастерской, которая занимается покраской, есть специалисты, именуемые колеровщиками. Их задание – правильно подобрать с помощью специального оборудования именно тот цвет машины, который нанесен на поверхности Вашего авто. Это особенно необходимо, когда Вы красите отдельную деталь, и попросту ненужно, если нужно полностью менять цвет кузова на какой-то другой. Но об этом потом. 
 Тойота авенсис чип тюнинг Если сразу этого не заметить (пылинку заметить не так просто), то лакокрасочное покрытие на этом месте вскоре начнет трескаться.  В профессиональном автосервисе существует специальное помещение, в котором чисто, как в операционной, поэтому никакая пыль или мусор не помешают идеальному нанесению лакокрасочного покрытия. Замена лампы приборной панели ваз 2109 Дефлектор на киа сид 2014 универсал
 Ремонт автомобиля — это серьезное дело, которое стоит доверять только профессионалам. Обращаясь в ненадежный автосервис, вы рискуете собственной безопасностью и безопасностью окружающих. Особенно это касается иномарок. Ремонт иномарок лучше производить в специализированном автосервисе. Дефлектор на киа сид 2014 универсал Замена лампы приборной панели ваз 2109

usariarigan

Электросхема ВАЗ-2109 инжектор с высокой и низкой панелью: описание, фото

ВАЗ-2109 8 клапанов в первую очередь следует рассматривать как технику, которая нуждается в постоянном контроле и осмотре технического состояния. Если владелец авто самостоятельно обслуживает своего железного четырехколесного друга, то он обязательно должен знать, как работают все автомобильные комплектующие, включая и электронные элементы. Именно электронные комплектующие в инжекторе ВАЗ-2109 обеспечивают бесперебойную работу двигателя, и если хоть какой-то элемент выйдет из строя, машина не сможет справляться со своими основными обязанностями. Понять принцип работы системы управления двигателя и выявить причину неисправности в ней довольно просто, если владелец авто ознакомится с электросхемой для инжектора ВАЗ-2109.

Какие помогает решать задачи электрическая схема

Электросхема для ВАЗ-2109 инжектор, конечно, в несколько раз сложнее, чем для карбюраторных машин. Впрочем, это вовсе не удивляет, ведь в модели с распределенным впрыском топлива встроены многочисленные электронные устройства, которые, к сожалению, могут выйти из строя. Интерактивная схема помогает решить немало задач:

• предоставляет водителю информацию о функциональности всех электронных устройств;
• передает управляющий импульс к электронным элементам;
• выступает в роли электрической защиты для всех электронных устройств;
• защищает систему от короткого замыкания.

Читайте также: Установка зажигания ВАЗ-2109 карбюратор

Виды электросхем

Существует несколько вариантов схем для контроля состояния электрического оборудования ВАЗ-2109:

1. С «высокой панелью». Данная схема рассматривается как самая интерактивная и актуальная. В ней предусматривается дополнительная схема, которая предназначается для автомобильного монтажного блока.
2. С «низкой панелью». Такая схема используется для выявления неисправности в монтажном автомобильном блоке.
3. С «европанелью». Данный вариант схем предусматривает полную информацию как для внутренней схемы, так и для монтажного блока. Включает в себя также схему, которая помогает подключить европанель, то есть электрических устройств и приборов, созданных по типу «евро».

Как передается сигнал

От электронного блока по специальным проводам, которые окрашены в разные цвета, передается сигнал в систему, контролирующую функциональность двигателя.

Благодаря разной цветовой маркировке проводов, водитель может разобраться в устройстве электросхемы и найти именно тот провод, который необходим для решения той или иной задачи. Чтобы передача электрического сигнала была качественной и бесперебойной, необходимо сделать следующее:

• использовать провода с подходящим сечением;
• следить за сопротивлением контактов, которое должно быть минимальным, для съемных соединений;
• контролировать целостность изоляции электрических проводников.

На работу двигателя инжектор ВАЗ-2109, а также на его динамические характеристики в первую очередь влияет состояние электропроводки, следовательно, за ней нужно постоянно и тщательно следить.

Читайте также: Пошаговый ремонт КПП ВАЗ-2109

Ознакомившись с интеллектуальной цветной электросхемой, даже без наличия специального измерительного прибора, можно довольно просто самостоятельно найти неисправность в электропроводке, причем даже самую незначительную. К примеру:

• выяснить, из-за чего перестало работать зажигание;
• определить, почему не включается стартер;
• из-за чего у генератора недостает напряжения;
• что привело к поломке отопительной системы.

Если сечение проводника уменьшится, это приведет к ухудшению передаваемого электросигнала, что в дальнейшем поднимет и температурный показатель. Иногда внешний осмотр не поможет выявить нарушение целостности жил, и только глубокий осмотр поможет выявить такое разрушение. Целостность проводки нарушается из-за окисления контактов, а так как такой процесс неизбежен при эксплуатации машин – это значит, что их периодически необходимо чистить.

Если электросигнал будет подаваться в искаженном виде, то сбой в работе станет ощущаться во всей системе инжектора ВАЗ-2109.

Дополнительные советы от профессионалов

Принимая ко вниманию некоторые советы и рекомендации, предоставленные профессионалами, можно самостоятельно продлить срок службы автомобильной проводки:

• автовладельцы обязательно должны периодически осматривать внешнее состояние изоляции и всех разъемов, заглянув для этого под капот своего авто;
• если при осмотре будет обнаружен незначительный дефект, поврежденный провод обязательно нужно заменить, чтобы не допустить короткого замыкания. Если надлом незначителен, то можно на некоторое время обмотать его качественной изолентой, но замену на длительное время откладывать не рекомендуется;
• снять с поверхности разъема слой окислителя поможет специальное средство WD-40, которое по доступной цене можно купить в специализированом магазине;
• желательно сделать дополнительную защиту для картера двигателя, чтобы предотвратить попадание влаги на провода.

Читайте также: Почему заливает свечи на ВАЗ-2109

Обязательно нужно вытирать излишек масла с изоляции, чтобы продлить срок ее эксплуатации. Специалисты настоятельно рекомендуют обязательно менять старую или поврежденную проводку, а не ремонтировать ее, чтобы в дальнейшем избежать более серьезных поломок, которые обойдутся владельцам авто в несколько раз дороже.

История окружающей среды в процессе создания

Эта книга является продуктом 2 ^-й Всемирной конференции по истории окружающей среды, состоявшейся в Гимарайнше, Португалия, в 2014 году. В ней собраны работы авторов с пяти континентов, посвященные проблемам, поднятым в ходе прошлых мероприятий чтобы предоставить информацию, которая поможет управлять настоящим и будущим. Он показывает, как наш культурный фон и примеры прошлого территориального вмешательства могут помочь бороться с политическими и культурными ограничениями с помощью общего языка экологических выгод, не скрывая пагубных прошлых вмешательств человека.

Учитывая, что политические идеологии, такие как социализм и капитализм, а также религия, не могут предложить глобальные парадигмы для достижения общих позиций, экологически позитивный дискурс вместо экологического детерминизма может служить общим языком для преодоления блокирующих факторов, реальных или изобретенных, и избежать повторения экологических потерь.

Таким образом, для поддержания экологических парадигм и преодоления политических, культурных и экономических интересов на общественной арене срочно необходимы агенство, экологическая речь и исторические исследования.

В этой книге переплетаются размышления о нашей связи с ландшафтами, процессах естественного и научного переноса по всему миру, изменении экосистем, о том, как научные знания исторически ускоряли разрушение и позволяли лучше распределять жизненно важные ресурсы или, как это есть, в Сегодняшний мир может предложить альтернативы, которые не причинят вреда тем же жизненно важным природным ресурсам: воде, почве и воздуху. Кроме того, он показывает значимость культурных факторов как для укрощения природы в пользу человеческого комфорта, так и для роли окружающей среды в формировании культурной идентичности, которую невозможно отделить от технического вмешательства в мир.

Короче говоря, книга, во-первых, изучает прошлое, рассматривая его как набор данных о том, как среда сформировала культуру, во-вторых, пытается понять настоящее и, в-третьих, оценивает перспективы на будущее: что сохранить, что изменить и о чем мечтать. заново, учитывая, что обычных решений недостаточно для защиты жизни на нашей планете.

История окружающей среды Формирование ландшафта Развитие Колониальная история Изменение окружающей среды

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

парадигма для интеграции математического моделирования с экспериментами и численным моделированием в механобиологии

[1]	М.Ма, М. Стоянова, Г. Радемахер, С. К. Датчер, А. Браун, Р. Чжан, Структура декорированной цилиарной дублетной микротрубочки, Cell , 179 (2019), 909–922.
[2]	J. Buceta, M. Ibañes, D. Rasskin-Gutman, Y. Okada, N. Hirokawa, J. C. Izpisúa-Belmonte, динамика узловых ресничек и спецификация левой / правой оси в развитии эмбрионов ранних позвоночных, Biophys.J. , 89 (2005), 2199–2209.
[3]	Д. Верма, Ф. Менг, Ф. Сакс, С. З. Хуа, индуцированное потоком ремоделирование фокальной адгезии, опосредованное локальными стрессами и реорганизацией цитоскелета, Cell Adhes. Мигр. , 9 (2015), 432–440.
[4]	Ф.Мартино, А. Р. Перестрело, В. Винарский, С. Пальяри, Г. Форте, Клеточная механотрансдукция: от напряжения к функции, Front. Physiol. , 9 (2018), 824.
[5]	Р. Р. Феррейра, Х. Фукул, Р. Чоу, А. Вильфан, Дж. Вермот, Реснички как датчик силы — миф в реальности, J. Cell Sci. , 132 (2019), jcs213496.
[6]	Р. Рохатги, В. Дж. Снелл, Ресничная мембрана, Curr. Opin. Cell Biol. , 22 (2010), 541–546.
[7]	Р. А. Бладгуд, От центрального к рудиментарному к первичному: история недооцененной органеллы, время которой пришло.первичная ресничка, в Methods in Cell Biology, Vol. 94: Первичные реснички (ред. Р. Д. Слобода), Academic Press, Сан-Диего, (2009), 3–52.
[8]	П. Сатир, Л. Б. Педерсен, С. Т. Кристенсен, Первичная ресничка с первого взгляда, J. Cell Sci. , 123 (2010), 499.
[9]	ЧАС.Ishikawa, W. F. Marshall, Цилиогенез: построение клеточной антенны, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. , 12 (2011), 222–234,
[10]	Г. Дж. Пазур, Р. А. Бладгуд, Нацеливание белков на цилиарную мембрану, Curr. Top Dev. Биол. , (2008), 115–149.
[11]	Н.R. Silvester, Реснички tetrahymena pyriformis: дифракция рентгеновских лучей на ресничной мембране, J. Mol. Биол. , 8 (1964), 11–19.
[12]	Н. Б. Гилула, П. Сатир, Цилиарное ожерелье. специализация цилиарной мембраны, J. Cell Biol. , 53 (1972), 494–509.
[13]	П.Сатир, Н. Б. Гилула, Клеточные соединения в мерцательном эпителии жаберных пластин: локализация преципитата пироантимоната, J. Cell Biol. , 47, (1970), 468–487.
[14]	S. Temiyasathit, C.R. Jacobs, Первичная ресничка остеоцитов и ее роль в механотрансдукции кости, Ann. Акад. Sci. , 1192 (2010), 422–428.
[15]	З. Мирзаде, Я.-Г. Хан, М. Сориано-Наварро, Х. М. Гарсия-Вердуго, А. Альварес-Буйлла, Реснички организуют эпендимную плоскую полярность, J. Neurosci. , 30 (2010), 2600–2610.
[16]	С.Fisch, P. Dupuis-Williams, Ультраструктура ресничек и жгутиков — назад в будущее !, Biol. Ячейка , 103 (2011), 249–270.
[17]	Д. Смит, Э. Гаффни, Дж. Блейк, Моделирование мукоцилиарного клиренса, Respir. Physiol. Neurobiol. , 163 (2008), 178 — 188,
[18]	О.Э. Блак, А. А. Сандерс, Отсеки внутри отсека: что c. elegans могут рассказать нам о составе цилиарных субдоменов, биогенезе, функции и заболеваниях, Organogenesis , 10 (2014), 126–137.
[19]	W. M. Chong, W.-J. Ван, С.-Х. Ло, Т.-Й. Чиу, Т.-Дж. Чанг, Ю.-П. Лю и др., Микроскопия сверхвысокого разрешения выявляет связь между субдистальными придатками центриолей млекопитающих и дистальными придатками, eLife , 9 (2020), e53580.
[20]	Дж. Гарсия, Дж. Ф. Рейтер, Праймер на базальное тело мыши, Cilia , 5 (2016), 17.
[21]	К. Шиманска, К. А. Джонсон, Переходная зона: важный функциональный компартмент ресничек, Реснички , 1 (2012), 10.
[22]	Q. Wei, K. Ling, J. Hu, Существенные роли переходных волокон в контексте ресничек, Curr. Opin. Cell Biol. , 35 (2015), 98–105.
[23]	Ю.Lin, P. Niewiadomski, B. Lin, H. Nakamura, S. C. Phua, J. Jiao, et al., Химически индуцируемая диффузионная ловушка на ресничках обнаруживает барьер, подобный молекулярному сите, Nat. Chem. Биол. , 9 (2013), 437–443.
[24]	Х. Л. Ки, Дж. Ф. Дишингер, Т. Л. Блазиус, К. Дж. Лю, Б. Марголис, К. Дж. Верхей, барьер проницаемости для исключения размера и нуклеопорины характеризуют комплекс пор ресничек, который регулирует транспорт в реснички, Nat.Cell Biol. , 14 (2012), 431–437.
[25]	X. Jin, A. M. Mohieldin, B. S. Muntean, J. A. Green, J. V. Shah, K. Mykytyn и др., Цилиоплазма — это клеточный компартмент для передачи сигналов кальция в ответ на механические и химические стимулы, Cell Mol. Life Sci. , 71 (2014), 2165–2178.
[26]	Л.Espinha, D. A. Hoey, P. R. Fernandes, H. C. Rodrigues, C.R. Jacobs, Колебательный поток жидкости влияет на первичные реснички и механику микротрубочек, Cytoskeleton , 71 (2014), 435–445.
[27]	О. В. Виейра, К. Гаус, П. Веркаде, Дж. Фуллекруг, В. Л. Ваз, К. Симонс, Fapp2, образование ресничек и компартментализация апикальной мембраны в поляризованных клетках почек мадин-дарби (mdck), Proc.Natl. Акад. Sci. USA , 103 (2006), 18556–18561.
[28]	П. Г. ДеКаен, М. Деллинг, Т. Н. Вьен, Д. Э. Клэпхэм, Прямая запись и молекулярная идентификация кальциевого канала первичных ресничек, Nature , 504 (2013), 315–318.
[29]	М.Деллинг, П. Г. ДеКаен, Дж. Ф. Доернер, С. Фебвей, Д. Е. Клэпхэм, Первичные реснички — это специализированные органеллы, передающие сигналы кальция, Nature , 504 (2013), 311–314.
[30]	М. К. Рейчоудхури, М. Маклафлин, А. Дж. Рамос, Н. Монтальбетти, Р. Були, Д. Аузиелло и др., Характеристика одноканальных токов от первичных ресничек эпителиальных клеток почек, J.Биол. Chem. , 280 (2005), 34718–34722.
[31]	П. Н. Инглис, К. А. Бороевич, М. Р. Леру, Прокалывание ресничек, Trends Genet. , 22 (2006), 491–500.
[32]	Д.Wloga, J. Gaertig, Посттрансляционные модификации микротрубочек, J. Cell Sci. , 123 (2010), 3447–3455.
[33]	Л. Ли, X.-J. Ян, Ацетилирование тубулина: ответственные ферменты, биологические функции и болезни человека, Cell. Мол. Life Sci. , 72 (2015), 4237–4255.
[34]	С.Дж. Дженсен, К. А. Пул, С. Р. МакГлашан, М. Марко, З. И. Исса, К. В. Вуйчич и др., Ультраструктурная, томографическая и конфокальная визуализация первичной реснички хондроцитов in situ, Cell Biol. Int. , 28 (2004), 101–110.
[35]	И. Б. Алиева, Л. А. Горгидзе, Ю. А. Комарова, О. А. Чернобельская, И. А. Воробьев, Экспериментальная модель для изучения первичных ресничек в клетках тканевой культуры, Membr.Cell Biol. , 12 (1999), 895–905.
[36]	A. M. Mohieldin, W. A. ​​AbouAlaiwi, M. Gao, S. M. Nauli, Химическая техника для изучения ультраструктуры первичных ресничек, Sci. Док. , 5 (2015), 15982.
[37]	С.Отт, Дж. Липпинкотт-Шварц, Визуализация динамики живых первичных ресничек с использованием флуоресцентной микроскопии, Curr. Protoc. Cell Biol. , 4 (2012), 26.
[38]	К. Э. Рот, К. Л. Ридер, С. С. Баузер, Метод гибкого субстрата для просмотра клеток сбоку: некоторые in vivo свойства первичных (9 + 0) ресничек в культивируемом эпителии почек, J.Cell Sci. , 89 (1998), 457–466.
[39]	М. Адамс, У. М. Смит, К. В. Логан, К. А. Джонсон, Последние достижения в области молекулярной патологии, клеточной биологии и генетики цилиопатий, J. Med. Genet. , 45 (2008), 257–267.
[40]	Дж.Л. Бадано, Н. Мицума, П. Л. Билс, Н. Кацанис, Цилиопатии: новый класс генетических нарушений человека, Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. , 7 (2006), 125–148.
[41]	F. Hildebrandt, T. Benzing, N. Katsanis, Ciliopathies, N. Engl. J. Med. , 364 (2011), 1533–1543.
[42]	Я.Ибанез-Таллон, Н. Хайнц, Х. Омран, Бить или не бить: роль ресничек в развитии и болезни, Hum. Мол. Genet. , 12 (2003), R27 – R35.
[43]	И. Р. Веланд, А. Аван, Л. Б. Педерсен, Б. К. Йодер, С. Т. Кристенсен, Первичные реснички и сигнальные пути в развитии, здоровье и болезнях млекопитающих, Nephron.Physiol. , 111 (2009), 39–53.
[44]	А. Г. Роблинг, Д. Б. Берр, К. Х. Тернер, Разделение ежедневного механического стимула на дискретные нагрузки улучшает остеогенный ответ на нагрузку, J. Bone Miner Res. , 15, (2000), 1596–1602.
[45]	Л.К. Саксон, А. Г. Роблинг, А. Б. Кастильо, С. Мохан, К. Х. Тернер, Чувствительность скелета к механической нагрузке повышается у мышей с нулевой мутацией в рецепторе эстрогена-бета, Am. J. Physiol. Эндокринол. Метаб. , 293 (2007), E484 – E491.
[46]	Т. Л. Донахью, Т. Р. Хаут, К. Э. Йеллоули, Х. Дж. Донахью, К.Р. Джейкобс, Механочувствительность костных клеток к напряжению сдвига, вызванному колеблющимся потоком жидкости, можно модулировать с помощью хемотранспорта, J. Biomech. , 36 (2003), 1363–1371.
[47]	К. В. дер Хейден, Б. П. Хирк, Р. Крамс, Р. де Кром, К. Чен, М. Байкер и др., Эндотелиальные первичные реснички в областях нарушенного кровотока лежат в основе атеросклероза, Атеросклероз , 196 (2008), 542–550.
[48]	H. A. Praetorius, K. R. Spring, Изгиб первичной реснички mdck-клетки увеличивает внутриклеточный кальций, J. Membrane Biol. , 184 (2001), 71–79.
[49]	ЧАС.A. Praetorius, K. R. Spring, Удаление первичной реснички mdck-клетки отменяет ощущение потока, J. Membr. Биол. , 191 (2003), 69–76.
[50]	С. Ридхолм, Г. Цварц, Дж. М. Ковалевски, П. Камали-Заре, Т. Фриск, Х. Брисмар, Механические свойства первичных ресничек регулируют реакцию на поток жидкости, Am. J. Physiol.: Renal Physiol. , 298 (2010), F1096 – F1102,
[51]	E.J. Arnsdorf, P. Tummala, C.R. Jacobs, передача сигналов Wnt и связанная с n-кадгерином передача сигналов бета-катенина играют роль в механически индуцированной судьбе остеогенных клеток, PLoS One , 4 (2009), e5388.
[52]	С.M. Nauli, F. J. Alenghat, Y. Luo, E. Williams, P. Vassilev, X. Li, et al., Полицистины 1 и 2 опосредуют механочувствительность первичных ресничек почечных клеток, Nat. Genet. , 33 (2003), 129–37.
[53]	А.И. Масюк, Т.В. Масюк, П.Л. Сплинтер, Б.К. Хуанг, А.Дж. Струп, Н.Ф. ЛаРуссо, Реснички холангиоцитов обнаруживают изменения в потоке люминесцентной жидкости и передают их во внутриклеточную передачу сигналов Ca2 + и цАМФ, Гастроэнтерология , 131 (2006), 911–20 .
[54]	S. S. Pae, J. C. Saunders, Внутри- и внеклеточный кальций модулирует жесткость стереоцилий на волосковых клетках улитки цыплят, Proc. Natl. Акад. Sci. , 91 (1994), 1153–1157.
[55]	Т.Ю. Бессчетнова, Е. Колпакова-Харт, Ю. Гуань, Дж. Чжоу, Б. Р. Олсен, Дж. В. Шах, Идентификация сигнальных путей, регулирующих длину первичных ресничек, Curr. Биол. , 20 (2010), 182–187.
[56]	Э. Т. ОБрайен, Э. Д. Салмон, Х. П. Эриксон, Как кальций вызывает деполимеризацию микротрубочек, Cell Motil. Цитоскелет , 36 (1997), 125–135.
[57]	Р. Х. Диллон, Л. Дж. Фаучи, Интегративная модель внутренней механики аксонемы и внешней гидродинамики при биении ресничек, J. Theor. Биол. , 207 (2000), 415–430.
[58]	Р.Х. Диллон, Л. Дж. Фаучи, К. Омото, Математическое моделирование механики аксонем и гидродинамики в подвижности ресничек и сперматозоидов, Dyn. Продолжить. Дискретная импульсная система. Сер. A: Математика. Анальный. , 10 (2003), 745–757.
[59]	Р. Х. Диллон, Л. Дж. Фаучи, К. Омото, X. Янг, Гидродинамические модели биения жгутиков и ресничек, Ann.Акад. Sci. , 1101 (2007), 494–505.
[60]	Р. Х. Диллон, Л. Дж. Фаучи, X. Ян, Подвижность сперматозоидов и многократное биение: интегративная механическая модель, Comput. Математика. Прил. , 52 (2006), 749–758.
[61]	Л.J. Fauci, R. Dillon, Biofluidmechanics of Reproduction, Ann. Ред. Механика жидкости , 38 (2006), 371–394.
[62]	С. Герон, К. Левит-Гуревич, Трехмерная модель движения ресничек на основе внутренней структуры 9 + 2, Proc. R. Soc. Лондон. В , 268 (2001), 599–607.
[63]	С.Герон, К. Левит-Гуревич, Трехмерное движение тонких волокон, Math. Методы Прил. Sci. , 24 (2001), 1577–1603.
[64]	С. Герон, Н. Лирон, Моделирование движения ресничек и динамические взаимодействия мультицилий, Biophys. J. , 63 (1992), 1045–1058.
[65]	М.Дж. Лайтхилл, Математическая биожидкостная динамика, , т. 17 серии региональных конференций по прикладной математике, Общество промышленной и прикладной математики, 1975.
[66]	М. Дж. Лайтхилл, Флагеллярная гидродинамика, SIAM Rev. , 18 (1976), 161–230.
[67]	ЧАС.Шум, Э. А. Гаффни, Влияние податливости жгутиковых крючков на подвижность монотрихов бактерий: модельное исследование, Phys. Жидкости , 24 (2012), 061901.
[68]	X. Янг, Р. Х. Диллон, Л. Дж. Фаучи, Интегративная вычислительная модель многократного избиения, Bull. Математика. Bio. , 70 (2008), 1192–1215.
[69]	Н. Кок, А. Брикард, Ф.-Д. Делапьер, Л. Малакин, О. Д. Рур, М. Фермижье и др., Коллективное избиение искусственных микрочастиц, Phys. Rev. Lett. , 107 (2011), 014501.
[70]	А.Р. Шилд, Б. Л. Файзер, Б. А. Эванс, М. Р. Фалво, С. Уошберн, Р. Суперфайн, Биомиметические массивы ресничек генерируют одновременные режимы откачки и перемешивания, Proc. Nat. Sci. США , 107 (2010), 15670.
[71]	Э. А. Шварц, М. Л. Леонард, Р. Бизиос, С. С. Баузер, Анализ и моделирование реакции изгиба первичных ресничек на сдвиг жидкости, Am.J. Physiol.: Renal Physiol. , 272 (1997), F132 – F138,
[72]	А. Резник, У. Хопфер, Механическая стимуляция первичных ресничек, Front. Biosci. , 13 (2008), 1665–1680.
[73]	W.Лю, Н. с. Murica, Y. Duan, S. Weinbaum, B.K. Yoder, E. Schwieber, et al., Механорегуляция внутриклеточной концентрации Ca2 + ослабляется в собирательном канале мышей orpk с нарушенной моноцилией, Am. J. Physiol. Renal Physiol. , 289 (2005), F978 – F988.
[74]	Ю. Н. Янг, М. Даунс, К. Джейкобс, Динамика первичных ресничек в сдвиговом потоке, Biophys.J. , 103 (2012), 629–639,
[75]	С. А. БАБА, Жесткость при изгибе и постоянная упругости ресничек, J. Exp. Биол. , 56 (1972), 459–467,
[76]	Т.Г. Фай, Л. Мохапатра, П. Кар, Дж. Кондев, А. Амир, Регулирование длины нескольких жгутиков, которые самостоятельно собираются из общего пула компонентов, Elife , 8 (2019), e42599.
[77]	E. Verghese, R. Weidenfeld, J. F. Bertram, S. D. Ricardo, J. A. Deane, Почечные реснички обнаруживают изменения длины после повреждения канальцев и присутствуют на ранних этапах восстановления эпителия, Nephrol.Набирать номер. Трансплантат , 23 (2008), 834–841.
[78]	Л. Ван, Р. Вайденфельд, Э. Вергезе, С. Д. Рикардо, Дж. А. Дин, J. Anat. , 213 (2008), 79–85.
[79]	С.J. Han, H. S. Jang, J. I. Kim, J. H. Lipschutz, K. M. Park, Односторонняя нефрэктомия удлиняет первичные реснички в оставшейся почке за счет активных форм кислорода, Sci. Реп. , 2281.
[80]	К. Г. Баттл, Механика и динамика первичной реснички , докторская диссертация, 2013.
[81]	ЧАС.Фельгнер, Р. Франк, М. Шлива, Жесткость микротрубочек при изгибе, измеренная с помощью оптического пинцета, J. Cell Sci. , 109 (1996), 509–516.
[82]	М. Кикумото, М. Курачи, В. Тоса, Х. Таширо, Жесткость при изгибе отдельных микротрубочек, измеренная с помощью силы выпучивания с оптическими ловушками, Biophys. Дж., 90 (2006), 1687–1696.
[83]	Т. Л. Хокинс, Д. Септ, Б. Могесси, А. Штраубе, Дж. Л. Росс, Механические свойства дважды стабилизированных филаментов микротрубочек, Biophys. J. , 104 (2013), 1517–1528.
[84]	Ю.Гао, Дж. Ван, Х. Гао, Персистентная длина микротрубочек на основе континуальной модели анизотропной оболочки, J. Comput. Теор. Nanosci. , 7 (2010), 1227–1237.
[85]	Х. Лю, Ю. Чжоу, Х. Гао, Дж. Ван, Аномальное поведение микротрубочек при изгибе, Biophys. J. , 102 (2012), 1793–1803,
[86]	Э.Мемет, Ф. Хилицки, М. А. Моррис, В. Дж. Швенгер, З. Догич, Л. Махадеван, Микротрубочки размягчаются из-за уплощения поперечного сечения, Elife , 7 (2018), e34695.
[87]	А. Резник, Стабилизация Hif ослабляет первичные реснички, PloS One , 11 (2016), e0165907.
[88]	Б.Микки, Дж. Ховард, Жесткость микротрубочек повышается с помощью стабилизаторов., J. Cell Biol. , 130 (1995), 909–917.
[89]	E. Verghese, J. Zhuang, D. Saiti, S. D. Ricardo, J. A. Deane, Исследование повреждения эпителия почек in vitro предполагает, что длина первичных ресничек регулируется механизмами, индуцируемыми гипоксией, Cell Biol., 35 (2011), 909–913.
[90]	J. Flaherty, Z. Feng, Z. Peng, Y. N. Young, A. Resnick, Первичные реснички имеют персистентную длину, зависящую от длины, Biomech. Моделирование механобиол. , 19 (2019), 445–460,
[91]	Дж.M. Lehman, E. J. Michaud, T. R. Schoeb, Y. Aydin-Son, M. Miller, B. K. Yoder, Мышь с поликистозом почек дубового гребня: моделирование цилиопатий мышей и людей, Dev. Дин. , 237 (2008), 1960–1971.
[92]	Дж. Р. Форман, С. Камар, Э. Пачи, Р. Н. Сэндфорд, Дж. Кларк, Замечательная механическая прочность полицистина-1 подтверждает прямую роль в механотрансдукции, J.Мол. Биол. , 349 (2005), 861–871.
[93]	Ф. Цянь, В. Вэй, Г. Гермино, А. Оберхаузер, Наномеханика внеклеточной области полицистина-1, J. Biol. Chem. , 280 (2005), 40723–40730.
[94]	Д.Merrick, C. A. Bertuccio, H. C. Chapin, M. Lal, V. Chauvet, M. J. Caplan, Расщепление полицистином-1 и регуляция транскрипционных путей, Pediatric Nephrology , 29 (2014), 505–511.
[95]	К. М. Та, Т. Н. Виен, Л. К. Нг, П. Г. ДеКаен, Структура и функция полицистиновых каналов в первичных ресничках, Cell.Сигнализация , 109626.
[96]	П. Г. ДеКаен, Х. Лю, С. Абирия, Д. Э. Клэпхэм, Атипичная кальциевая регуляция ионного канала полицистина pkd2-l1, Elife , 5 (2016), e13413.
[97]	Дж.R. Broekhuis, K. J. Verhey, G. Jansen, Регулирование длины ресничек и внутричерепного транспорта с помощью rck-киназ ick и mok в почечных эпителиальных клетках, PLoS One , 9 (2014), e108470.
[98]	К. Миёси, К. Касахара, И. Миядзаки, М. Асанума, Обработка литием удлиняет первичные реснички в мозге мыши и в культивируемых клетках, Biochem.Биофиз. Res. Commun. , 388 (2009), 757–762.
[99]	Y. Ou, Y. Ruan, M. Chen, J. J. Moser, J. B. Rattner, F. A. van der Hoorn, Аденилатциклаза регулирует удлинение первичных ресничек млекопитающих, Exp. Cell Res. , 315 (2009), 2802–2817.
[100]	Н.Sharma, Z. A. Kosan, J. E. Stallworth, N. F. Berbari, B. K. Yoder, Растворимые уровни цитозольного тубулина регулируют контроль длины ресничек, Mol. Биол. Ячейка , 22 (2011), 806–816.
[101]	M. Spasic, C.R. Jacobs, Удлинение первичных ресничек увеличивает клеточную механочувствительность, Eur. Cell Mater. , 33 (2017), 158–168.
[102]	М. Е. Даунс, А. М. Нгуен, Ф. А. Херцог, Д. А. Хои, К. Р. Джейкобс, Экспериментальный и вычислительный анализ отклонения первичных ресничек под действием потока жидкости, Comput. Методы Биомечан. Биомед. Англ. , 17 (2012), 2–10,
[103]	С.Позрикидис, Сдвиговое течение через цилиндрические стержни, прикрепленные к подложке, Fluids Struct. , 26 (2010), 393–405.
[104]	C. Pozrikidis, Сдвиговое течение через тонкие эластичные стержни, прикрепленные к плоскости, Int. J.Solids Struct. , 48 (2011), 137–143.
[105]	Ю.Н. Янг, Динамика первичной реснички в периодических во времени потоках, Com Contemporary Math. , 628 .
[106]	A. S. Popel, B. Anvari, W. E. Brownell, A. A. Spector, Моделирование механики тросов, натянутых на наружную мембрану волосковой клетки улитки, J. Biomechanical Eng. , 130 (2008), 031007.
[107]	К.Р. Шумахер, А. С. Попел, Б. Анвари, В. Э. Браунелл, А. А. Спектор, Вычислительный анализ эксперимента по вытягиванию привязи для исследования взаимодействия плазматической мембраны и цитоскелета в клетках, Phys. Ред. E , 80 (2009), 041905.
[108]	Ю. К. Лим, М. Т. Куллинг, Д. С. Лонг, Вычислительные модели первичной реснички и механотрансмиссии эндотелия, Biomech.Моделирование механобиол. , 14 (2014), 665–678,
[109]	Справочное руководство COMSOL Multiphysics , COMSOL Inc., Стокгольм. Доступно по адресу: www.comsol.com.
[110]	П.С. Матье, Дж. С. Бодл, Э. Г. Лобоа, Первичная механотрансдукция деформации растяжения в 3d-культуре ресничек: анализ методом конечных элементов амплификации деформации, вызванной деформацией растяжения, приложенной к первичной ресничке, встроенной в коллагеновый матрикс, J. Biomechan. , 47 (2014), 2211–2217, г.
[111]	Т. Дж. Воган, К. А. Маллен, С.W. Verbruggen, L. M. McNamara, Механочувствительность костных клеток к стимуляции потока жидкости: модель взаимодействия жидкость-структура, характеризующая роль интегриновых прикреплений и первичных ресничек, Biomech. Моделирование механобиол. , 14 (2014), 703–718,
[112]	Х. Хайери, С. Баррето, Д. Лакруа, Первичная механика ресничек влияет на механочувствительность клеток: компьютерное исследование, J.Теор. Биол. , 379 (2015), 38–46,
[113]	Дж. Цуй, Ю. Лю, Б. М. Фу, Численное исследование динамики первичных ресничек в пульсирующих потоках методом Больцмана на погруженной граничной решетке, Biomech. Моделирование механобиол. , 19 (2019), 21–35,
[114]	Ю.Н. Янг, Л. К. Эспинья, А. М. Нгуен, К. Р. Джейкобс, Мультимасштабное моделирование первичных ресничек, в Мультимасштабное моделирование в биомеханике и механобиологии , Springer London, (2014), 87–110.
[115]	С. Сан, Р. Л. Фишер, С. С. Баузер, Б. Т. Пентекост, Х. Суи, Трехмерная архитектура эпителиальных первичных ресничек, Proc.Natl. Акад. Sci. , 116 (2019), 9370–9379,
[116]	Н. Стивенсон, Молекулярная структура первичных ресничек, выявленная с помощью криоэлектронной томографии. Доступно по ссылке: https://doi.org/10.1242%2Fprelights.18131.
[117]	Ю.Ван, Э. Л. Ботвиник, Ю. Чжао, М. В. Бернс, С. Усами, Р. Ю. Цзянь и др., Визуализация механической активации src, Nature , 434 (2005), 1040–1045,
[118]	Мохаммад Р. К. Мофрад, Роджер Д. Камм, Cellular Mechanotransduction , Cambridge University Press, 2009.
[119]	К.Шрирам, Дж. Г. Лафлин, П. Рангамани, Д. М. Тартаковский, Производство оксида азота эндотелиальными клетками, вызванное сдвигом, Biophys. J. , 84 (2003), 4087––4101,
[120]	Е. Д. Костанцо, А. И. Баракат, Г. Понтрелли, Влияние потока на концентрацию АТФ / АДФ на поверхности эндотелиальных клеток: взаимодействие между напряжением сдвига и переносом массы, ZAMM-J.Прил. Математика. Mechan./Zeitschrift für Angewandte Math. Мех. , 98 (2018), 2222–2222.
[121]	B. Mazzag, A. I. Barakat, Влияние шумного потока на механотрансдукцию эндотелиальных клеток: вычислительное исследование, Ann. Биомед. Англ. , 39 (2010), 911–921.
[122]	Б.M. Mazzag, J. S. Tamaresis, A. I. Barakat, Модель для восприятия и передачи напряжения сдвига в эндотелиальных клетках сосудов, Biophys. J. , 84 (2003), 4087–4101.
[123]	М. Беург, Ж.-Х. Нам, А. Кроуфорд, Р. Феттиплейс, Действие кальция на механику пучков волос в волосковых клетках улитки млекопитающих, Biophys.J. , 94 (2008), 2639–2653.
[124]	Смит С., Чедвик Р. С. Моделирование реакции связки стереоцилий внутренних волосковых клеток на акустический стимул, PLoS ONE , 6 (2011), e18161.
[125]	ЧАС.Чжан, З. Шен, Б. Хоган, А. И. Баракат, К. Мисбах, Высвобождение АТФ эритроцитами в потоке: Модель и симуляции, Biophys. J. , 115 (2018), 2218–2229.
[126]	Р. Хинч, Дж. Гринштейн, Р. Уинслоу, Многоуровневые модели местного контроля индуцированного кальцием высвобождения кальция, Progress Biophys. Мол. Биол. , 90 (2006), 136–150.
[127]	Р. Хинч, Дж. Гринштейн, А. Тансканен, Л. Сюй, Р. Уинслоу, Упрощенная модель местного контроля индуцированного кальцием высвобождения кальция в миоцитах желудочков сердца, Biophys. J. , 87 (2004), 3723–3736.
[128]	В.Нгуен, Р. Матиас, Г. Смит, Стохастический сетевой дескриптор автоматов для моделей цепей Маркова мгновенно связанных внутриклеточных каналов CA, Bull. Математика. Биол. , 67 (2005), 393–432.
[129]	Э. А. Соби, К. В. Дилли, Дж. Дос Сантос Крус, В. Дж. Ледерер, М. С. Джафри, Прекращение образования сердечных искр Ca2 +: исследовательская математическая модель вызванного кальцием высвобождения кальция, Biophys.J. , 83 (2002), 59–78.
[130]	Г. С. Уильямс, М. А. Уэртас, Е. А. Соби, М. С. Джафри, Г. Д. Смит, Подход плотности вероятности к моделированию локального контроля индуцированного кальцием высвобождения кальция в сердечных миоцитах, Biophys. J. , 92 (2007), 2311–2328.
[131]	А.Шерман, Г. Д. Смит, Л. Дай, Р. М. Миура, Асимптотический анализ буферной диффузии кальция вблизи точечного источника, SIAM J. Appl. Математика. , 61 (2001), 1816–1838.
[132]	Г. Смит, Аналитический стационарный раствор для приближения быстрой буферизации вблизи открытого канала ca2 +, Biophys. J. , 71 (1996), 3064–3072.
[133]	М. Д. Бутман, М. Дж. Берридж, Х. Родерик, Передача сигналов кальция: больше мессенджеров, больше каналов, больше сложности, Curr. Биол. , 12 (2002), R563 – R565.
[134]	Д.Э. Клэпхэм, Передача сигналов кальция, Cell , 80 (1995), 259–268.
[135]	М. М. Малекар, А. Г. Эдвардс, В. Э. Луш, Г. Т. Лайнс, Изучение диадических структурно-функциональных отношений: обзор текущих подходов к моделированию и новые взгляды на ca2 + (неправильное) обращение, Clin. Med. Аналитические данные: Кардиология , 11 (2017), 117954681769860,
[136]	П.A. Naik, K. R. Pardas, Модель конечных элементов для изучения влияния na + / k + насоса и na + / ca2 + обменника на распределение кальция в ооцитах в присутствии буферов, Asian J.f Math. Стат. , 7 (2014), 21–28.
[137]	A. Jha, N. Adlakha, Двумерная модель конечных элементов для изучения нестационарной диффузии Ca2 + в нейроне с участием ER LEAK и SERCA, Int.J. Biomath. , 08 (2015), 1550002.
[138]	П. А. Найк, К. Р. Пардасани, Трехмерная модель конечных элементов для изучения влияния кальциевого канала RyR, утечки ER и насоса SERCA на распределение кальция в клетке ооцита, Int. J. Comput. Методы , 16 (2018), 1850091.
[139]	А.И. Баракат, Реагирование эндотелия сосудов на напряжение сдвига: потенциальная роль ионных каналов и клеточного цитоскелета, Int. J. Mol. Med. , 4 (1999), 323–332.
[140]	К. Копос, А. Могильнер, Гибридная стохастико-детерминированная механохимическая модель поляризации клеток, Мол. Биол. Ячейка , 31 (2020), 1551–1649.
[141]	С. С. М. Конда, Дж. Н. Брантли, К. В. Белявски, Д. Е. Макаров, Химические реакции, модулируемые механическим напряжением: Расширенная теория колокола, J. Chem. Phys. , 135 (2011), 164103.
[142]	Д.Х. Макленнан, У. Дж. Райс, Н. М. Грин, Механизм транспорта Ca 2+ сарко (эндо) плазматическим ретикулумом ca2 + -ATPases, J. Biol. Chem. , 272 (1997), 28815–28818.
[143]	М. Деллинг, А. А. Инджикулиан, Х. Лю, Й. Ли, Т. Се, Д. П. Кори, Д. Э. Клэпхэм, Первичные реснички не являются чувствительными к кальцию механосенсорами, Nature , 531 (2016), 656–660.
[144]	Е. Х. Дж. Вершурен, К. Кастенмиллер, Д. Дж. М. Петерс, Ф. Дж. Арджона, Р. Дж. М. Биндельс, Дж. Г. Дж. Хендероп, Определение тубулярного кровотока и почечный транспорт электролитов, Nat. Rev. Nephrology , 16 (2020), 337–351.
[145]	ГРАММ.Bossis, J. F. Brady, Самодиффузия броуновских частиц в концентрированных суспензиях при сдвиге, J. Chem. Phys. , 87 (1987), 5437–5448.
[146]	А. Флетчер, Дж. Осборн, Семь задач в многомасштабном моделировании многоклеточных тканей, препринт, 2020070022. Доступно по адресу: https://www.preprints.org/manuscript/202007.0022 / v1.
[147]	Е. К. Владар, Д. Антич, Дж. Д. Аксельрод, Сигнализация плоской клеточной полярности: компас развивающейся клетки, Cold Spring Harbor Perspect. Биол. , 1 (2009), а002964.
[148]	Дж.М. Райнер, Дифференциация, старение и терминальная дифференциация: семантический анализ, J. Theor. Биол. , 105 (1983), 545–552.

Одобренные FDA препараты, защищающие нейроны млекопитающих от токсичности глюкозы. Медленное старение в зависимости от Cbp и защита от протеотоксичности

Abstract

Скрининг библиотеки лекарств с известными профилями безопасности для людей дал 30 лекарств, которые надежно защищали нейроны млекопитающих от токсичности глюкозы.Последующий скрининг показал, что 6 из этих 30 препаратов увеличивают продолжительность жизни у C. elegans : кофеин, циклопироксоламин, дубильная кислота, парацетамол, бацитрацин и байкалеин. Каждый препарат значительно снижал возрастное ускорение смертности. Эти защитные эффекты блокировались ингибированием РНКи cbp-1 только у взрослых, что также блокирует защитные эффекты ограничения в питании. Только 2 препарата, кофеин и дубильная кислота, демонстрировали аналогичную зависимость от DAF-16.Кофеин, дубильная кислота и бацитрацин также уменьшали патологию в трансгенной модели протеотоксичности, связанной с болезнью Альцгеймера. Эти результаты дополнительно подтверждают ключевую роль токсичности глюкозы в развитии возрастных патологий и CBP-1 в защите от возрастных патологий. Эти результаты также предоставляют новые свинцовые соединения с известными профилями безопасности для лечения возрастных заболеваний человека, включая болезнь Альцгеймера и диабетические осложнения.

Образец цитирования: Lublin A, Isoda F, Patel H, Yen K, Nguyen L, Hajje D, et al.(2011) Одобренные FDA препараты, которые защищают нейроны млекопитающих от токсичности глюкозы. Медленное старение зависит от Cbp и защищает от протеотоксичности. PLoS ONE 6 (11): e27762. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762

Редактор: Джовамбаттиста Пани, Медицинская школа Католического университета, Италия

Поступила: 30 августа 2011 г .; Одобрена: 24 октября 2011 г .; Опубликовано: 16 ноября 2011 г.

Авторские права: © 2011 Lublin et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа финансировалась Национальным институтом здравоохранения, грант 1R01HD060914-01. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Многообещающее значение исследований старения состоит в том, что вмешательства, направленные на фундаментальные процессы старения, могут имитировать широкие защитные эффекты ограничения питания от возрастных патологий (например, активация сиртуинов ресвератролом [1]). Кроме того, открытие того, что определенные лекарства увеличивают продолжительность жизни, привело к новому пониманию роли, которую мишени этих лекарств играют в процессе старения. Например, скрининг препаратов различных функциональных классов и структур привел к открытию, что противосудорожные препараты увеличивают продолжительность жизни у C.elegans , подтверждая неожиданную роль нейрональной активности в определении продолжительности жизни [2]. Точно так же скрининг более 88000 соединений привел к открытию, что антидепрессант миансерин увеличивает продолжительность жизни C. elegans , подтверждая новую роль серотонина в определении продолжительности жизни [3]. Другие исследования в C. elegans роли пути TOR в определении продолжительности жизни [4] привели к открытию, что рапамицин продлевает продолжительность жизни у мышей [5], что существенно подтверждает, что путь mTOR играет ключевую роль в старении млекопитающих и обеспечивает ведущее соединение при различных возрастных заболеваниях, особенно при раке.

Мы недавно сообщили, что защитные эффекты диетического ограничения и устранения инсулиноподобного пути требуют индукции транскрипционного коактиватора Creb-связывающего белка (Cbp), экспрессия которого в гипоталамусе мышей также составляет более 80% вариабельность продолжительности жизни у 5 линий мышей [6]. Это исследование также показало, что защитные эффекты диетического ограничения и Cbp опосредуются метаболическим сдвигом от использования глюкозы к бета-окислению [6].Эти и другие наблюдения [7], [8] предполагают, что лекарства, которые защищают от токсичности глюкозы, будут правдоподобно имитировать многие защитные эффекты ограничения питания, включая снижение возрастного ускорения смертности [9]. Мы также предположили, что защитные эффекты таких препаратов будут зависеть от CBP-1 и, возможно, DAF-16 [6].

Для проверки этой гипотезы мы разработали высокопроизводительный скрининг для обнаружения лекарств, которые защищают нейроны млекопитающих от токсичности глюкозы, поскольку, как указано выше, все больше данных указывает на то, что нейроны играют ключевую роль в старении и защитном эффекте ограничения питания [10 ].Мы сосредоточились на библиотеке лекарств с установленными профилями безопасности для людей, в основном на лекарствах, одобренных для использования людьми FDA, поскольку такие лекарства будут наиболее легко переведены для клинического использования [11]. Лекарства, обладающие защитным действием в нейронах млекопитающих, затем были проверены на активность по увеличению продолжительности жизни, снижению возрастного ускорения смертности и уменьшению патологии в трансгенной модели протеотоксичности при болезни Альцгеймера (CL2006) [12]. Наконец, мы оценили, зависят ли защитные эффекты этих препаратов от DAF-1 6 или CBP-1.

Результаты

Тридцать препаратов, защищающих нейроны млекопитающих от токсичности глюкозы

Многие данные свидетельствуют о том, что метаболизм и токсичность глюкозы способствуют как старению [8], так и диабетическим осложнениям [13]. Поэтому мы предположили, что лекарства, которые уменьшают вызванную глюкозой уязвимость к окислительному стрессу, также будут защищать от токсичности во время старения. Чтобы обнаружить такие лекарства, мы разработали тест для оценки токсичности нейронов, вызванной глюкозой [14].Первичный скрининг с использованием анализа жизнеспособности нейронов на основе красителей позволил выявить 42 препарата, которые значительно повышали жизнеспособность при 15 мМ глюкозы (p <0,05,> 50% повышение жизнеспособности). Затем эти 42 защитных препарата были проверены с использованием вторичного анализа, измеряя высвобождение лактатдегидрогеназы в среду в качестве маркера гибели клеток. Тридцать из этих 42 препаратов значительно снижали гибель нейронов при 15 мМ глюкозы (таблица 1). Затем для каждого лекарственного средства были построены кривые «доза-ответ», которые подтвердили, что все препараты повышали жизнеспособность нейронов при 15 мМ глюкозы в присутствии окислительного стресса (таблица 1 и рисунок S1).

Кофеин увеличивает продолжительность жизни и замедляет старение в зависимости от DAF-16 и CBP-1 и задерживает протеотоксичность

Чтобы оценить, будут ли эти препараты защищать от старения, влияние каждого препарата на продолжительность жизни было оценено у взрослых N2 C. elegans в концентрациях 0,01, 0,1 и 1%. Семь из тридцати препаратов вызывали значительное увеличение продолжительности жизни по крайней мере для одной концентрации (часто лекарства увеличивали продолжительность жизни при одной концентрации и сокращали продолжительность жизни при более высокой концентрации).После того, как первоначальный скрининг показал, что по крайней мере одна концентрация этих препаратов увеличивает продолжительность жизни, защитные эффекты каждого препарата в оптимальной дозе были подтверждены с использованием по крайней мере двух более подробных анализов кривых выживаемости у червей дикого типа, а также у трансгенных животных Abeta. модель протеотоксичности болезни Альцгеймера. Например, кофеин в дозе 0,1% увеличивал максимальную продолжительность жизни на 52% (рисунок 1A) (таблица 3), а также значительно увеличивал среднюю продолжительность жизни (p <0,01 по логарифмическому критерию Мантела-Кокса; n = 45) (рисунок 1A).Защитные эффекты кофеина были полностью заблокированы ингибированием либо DAF-16 (рис. 1B), либо CBP-1 (рис. 1C) с помощью РНКи. Наконец, 0,1% кофеин также значительно отсрочил патологию в трансгенной модели протеотоксичности Abeta C. elegans при болезни Альцгеймера (p <0,01; n = 30). Кофеин также снижает возрастное ускорение смертности на 53%, и этот защитный эффект также блокируется ингибированием РНКи CBP-1 или DAF-16 (таблица 2).

Рис. 1. Кофеин увеличивает максимальную и среднюю продолжительность жизни в зависимости от DAF-16 и CBP-1 и задерживает токсичность в трансгенной модели болезни Альцгеймера.

A. Кофеин (0,1%) увеличивает максимальную и среднюю продолжительность жизни (P <0,01). B. Кофеин не увеличивает продолжительность жизни, если daf-16 ингибируется РНКи. C. Кофеин не увеличивает продолжительность жизни, если cbp-1 ингибируется РНКи. D. Паралич задерживается, и выживаемость Abeta Tg увеличивается при использовании 0,1% кофеина по сравнению с носителем (P <01).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.g001

Циклопирокс увеличивает продолжительность жизни и замедляет старение, но не задерживает протеотоксичность

Циклопироксоламин (0.01%), используемый для лечения дерматологических грибковых инфекций, также увеличивал максимальную продолжительность жизни на 52% (таблица 3) и значительно увеличивал среднюю продолжительность жизни (p <0,01 по логарифмическому критерию Мантела-Кокса; n = 45) (рисунок 2A). В отличие от кофеина, циклопирокс увеличивал продолжительность жизни, даже когда daf-16 ингибировался РНКи (рис. 2B) (p <0,01; n = 30). Как и другие испытанные препараты, ингибирование cbp-1 с помощью РНКи блокировало действие циклопирокса, увеличивая максимальную продолжительность жизни. Однако, в отличие от других препаратов в этом исследовании, влияние циклопирокса на среднюю продолжительность жизни, хотя и уменьшалось, все же было значительным (p <0.01; n = 30). Кроме того, как и кофеин, циклопирокс снижал возрастное ускорение смертности (таблица 2). Интересно, что ингибирование как daf-16 , так и cbp-1 не только блокировало этот защитный эффект, но даже, по-видимому, демонстрировало токсический эффект циклопирокса, увеличивая возрастное ускорение смертности, сопровождаемое поразительным снижением исходной смертности. (Таблица 2). Аналогичный эффект наблюдался для кофеина, хотя он не достиг статистической значимости (таблица 2).В отличие от кофеина, циклопирокс не защищает от патологии, связанной с протеотоксичностью (рис. 2D), и фактически при концентрации 1% ускоряет эту патологию (не показано).

Рис. 2. Циклопироксоламин увеличивает продолжительность жизни N2 независимо от CBP-1 и DAF-16, но не устраняет токсичность A-бета.

A. Продолжительность жизни N2 увеличивается при 0,01% циклопироксоламина по сравнению с носителем (P <0,01). B. Выживание daf-16 (RNAi) увеличивается с.01% циклопироксоламина по сравнению с носителем (P <0,01). C. Выживаемость cbp-1 (RNAi) увеличивается с 0,01% циклопироксоламином по сравнению с необработанным контролем (P <0,01). D. Выживаемость Abeta Tg не изменилась при 0,01% циклопироксоламине по сравнению с носителем.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.g002

Дубильная кислота увеличивает продолжительность жизни и замедляет старение в зависимости от DAF-16 и CBP-1 и задерживает протеотоксичность

Дубильная кислота (0,01%), хорошо растворимый полифенол, увеличила максимальную продолжительность жизни на 59% (таблица 3) и значительно увеличила среднюю продолжительность жизни (P <0.01 по логарифмическому ранговому тесту Мантела-Кокса; n = 45) (рисунок 3A). Как и в случае с кофеином, ингибирование DAF-16 (рис. 3B) или CBP-1 (рис. 3C) блокировало действие дубильной кислоты на увеличение продолжительности жизни. Как и в случае с кофеином и циплопироксом, дубильная кислота также снижала возрастное ускорение смертности, а ингибирование либо CBP-1, либо DAF-16 предотвращало этот защитный эффект (Таблица 2). Дубильная кислота также вызвала поразительную задержку начала патологии, связанной с протеотоксичностью, так что на 13-й день только 15% контрольных червей оставались подвижными по сравнению с 45% червей, обработанных дубильной кислотой (P <0.01; n = 30) (рисунок 3D). Однако дубильная кислота в концентрации 1% значительно сокращает продолжительность жизни.

Рис. 3. Дубильная кислота увеличивает продолжительность жизни N2 в зависимости от CBP-1 и DAF-16 и снижает токсичность Abeta.

A. Долговечность N2 увеличивается с 0,01% дубильной кислоты по сравнению с носителем (P <0,01). B. Выживание daf-16 (РНКи) не изменилось при 0,01% дубильной кислоты по сравнению с носителем. C. Выживаемость cbp-1 (RNAi) не изменилась с 0,01% дубильной кислоты по сравнению с необработанным контролем.D. Выживаемость A-бета Tg увеличивается при 0,01% дубильной кислоты по сравнению с носителем (P = 0,01).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.g003

Ацетаминофен увеличивает продолжительность жизни в зависимости от CBP-1 и не задерживает протеотоксичность

Ацетаминофен (0,01%), нестероидный противовоспалительный препарат, увеличил максимальную продолжительность жизни на 66% (таблица 3) и значительно увеличил среднюю продолжительность жизни (P <0,01; N = 45) (рисунок 4A). Ингибирование DAF-16 не препятствовало эффекту ацетаминофена по увеличению продолжительности жизни (фиг. 4B), но ингибирование CBP-1 полностью предотвращало защитные эффекты ацетаминофена (фиг. 4C).Ацетаминофен отличался от описанных выше препаратов тем, что увеличение продолжительности жизни не было связано со снижением ускорения смертности при стандартных условиях (таблица 2). Однако при ингибировании daf-16 ацетаминофен значительно снижал ускорение смертности (таблица 2), что дополнительно подтверждает, что защитный эффект этого препарата не зависит от DAF-16. Напротив, когда было подавлено cbp-1 , ацетаминофен, если что-либо, увеличивал уровень смертности, что снова подтверждает, что защитные эффекты ацетаминофена зависят от CBP-1.Однако ацетаминофен не смог отсрочить начало патологии, связанной с протеотоксичностью. При более высокой концентрации (1%) ацетаминофен значительно сокращает продолжительность жизни (не показано).

Рис. 4. Ацетаминофен увеличивает продолжительность жизни N2 в зависимости от CBP-1, но не зависит от DAF-16, но не устраняет токсичность Abeta.

A. Долговечность N2 увеличивается с 0,1% ацетаминофена по сравнению с носителем (P <0,01). Б. Выживаемость daf-16 (РНКи) увеличивается с 0,1% ацетаминофена по сравнению сноситель (P <0,01). C. Выживаемость cbp-1 (РНКи) не изменилась с 0,1% ацетаминофеном по сравнению с необработанным контролем. D. Выживание Abeta Tg не изменилось при использовании 0,1% ацетаминофена по сравнению с носителем.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.g004

Бацитрацин увеличивает продолжительность жизни в зависимости от CBP-1 и задерживает протеотоксичность

Бацитрацин (1%), антибиотик для местного применения, увеличил максимальную продолжительность жизни на 74% (таблица 3) и значительно увеличил среднюю продолжительность жизни (рисунок 5A) (P <0.01; n = 45). Ингибирование DAF-16 снижает продлевающий жизнь эффект бацитрацина, но не блокирует его полностью (рис. 5В; p <0,01; n = 35). Напротив, ингибирование cbp-1 полностью блокировало продлевающий жизнь эффект бацитрацина (фиг. 5C). Как и ацетаминофен, бацитрацин увеличивал продолжительность жизни без значительного снижения возрастного ускорения смертности (таблица 2). Однако бацитрацин действительно снижал ускорение смертности при ингибировании daf-16 (что увеличивало уровень смертности), эффект, не наблюдаемый для cbp-1 , подавлялся (таблица 2).Эти результаты дополнительно демонстрируют, что защитные эффекты бацитрацина не зависят от DAF-16, но зависят от CBP-1. Бацитрацин также значительно задерживал патологию, связанную с протеотоксичностью (P> 0,02; n = 30).

Рис. 5. Бацитрацин увеличивает продолжительность жизни N2 в зависимости от CBP-1, но не зависит от DAF-16, и снижает токсичность Abeta.

A. Продолжительность жизни N2 увеличивается при использовании 01% бацитрацина по сравнению с носителем (P <0,01). B. Выживаемость daf-16 (РНКи) увеличивается с 01% бацитрацином по сравнению странспортное средство (P = 0,01). C. Выживаемость cbp-1 (РНКи) не изменилась с 01% бацитрацином по сравнению с необработанным контролем. D. Выживание Abeta Tg увеличивается при использовании 01% бацитрацина по сравнению с носителем (P <0,02).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.g005

Байкалеин увеличивает продолжительность жизни и замедляет старение, зависящее от CBP-1, но не оказывает значительного замедления протеотоксичности

Байкалеин (0,1%), противовоспалительный компонент традиционного китайского травяного препарата [15], увеличил максимальную продолжительность жизни на 52% и значительно увеличил среднюю продолжительность жизни (Рисунок 6A; p <0.01; n = 45). Хотя ингибирование DAF-16 существенно снижает защитные эффекты байкалеина, препарат все же значительно увеличивает продолжительность жизни, когда daf-16 ингибируется РНКи (Фиг.6B; p = 0,01; n = 28). Напротив, cbp-1 РНКи полностью блокировали увеличение продолжительности жизни, продуцируемое байкалеином (рис. 6С). Интересно, что даже несмотря на то, что байкалеин защищает от токсичности Abeta в нейронах млекопитающих [16], в концентрации, увеличивающей продолжительность жизни, соединение не значительно снижает патологию, связанную с протеотоксичностью Abeta у C.elegans (рис. 6D).

Рис. 6. Байкалеин увеличивает продолжительность жизни N2 в зависимости от CBP-1, но не зависит от DAF-16, но не устраняет токсичность Abeta.

A. Долговечность N2 увеличивается с 0,1% байкалеина по сравнению с носителем (P <0,01). B. Выживаемость daf-16 (РНКи) увеличивается при использовании 0,1% байкалеина по сравнению с носителем (P = 0,01). C. Выживаемость cbp-1 (RNAi) снижается с 0,1% байкалеином по сравнению с необработанным контролем (P <0,01). D. Выживание Abeta Tg не изменилось на 0.1% байкалеина по сравнению с носителем.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.g006

Обсуждение

В настоящих исследованиях 1,5% проверенных лекарств защищали от токсичности глюкозы, и поразительные 23% этих лекарств значительно увеличивали продолжительность жизни. Для сравнения, при объективном скрининге 88000 соединений только 0,13% лекарств увеличили продолжительность жизни (половина из которых увеличила продолжительность жизни менее чем на 10%). Из лекарств, увеличивающих продолжительность жизни, 86% замедляют скорость старения, на что указывает анализ статистики смертности [17] с использованием недавно утвержденного алгоритма [18].Ингибирование cbp-1 блокировало защитные эффекты этих препаратов во время старения, так же как оно подавляет защитные эффекты ограничения диеты (но не холода) [6]. Напротив, только некоторые из их защитных эффектов зависели от DAF-16, так же как защитные эффекты только некоторых методов ограничения питания зависят от DAF-16 [6], [19]. Эти наблюдения согласуются с другими доказательствами того, что метаболизм и токсичность глюкозы играют важную роль в управлении процессом старения [7], [8], [20], как и диабетические осложнения [13].Точно так же эти исследования подтверждают, что снижение токсичности глюкозы опосредует защитные эффекты ограничения питания во время старения в зависимости от активности Cbp [6].

Настоящие исследования начались с слепого скрининга Spectrum Collection (Microsource) на предмет потенциальных защитных эффектов против токсичности глюкозы в нейронах млекопитающих и, следовательно, для потенциального использования для предотвращения или устранения осложнений диабета. Подобные проверки этой библиотеки соединений, большинство из которых имеют известные профили безопасности для использования на людях, привели к потенциальному изменению позиций терапевтических препаратов с известными профилями безопасности для новых терапевтических целей [11].Основное внимание при проведении таких проверок — проблема получения оптимальной защитной дозы, поскольку защитные соединения обычно токсичны при более высоких дозах. Действительно, при первоначальном скрининге нейронов млекопитающих мы наблюдали, что при скрининговых концентрациях многие лекарства действительно были токсичными. Поэтому мы проверили три концентрации в C. elegans и обнаружили, что многие из исследуемых препаратов в самой высокой концентрации (1%) сокращали продолжительность жизни, тогда как при более низких концентрациях некоторые лекарства увеличивали продолжительность жизни.Смежное беспокойство вызывает степень, в которой защитные концентрации, наблюдаемые в исследовании C. elegans , в котором соединения были добавлены в окружающую среду, трансформируются в дозы, безопасные для использования у людей или других млекопитающих. В настоящем исследовании мы провели скрининг при концентрациях от 0,01 до 1% (примерно от 100 мкМ до 10 мМ) в среде, потому что такие концентрации часто вызывают аналогичные эффекты у C. elegans , которые продуцируются в терапевтических дозах у людей (например, флуоксетин [ 21]), хотя, конечно, не совсем ясно, какова концентрация препарата в тканях червя в этих условиях.

Поскольку профиль безопасности этих защитных препаратов известен и во многих случаях изучены механизмы защитного действия, они представляют собой многообещающие свинцовые соединения для лечения возрастных заболеваний, включая диабет и болезнь Альцгеймера. Таким образом, кофеин (ED50 = 12 мг / кг; LD50 = 200 мг / кг) был эффективен при концентрации 0,1% (5,1 мМ) для увеличения продолжительности жизни и снижения протеотоксичности, подтверждая аналогичный результат, что 3,6 мМ кофеина, добавленного в среду, уменьшали патологию в организме. та же трансгенная модель протеотоксичности, связанная с болезнью Альцгеймера [22].Многие эпидемиологические исследования показали, что потребление кофе и других напитков с кофеином, по-видимому, обладает высокой защитой от различных патологий, включая болезнь Паркинсона [23] и болезнь Альцгеймера [24]. Точно так же введение кофеина в экспериментальных моделях этих заболеваний является защитным [25]. Было предложено множество механизмов, обеспечивающих эти защитные эффекты кофеина, но ни один из них еще не установлен [24].

Циклопирокс используется в клинических условиях в качестве местного противогрибкового средства, поэтому ED50 для пероральных доз неизвестна.Однако LD50 для пероральных доз составляет около 2000 мг / кг (например, в 10 раз выше, чем для кофеина), и он был защитным при концентрации в 10 раз ниже, чем для кофеина. Интересно, что циклопирокс защищает нейрональные клетки PC12 от гибели клеток после удаления трофической поддержки [26] и защищает астроциты от токсичности пероксинитрата, поддерживая функцию митохондрий с помощью неизвестных механизмов. Дубильная кислота также имеет LD50 около 2000 мг / кг, защищает нейроны [27] и оказывает множество других защитных эффектов; хотя было предложено много механизмов, ни один не был установлен [28].Интересно, что ацетаминофен (LD50 около 1000 мг / кг) защищает как нейроны, так и эндотелиальные клетки мозга от окислительного стресса посредством механизма, который может повлечь за собой ингибирование апоптоза [29], [30]. Бацитрацин (LD50 около 1000 мг / кг) является антибиотиком для местного применения, но также, по-видимому, специфически ингибирует холинэстеразы, связанные с бляшками и клубками при болезни Альцгеймера [31]. Хотя бацитрацин является антибиотиком, механизм увеличения продолжительности жизни, вероятно, не опосредован диетическим ограничением, вторичным по отношению к снижению роста бактерий, поскольку ограничение в питании снижает скорость старения у C.elegans [9], тогда как бацитрацин не снижает скорость старения (таблица 2). Байкалеин представляет собой противовоспалительный флаваноид, выделенный из традиционного китайского травяного препарата, известного как huáng qín (полученный из Scutellaria baicalensis ), который, как было показано, защищает нейроны от токсичности бета-амилоида [16] и других поражений, включая ишемический инсульт [32]. через неизвестные механизмы.

Таким образом, было показано, что все соединения, обнаруженные в этом скрининге, обладают нейропротективным действием при различных обстоятельствах, но единственным четким общим знаменателем является то, что механизмы, с помощью которых эти различные соединения проявляют свои защитные эффекты, остаются неясными.Поэтому особый интерес представляет то, что защитные эффекты каждого из этих соединений блокируются ингибированием cbp-1 с помощью РНКи, тогда как аналогичное ингибирование daf-16 блокирует только защитные эффекты 2 из этих соединений. Поскольку РНКи не полностью блокирует экспрессию DAF-16 во всех клетках, это не исключает, что DAF-16 играет роль в опосредовании некоторых из этих защитных эффектов. Тем не менее, данные ясно подтверждают более сильную роль CBP-1, чем DAF-16 в опосредовании защитных эффектов этих препаратов, как это делается в нескольких протоколах ограничения питания [6].Поскольку защитные эффекты этих препаратов были основаны на скрининге нейрозащиты от токсичности глюкозы, против которой CBP-1 также оказывается особенно защитным [6], вероятно, не случайно, что защитные эффекты этих препаратов также в значительной степени зависят от на CBP-1. С другой стороны, в то время как 5 из 6 препаратов снижают скорость старения и, таким образом, имитируют эффекты ограничения в питании (кофеин, циклопирокс, дубильная кислота, байкалеин и, если ингибируется daf-16 , бацитрацин и ацетаминофен).Точно так же, в то время как 3 из 6 препаратов задерживали патологию в модели протеотоксичности, связанной с болезнью Альцгеймера (кофеин, бацитрацин и дубильная кислота), 3 — нет. Таким образом, хотя защитные эффекты всех этих лекарств, по-видимому, зависят от CBP-1, очевидно, существуют другие различия в механизмах, опосредующих защитные эффекты этих лекарств.

В заключение, настоящие исследования демонстрируют, что лекарства, которые защищают от токсичности глюкозы, демонстрируют чрезвычайно высокую вероятность увеличения продолжительности жизни и снижения протеотоксичности.Кроме того, эти защитные эффекты, такие как защитные эффекты ограничения питания и DAF-16, сильно зависят от транскрипционного фактора CBP-1, но в гораздо меньшей степени — от DAF-16. Наконец, настоящие исследования значительно расширяют число подтвержденных лекарств, которые могут защитить от широкого спектра возрастных патологий, включая диабетические осложнения, болезнь Альцгеймера и скорость самого старения.

Методы

C. elegans штаммы

Все штаммы были получены из Центра генетики Caenorhabditis, финансируемого Национальным центром исследовательских ресурсов NIH (NCRR), и поддерживались при 20 ° C в стандартных условиях [33].Штамм CL2006, dvIs2 [pCL12 ( unc-54 / миниген пептида Abeta 1-42 человека) + pRF4 ], используемый в качестве модели протеотоксичности при болезни Альцгеймера, был создан Крисом Линком [12].

Экран лекарств

Первоначальный скрининг лекарств был взят из библиотеки соединений на основе Spectrum Collection (Microsource), подготовленной и закодированной Фондом исследований ювенильного диабета. Скрининг включал в себя оценку жизнеспособности первичных (E16) кортикальных нейронов после 1-часового воздействия низкой дозы (30 мкМ) перекиси водорода с использованием двух различных 96-луночных анализов жизнеспособности нейронов.В отличие от некоторых моделей гипергликемии in vitro, которые демонстрируют прямые токсические эффекты чрезвычайно высоких нефизиологических (часто выше 30 мМ) уровней глюкозы, 15 мМ глюкоза напрямую не снижает жизнеспособность нейронов по сравнению с 5 мМ глюкозы. Однако после кратковременного воздействия 100 мкМ перекиси водорода (определяется кривой доза-ответ) инкубация при 15 мМ глюкозы через 24 часа снижает жизнеспособность нейронов на 75% по сравнению с 5 мМ глюкозы. Через 24 часа среду удаляли и хранили для последующего анализа лактатдегидрогеназы (Promega) или анализа жизнеспособности (CKK-8; Dojindo Molecular Technologies).Лунки инкубировали и считывали с помощью ридера ELISA при 450 нм в соответствии с инструкциями производителя. Любой препарат, вызывающий статистически значимое увеличение жизнеспособности клеток с помощью анализа CCK-8 (n = 8 клеток / лекарство при 15 мМ глюкозы / 100 мкМ перекиси водорода), подвергали повторному скринингу с использованием анализа LDH, а также последующей репликации CCK-8. кривые анализа и доза-ответ. После скрининга первичных кортикальных нейронов все препараты, использованные в скрининге C. elegans (кофеин, циклопироксоламин, дубильная кислота, парацетамол, байкалеин и бацитрацин), были получены от Sigma.Медикаментозное лечение C. elegans включало добавление 400 мкл раствора, содержащего 0,01%, 0,1% или 1% (по массе) указанного лекарственного средства, растворенного в 50% этаноле в воде, к 10 мл затвердевшего агара в Чашка Петри диаметром 6 см. Контрольные чашки с агаром обрабатывали 50% этанолом в воде (носитель). Все препараты добавляли после инкубации в течение ночи при 37 ° C с бактериальными штаммами: OP50, L4440 с кассетой РНКи интересующего гена или L4440 (пустой вектор РНКи).

Фенотипическая оценка

червей подсчитывали через день, начиная с 3-го дня взросления.Выживаемость оценивалась путем укола червей платиновой проволокой и наблюдения за движением. Отсутствие движения засчитывалось как смерть, после чего червяк удаляли с пластины. Подсчет очков продолжался до тех пор, пока все черви не умерли. Все исследования проводились с экспериментатором, слепым к тестируемым условиям (лекарствам и конструкциям РНКи). Кроме того, все результаты подтверждались как минимум 3 отдельными кривыми продолжительности жизни. Некоторые препараты, не указанные здесь, значительно увеличили продолжительность жизни в одном или нескольких исследованиях, но препараты, о которых здесь сообщается, значительно увеличили продолжительность жизни по крайней мере в трех отдельных исследованиях.

В модели CL2006 для протеотоксичности, связанной с болезнью Альцгеймера [12], гельминтов ежедневно оценивали на паралич, начиная с 1-го дня и до 12-13-го дня, после чего все или большая часть червей умерли от токсичности, вызванной β-амилоидом. Поскольку сравнение умирающих и парализованных становится ненадежным по мере увеличения уровня смертности, мы прекратили подсчет баллов, когда смертность превысила 50%. На начальных экранах черви считались парализованными, если они не реагировали на толчки в задней части тела, но все же двигали головой и / или глоткой и были мертвыми, если движения не наблюдалось.Поскольку паралич и сокращение продолжительности жизни вызваны токсичностью А-бета, последующие скрининги просто относились к парализованным и мертвым животным одинаково. Тем не менее, оценка была остановлена ​​после <50% выживаемости для сохранения согласованности. Все оценки проводились без учета тестируемых препаратов.

RNAi

В этих исследованиях либо daf-16 , либо cbp-1 ингибировалось с использованием РНКи путем кормления C. elegans бактерий, содержащих конструкции дцРНК, комплементарные целевым генам [34].Бактерии, экспрессирующие эти конструкции двухцепочечной РНКи, были получены от Source Bioscience.

Статистика

Статистическая значимость эффектов на продолжительность жизни была определена с использованием теста выживаемости Каплана-Мейера вместе с лог-ранговым тестом Мантеля-Кокса для средней продолжительности жизни, как реализовано в Prism 4. Статистическая значимость эффектов на возрастное ускорение смертности как мера скорости старения [17] была определена с использованием метода максимального правдоподобия, реализованного в R, который мы тщательно проверили [9], [18], [35].Что особенно важно, мы подтвердили этот метод, продемонстрировав, что он предсказывает максимальную продолжительность жизни, время выживания 50%, дисперсию в контрольных группах и распределение смертей лучше, чем стандартный анализ линейной логарифмической регрессии, хотя фактические значения A и G очень аналогично при вычислении любым методом [18]. Благодаря повышенной мощности этого алгоритма можно оценить возрастное ускорение уровня смертности (G) и исходный уровень смертности (A), используя кривые выживаемости для значительно меньшего числа людей, чем требовалось ранее [18].Одна из причин, по которой MLE обеспечивает значительно большую мощность, чем лог-линейная регрессия, заключается в том, что на последнюю чрезмерно влияют уровни смертности на крайних значениях продолжительности жизни, особенно в сторону максимальной продолжительности жизни [18]. Точно так же средняя продолжительность жизни гораздо более чувствительна, чем средняя продолжительность жизни, к крайним значениям продолжительности жизни, поэтому большинство стандартных статистических данных кривой выживаемости, включая логарифмический ранг Мантела-Кокса, основаны на медиане, а не на средней продолжительности жизни. Тем не менее, поскольку во многих исследованиях сообщается о средней продолжительности жизни, мы включаем эти оценки и в предлагаемые исследования.

Вспомогательная информация

Было проведено несколько проверок лекарств для определения эффективности и оптимальной концентрации лекарств, извлеченных из одобренной FDA библиотеки лекарств. Первичный скрининг в C. elegans выявил 6 препаратов, способных защищать от токсичности, вызванной амилоидом, увеличивать продолжительность жизни или и то, и другое (рисунок S1). Значительное увеличение продолжительности жизни наблюдается при приеме кофеина, CPX, дубильной кислоты, ацетаминофена и бацитрацина (p = или <0,05 по данным Mantel-Cox).Байкалеин не привел к значительным различиям в этом эксперименте. Однако лечение байкалеином имеет тенденцию к увеличению продолжительности жизни. Кроме того, небольшой размер выборки (n = 15), вероятно, скрывает более значительное увеличение, поскольку это увеличение продолжительности жизни наблюдается в нескольких других исследованиях (данные не показаны).

Дополнительная информация

Рисунок S1.

Кривые выживаемости семи одобренных FDA препаратов, обладающих защитным действием, при скрининге C. elegans . Увеличение продолжительности жизни наблюдается с помощью кофеина A. Увеличение продолжительности жизни наблюдается с помощью циклопироксоламина (B). Увеличение продолжительности жизни за счет дубильной кислоты (C). Увеличение продолжительности жизни за счет ацетаминофена (D). Увеличение продолжительности жизни наблюдается с бацитрацином (E). Увеличение продолжительности жизни наблюдается с байкалеином (F).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027762.s001

(TIF)

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: AL FI CM. Проведены эксперименты: AL FI HP LN DH MS.Проанализированы данные: AL FI KY CM. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: AL KY CM. Написал статью: AL CM.

Ссылки

1. 1. Вуд Дж. Г., Рогина Б., Лаву С., Ховиц К., Хельфанд С. Л. и др. (2004) Активаторы сиртуинов имитируют ограничение калорийности и замедляют старение у многоклеточных животных. Природа 430: 686–689.
2. 2. Evason K, Huang C, Yamben I, Covey DF, Kornfeld K (2005) Противосудорожные препараты увеличивают продолжительность жизни червя. Наука 307: 258–262.
3. 3.Petrascheck M, Ye X, Buck LB (2007) Антидепрессант, который продлевает продолжительность жизни у взрослых Caenorhabditis elegans. Природа 450: 553–556.
4. 4. Jia K, Chen D, Riddle DL (2004) Путь TOR взаимодействует с сигнальным путем инсулина, чтобы регулировать развитие личинок C. elegans, метаболизм и продолжительность жизни. Развитие 131: 3897–3906.
5. 5. Харрисон Д.Е., Стронг Р., Шарп З.Д., Нельсон Дж. Ф., Астле С.М. и др. (2009) Рапамицин, полученный на поздних сроках жизни, увеличивает продолжительность жизни генетически гетерогенных мышей.Природа 460: 392–395.
6. 6. Zhang M, Poplawski M, Yen K, Cheng H, Bloss E, et al. (2009) Роль CBP и SATB-1 в старении, ограничении диеты и инсулиноподобной передаче сигналов. PLoS Biol 7: e1000245.
7. 7. Шульц Т.Дж., Зарсе К., Фойгт А., Урбан Н., Биррингер М. и др. (2007) Ограничение глюкозы продлевает продолжительность жизни Caenorhabditis elegans, вызывая митохондриальное дыхание и увеличивая окислительный стресс. Cell Metab 6: 280–293.
8. 8. Lee SJ, Murphy CT, Kenyon C (2009) Глюкоза сокращает продолжительность жизни C.elegans путем подавления активности DAF-16 / FOXO и экспрессии гена аквапорина. Cell Metab 10: 379–391.
9. 9. Йен К., Моббс CV (2008) Хемосенсорные и калорийные механизмы влияют на отдельные компоненты уровня смертности. Exp Gerontol 43: 1058–1060.
10. 10. Bishop NA, Guarente L (2007) Два нейрона опосредуют долголетие, вызванное ограничением диеты, у C. elegans. Природа 447: 545–549.
11. 11. Ротштейн Дж. Д., Патель С., Реган М. Р., Хенггели С., Хуанг Ю. Х. и др.(2005) Бета-лактамные антибиотики обеспечивают нейрозащиту за счет увеличения экспрессии транспортера глутамата. Природа 433: 73–77.
12. 12. Link CD (1995) Экспрессия человеческого бета-амилоидного пептида у трансгенного Caenorhabditis elegans. Proc Natl Acad Sci U S A 92: 9368–9372.
13. 13. Brownlee M (2001) Биохимия и молекулярная клеточная биология диабетических осложнений. Природа 414: 813–820.
14. 14. Grant MM, Barber VS, Griffiths HR (2005) Присутствие аскорбата индуцирует экспрессию нейротрофического фактора мозга в клетках нейробластомы SH-SY5Y после перекиси водорода, что связано с увеличением выживаемости.Протеомика 5: 534–540.
15. 15. Ян Л.П., Сунь Х.Л., Ву Л.М., Го XJ, Доу Х.Л. и др. (2009) Байкалеин снижает воспалительный процесс в модели диабетической ретинопатии на грызунах. Инвестируйте офтальмол Vis Sci 50: 2319–2327.
16. 16. Lebeau A, Esclaire F, Rostene W, Pelaprat D (2001) Байкалеин защищает корковые нейроны от токсичности, вызванной бета-амилоидом (25-35). Нейроотчет 12: 2199–2202.
17. 17. Johnson TE (1990) Увеличение продолжительности жизни мутантов age-1 у Caenorhabditis elegans и снижение скорости старения по Гомпертцу.Наука 249: 908–912.
18. 18. Йен К., Штейнзальц Д., Моббс CV (2008) Подтвержденный анализ показателей смертности демонстрирует различные генетические механизмы, влияющие на продолжительность жизни. Exp Gerontol 43: 1044–1051.
19. 19. Greer EL, Brunet A (2009). Различные режимы ограничения диеты продлевают продолжительность жизни как независимыми, так и перекрывающимися генетическими путями у C. elegans. Ячейка старения 8: 113–127.
20. 20. Lin SJ, Defossez PA, Guarente L (2000) Требование NAD и SIR2 для увеличения продолжительности жизни за счет ограничения калорий у Saccharomyces cerevisiae.Наука 289: 2126–2128.
21. 21. Куллыев А., Демпси С.М., Миллер С., Куан С.Дж., Хапиак В.М. и др. (2010) Генетический обзор действия флуоксетина на синаптическую передачу у Caenorhabditis elegans. Генетика 186: 929–941.
22. 22. Dostal V, Roberts CM, Link CD (2010) Генетические механизмы защиты экстракта кофе в модели токсичности {бета} -амилоидного пептида Caenorhabditis elegans. Генетика 186: 857–866.
23. 23. Коста Дж., Лунет Н., Сантос С., Сантос Дж., Ваз-Карнейро А. (2010) Воздействие кофеина и риск болезни Паркинсона: систематический обзор и метаанализ наблюдательных исследований.J Alzheimers Dis 20: Suppl 1S221–238.
24. 24. Сантос С., Коста Дж., Сантос Дж., Ваз-Карнейро А., Лунет Н. (2010) Потребление кофеина и деменция: систематический обзор и метаанализ. J Alzheimers Dis 20: Suppl 1S187–204.
25. 25. Xu K, Xu YH, Chen JF, Schwarzschild MA (2010) Нейропротекция кофеином: динамика и роль его метаболитов в модели болезни Паркинсона MPTP. Неврология 167: 475–481.
26. 26. Фаринелли С.Е., Грин Л.А. (1996) Блокаторы клеточного цикла мимозин, циклопирокс и дефероксамин предотвращают гибель клеток PC12 и постмитотических симпатических нейронов после удаления трофической поддержки.J Neurosci 16: 1150–1162.
27. 27. Ядзава К., Кихара Т., Шен Х., Шиммё Ю., Нийдоме Т. и др. (2006) Разные механизмы лежат в основе разной нейрозащиты, индуцированной полифенолами. FEBS Lett 580: 6623–6628.
28. 28. Chung KT, Wong TY, Wei CI, Huang YW, Lin Y (1998) Танины и здоровье человека: обзор. Crit Rev Food Sci Nutr 38: 421–464.
29. 29. Tripathy D, Grammas P (2009) Ацетаминофен подавляет воспаление нейронов и защищает нейроны от окислительного стресса.J Нейровоспаление 6:10.
30. 30. Tripathy D, Grammas P (2009) Ацетаминофен защищает эндотелиальные клетки мозга от окислительного стресса. Microvasc Res 77: 289–296.
31. 31. Ciro A, Park J, Burkhard G, Yan N, Geula C (2011) Биохимическая дифференциация холинэстераз от нормальной коры головного мозга и болезни Альцгеймера. Curr Alzheimer Res.
32. 32. Цуй Л., Чжан Х, Ян Р., Лю Л., Ван Л. и др. (2010) Байкалеин является нейропротекторным в модели MCAO у крыс: роль 12/15-липоксигеназы, митоген-активируемой протеинкиназы и цитозольной фосфолипазы A2.Pharmacol Biochem Behav 96: 469–475.
33. 33. Бреннер С. (1974) Генетика Caenorhabditis elegans. Генетика 77: 71–94.
34. 34. Fraser AG, Kamath RS, Zipperlen P, Martinez-Campos M, Sohrmann M и др. (2000) Функциональный геномный анализ хромосомы I C. elegans путем систематической РНК-интерференции. Nature 408: 325–330.
35. 35. Йен К., Mobbs CV (2010) Доказательства только двух независимых путей уменьшения старения у Caenorhabditis elegans.Возраст (Дордр) 32: 39–49.

Aβ, ассоциированный с внеклеточными везикулами, опосредует транс-нейрональный биоэнергетический дефицит и дефицит Ca 2+ в моделях болезни Альцгеймера.

1

Mattson, M. P. Пути к болезни Альцгеймера и от нее. Природа 430 , 631–639 (2004).

CAS Статья Google Scholar

2

Карч, К. М., Кручага, К. и Гоут, А.М. Генетика болезни Альцгеймера: от стенда к клинике. Нейрон 83 , 11–26 (2014).

CAS Статья Google Scholar

3

Платт Т. Л., Ривз В. Л. и Мерфи М. П. Трансгенные модели болезни Альцгеймера: лучшее использование существующих моделей посредством вирусного трансгенеза. Biochim. Биофиз. Acta 1832 , 1437–1448 (2013).

CAS Статья Google Scholar

4

Безпрозванный, И.& Маттсон, М. П. Неправильное обращение с кальцием в нейронах и патогенез болезни Альцгеймера. Trends Neurosci. 31 , 454–463 (2008).

CAS Статья Google Scholar

5

Штутцманн, Г. Э. и Маттсон, М. П. Обработка Ca (2+) эндоплазматического ретикулума в возбудимых клетках при здоровье и болезни. Pharmacol. Ред. 63 , 700–727 (2011).

CAS Статья Google Scholar

6

Маттсон, М.П., Глейхманн, М. и Ченг, А. Митохондрии при нейропластичности и неврологических расстройствах. Нейрон 60 , 748–766 (2008).

CAS Статья Google Scholar

7

Crews, L. & Masliah, E. Молекулярные механизмы нейродегенерации при болезни Альцгеймера. Гум. Мол. Genet. 19 , R12 – R20 (2010).

CAS Статья Google Scholar

8

Крстич, Д.& Knuesel, I. Расшифровка механизма, лежащего в основе болезни Альцгеймера с поздним началом. Nat. Rev. Neurol. 9 , 25–34 (2013).

CAS Статья Google Scholar

9

Агуцци А. и Раджендран Л. Трансклеточное распространение цитозольных амилоидов, прионов и прионоидов. Нейрон 64 , 783–790 (2009).

CAS Статья Google Scholar

10

Ватт, Дж.C. et al. Серийное распространение различных штаммов прионов Abeta от пациентов с болезнью Альцгеймера. Proc. Natl Acad. Sci. США 111 , 10323–10328 (2014).

CAS Статья Google Scholar

11

Stohr, J. et al. Очищенные и синтетические прионы бета-амилоида Альцгеймера (Abeta). Proc. Natl Acad. Sci. США 109 , 11025–11030 (2012).

CAS Статья Google Scholar

12

Коломбо, Э., Борджиани, Б., Вердерио, К. и Фурлан, Р. Микровезикулы: новые биомаркеры неврологических расстройств. Фронт. Physiol. 3 , 63 (2012).

CAS Статья Google Scholar

13

Rajendran, L. et al. Новые роли внеклеточных пузырьков в нервной системе. J. Neurosci. 34 , 15482–15489 (2014).

Артикул Google Scholar

14

Раджендран, Л.и другие. Бета-амилоидные пептиды при болезни Альцгеймера высвобождаются вместе с экзосомами. Proc. Natl Acad. Sci. США 103 , 11172–11177 (2006).

CAS Статья Google Scholar

15

Perez-Gonzalez, R., Gauthier, S. A., Kumar, A. & Levy, E. Секреторный путь экзосом транспортирует карбоксиконцевые фрагменты белка-предшественника амилоида из клетки во внеклеточное пространство мозга. Дж.Биол. Chem. 287 , 43108–43115 (2012).

CAS Статья Google Scholar

16

Saman, S. et al. Ассоциированный с экзосомами тау секретируется в моделях таупатии и избирательно фосфорилируется в спинномозговой жидкости на ранних стадиях болезни Альцгеймера. J. Biol. Chem. 287 , 3842–3849 (2012).

CAS Статья Google Scholar

17

Эмманоуилиду, Э.и другие. Вырабатываемый клетками альфа-синуклеин секретируется кальций-зависимым образом экзосомами и влияет на выживаемость нейронов. J. Neurosci. 30 , 6838–6851 (2010).

CAS Статья Google Scholar

18

Град, Л. И. и др. Межклеточное распространение неправильной укладки супероксиддисмутазы Cu / Zn дикого типа происходит через экзосомозависимые и независимые механизмы. Proc. Natl Acad. Sci. США 111 , 3620–3625 (2014).

CAS Статья Google Scholar

19

Fevrier, B. et al. Клетки выделяют прионы вместе с экзосомами. Proc. Natl Acad. Sci. США 101 , 9683–9688 (2004).

CAS Статья Google Scholar

20

Rajendran, L. et al. Повышенная продукция Abeta приводит к внутриклеточному накоплению Abeta в флотилин-1-положительных эндосомах. Neurodegener. Дис. 4 , 164–170 (2007).

CAS Статья Google Scholar

21

Коломбо М., Рапосо Г. и Тери С. Биогенез, секреция и межклеточные взаимодействия экзосом и других внеклеточных везикул. Annu. Rev. Cell Dev. Биол. 30 , 255–289 (2014).

CAS Статья Google Scholar

22

Такахаши, Р.H. et al. Интранейрональная болезнь Альцгеймера-abeta42 накапливается в мультивезикулярных тельцах и связана с синаптической патологией. Am. J. Pathol. 161 , 1869–1879 (2002).

CAS Статья Google Scholar

23

Yuyama, K., Sun, H., Mitsutake, S. & Igarashi, Y. Модулируемая сфинголипидом секреция экзосом способствует клиренсу бета-амилоида микроглией. J. Biol. Chem. 287 , 10977–10989 (2012).

CAS Статья Google Scholar

24

Yuyama, K. et al. Снижение патологий бета-амилоида за счет интрацеребральной нагрузки экзосом, обогащенных гликосфинголипидом, у мышей с моделью болезни Альцгеймера. J. Biol. Chem. 289 , 24488–24498 (2014).

CAS Статья Google Scholar

25

Yuyama, K. et al. Возможная функция нейрональных экзосом: секвестрация внутримозгового бета-амилоидного пептида. FEBS Lett. 589 , 84–88 (2015).

CAS Статья Google Scholar

26

An, K. et al. Экзосомы нейтрализуют разрушающую синаптическую пластичность активность сборок Abeta in vivo. Мол. Мозг 6 , 47 (2013).

Артикул Google Scholar

27

Fiandaca, M. S. et al. Идентификация доклинической болезни Альцгеймера по профилю патогенных белков в экзосомах крови нервного происхождения: исследование случай-контроль. Демент Альцгеймера. 11 , 600–7.e1 (2014).

Артикул Google Scholar

28

Wolfe, D. M. et al. Нарушение аутофагии при болезни Альцгеймера и роль дефектного закисления лизосом. Eur. J. Neurosci. 37 , 1949–1961 (2013).

Артикул Google Scholar

29

Witwer, K. W. et al. Стандартизация методов сбора, выделения и анализа проб при исследовании внеклеточных везикул. J. Extracell Vesicles 2 (2013).

Артикул Google Scholar

30

Lotvall, J. et al. Минимальные экспериментальные требования для определения внеклеточных везикул и их функций: заявление о позиции Международного общества внеклеточных везикул. J. Extracell Vesicles 3 , 26913 (2014).

Артикул Google Scholar

31

Шпион, П.E. et al. Соотношение амилоида бета42 / 40 спинномозговой жидкости в дифференциации болезни Альцгеймера от деменции, не связанной с болезнью Альцгеймера. Curr. Alzheimer Res. 7 , 470–476 (2010).

CAS Статья Google Scholar

32

Sauvee, M. et al. Дополнительное использование соотношения Abeta (4) (2) / Abeta (4) (0) с биомаркерами спинномозговой жидкости P-tau и Abeta (4) (2) увеличивает уровень доказательств патофизиологического процесса болезни Альцгеймера в повседневной практике. J. Alzheimers Dis. 41 , 377–386 (2014).

CAS Статья Google Scholar

33

Mahairaki, V. et al. Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки от пациентов с семейной болезнью Альцгеймера дифференцируются в зрелые нейроны с амилоидогенными свойствами. Stem Cells Dev. 23 , 2996–3010 (2014).

CAS Статья Google Scholar

34

Буллой, А., Leal, M. C., Xu, H., Castano, E. M. и Morelli, L. Сортировка ферментов, разлагающих инсулин, в экзосомах: секреторный путь для ключевой протеазы, разлагающей амилоид-бета в головном мозге. J. Alzheimers Dis. 19 , 79–95 (2010).

Артикул Google Scholar

35

Ghidoni, R. et al. Цистатин С высвобождается вместе с экзосомами: новый инструмент нейронной коммуникации, который неуравновешен при болезни Альцгеймера. Neurobiol.Старение 32 , 1435–1442 (2011).

CAS Статья Google Scholar

36

Yuyama, K., Yamamoto, N. & Yanagisawa, K. Ускоренное высвобождение ганглиозида GM1, связанного с экзосомами (GM1), из-за нарушения эндоцитарного пути: еще один предполагаемый путь образования GM1-индуцированных амилоидных фибрилл. J. Neurochem. 105 , 217–224 (2008).

CAS Статья Google Scholar

37

Тинакаран, Г.И Ку, Э. Х. Транспортировка, обработка и функция белка-предшественника амилоида. J. Biol. Chem. 283 , 29615–29619 (2008).

CAS Статья Google Scholar

38

Vingtdeux, V. et al. Внутриклеточный pH регулирует накопление внутриклеточного домена белка-предшественника амилоида. Neurobiol. Дис. 25 , 686–696 (2007).

CAS Статья Google Scholar

39

Хаасс, К., Capell, A., Citron, M., Teplow, D. B. & Selkoe, D. J. Вакуолярный ингибитор H (+) — АТФазы бафиломицин A1 по-разному влияет на протеолитический процессинг мутантного белка-предшественника бета-амилоида дикого типа. J. Biol. Chem. 270 , 6186–6192 (1995).

CAS Статья Google Scholar

40

Mattson, M. P. et al. Бета-амилоидные пептиды дестабилизируют гомеостаз кальция и делают нейроны коры головного мозга человека уязвимыми для эксайтотоксичности. J. Neurosci. 12 , 376–389 (1992).

CAS Статья Google Scholar

41

Xin, H. et al. Системное введение экзосом, высвобождаемых из мезенхимальных стромальных клеток, способствует функциональному восстановлению и нейроваскулярной пластичности после инсульта у крыс. J. Cereb. Blood Flow Metab. 33 , 1711–1715 (2013).

CAS Статья Google Scholar

42

Борчелт, Д.R. et al. Ускоренное отложение амилоида в мозге трансгенных мышей, коэкспрессирующих мутантный пресенилин 1 и белки-предшественники амилоида. Нейрон 19 , 939–945 (1997).

CAS Статья Google Scholar

43

Oddo, S. et al. Тройная трансгенная модель болезни Альцгеймера с бляшками и клубками: внутриклеточный Abeta и синаптическая дисфункция. Нейрон 39 , 409–421 (2003).

CAS Статья Google Scholar

44

Dumurgier, J. et al. Соотношение амилоид-бета 42/40 цереброспинальной жидкости в клинических условиях центров памяти: многоцентровое исследование. Alzheimers Res. Ther. 7 , 30 (2015).

Артикул Google Scholar

45

Куперштейн И. и др. Нейротоксичность пептидов Abeta при болезни Альцгеймера вызывается небольшими изменениями в соотношении Abeta42 к Abeta40. EMBO J. 29 , 3408–3420 (2010).

CAS Статья Google Scholar

46

Pauwels, K. et al. Структурная основа повышенной токсичности патологических соотношений abeta42: abeta40 при болезни Альцгеймера. J. Biol Chem. 287 , 5650–5660 (2012).

CAS Статья Google Scholar

47

Fiandaca, M. S. et al.Идентификация доклинической болезни Альцгеймера по профилю патогенных белков в экзосомах крови нервного происхождения: исследование случай-контроль. Демент Альцгеймера. 11 , 600–607 e601 (2015).

Артикул Google Scholar

48

Кокубо, Х. и др. Олигомерные белки ультраструктурно локализуются в клеточных отростках, особенно в терминалах аксонов с более высокой плотностью, но не в липидных рафтах в мозге мышей Tg2576. Brain Res. 1045 , 224–228 (2005).

CAS Статья Google Scholar

49

Williamson, R., Usardi, A., Hanger, D. P. & Anderton, B.H. Связанные с мембраной бета-амилоидные олигомеры рекрутируются в липидные рафты по fyn-зависимому механизму. FASEB J. 22 , 1552–1559 (2008).

CAS Статья Google Scholar

50

Рашворт, Дж.В. и Хупер, Н. М. Липидные рафты: связывание выработки, агрегации и токсичности бета-амилоида при болезни Альцгеймера на мембранах нейронов. Внутр. J. Alzheimers Dis. 2011 , 603052 (2010).

PubMed PubMed Central Google Scholar

51

Evangelisti, E. et al. Липидные рафты опосредуют индуцированный амилоидом кальциевый дисомеостаз и окислительный стресс при болезни Альцгеймера. Curr. Alzheimers Res. 10 , 143–153 (2013).

CAS Статья Google Scholar

52

Laulagnier, K. et al. Экзосомы, происходящие из тучных и дендритных клеток, обладают специфическим липидным составом и необычной мембранной организацией. Biochem J. 380 , 161–171 (2004).

CAS Статья Google Scholar

53

Баттерфилд, Д. А., Хенсли, К., Харрис, М., Маттсон, М. и Карни, Дж.Свободнорадикальные фрагменты бета-амилоидного пептида инициируют синаптосомное липопероксидирование специфическим для последовательности образом: последствия для болезни Альцгеймера. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 200 , 710–715 (1994).

CAS Статья Google Scholar

54

Брюс-Келлер, А. Дж. И др. Bcl-2 защищает изолированную плазму и мембраны митохондрий от перекисного окисления липидов, вызванного перекисью водорода и бета-пептидом амилоида. J. Neurochem. 70 , 31–39 (1998).

CAS Статья Google Scholar

55

Keller, J. N. et al. Нарушение транспорта глюкозы и глутамата и индукция митохондриального окислительного стресса и дисфункции в синаптосомах бета-пептидом амилоида: роль продукта перекисного окисления липидов 4-гидроксиноненал. J. Neurochem. 69 , 273–284 (1997).

CAS Статья Google Scholar

56

Марк, Р.J., Pang, Z., Geddes, J. W., Uchida, K. & Mattson, M. P. Бета-пептид амилоида нарушает транспорт глюкозы в нейронах гиппокампа и коры головного мозга: участие в перекисном окислении липидов мембран. J. Neurosci. 17 , 1046–1054 (1997).

CAS Статья Google Scholar

57

Mark, RJ, Lovell, MA, Markesbery, WR, Uchida, K. & Mattson, MP Роль 4-гидроксиноненала, альдегидного продукта перекисного окисления липидов, в нарушении ионного гомеостаза и гибели нейронов, вызванной амилоидом бета-пептид. J. Neurochem. 68 , 255–264 (1997).

CAS Статья Google Scholar

58

Tamboli, I. Y. et al. Статины способствуют расщеплению внеклеточного амилоидного {бета} -пептида микроглией посредством стимуляции секреции инсулино-расщепляющего фермента (IDE), ассоциированного с экзосомами. J. Biol. Chem. 285 , 37405–37414 (2010).

CAS Статья Google Scholar

59

Пастернак, С.Х., Каллахан, Дж. У. и Махуран, Д. Дж. Роль эндосомальной / лизосомальной системы в производстве бета-амилоида и патофизиология болезни Альцгеймера: пересмотр пространственного парадокса с лизосомальной точки зрения. J. Alzheimers Dis. 6 , 53–65 (2004).

CAS Статья Google Scholar

60

Шен, Б., Ву, Н., Ян, Дж. М. и Гоулд, С. Дж. Нацеливание белка на экзосомы / микровезикулы с помощью якорей плазматической мембраны. J. Biol. Chem. 286 , 14383–14395 (2011).

CAS Статья Google Scholar

61

Abache, T. et al. Рецептор трансферрина и молекулы тетраспаниновой сети CD9, CD81 и CD9P-1 по-разному сортируются в экзосомы после обработки TPA клеток K562. J. Cell Biochem. 102 , 650–664 (2007).

CAS Статья Google Scholar

62

Андреу, З.& Янез-Мо, М. Тетраспанины в образовании и функционировании внеклеточных пузырьков. Фронт. Иммунол. 5 , 442 (2014).

Артикул Google Scholar

63

Baietti, M. F. et al. Синдекан-синтенин-ALIX регулирует биогенез экзосом. Nat. Cell Biol. 14 , 677–685 (2012).

CAS Статья Google Scholar

64

Катальдо, А.М., Гамильтон, Д. Дж. И Никсон, Р. А. Лизосомные аномалии в дегенерирующих нейронах связывают нарушение нейронов с развитием старческих бляшек при болезни Альцгеймера. Brain Res. 640 , 68–80 (1994).

CAS Статья Google Scholar

65

Катальдо А. М. и Никсон Р. А. Ферментативно активные лизосомальные протеазы связаны с отложениями амилоида в головном мозге, страдающем болезнью Альцгеймера. Proc. Natl Acad. Sci. США 87 , 3861–3865 (1990).

CAS Статья Google Scholar

66

Ли, Дж. Х. и др. Лизосомный протеолиз и аутофагия требуют пресенилина 1 и нарушаются связанными с болезнью Альцгеймером мутациями PS1. Cell 141 , 1146–1158 (2010).

CAS Статья Google Scholar

67

Nixon, R.A. et al. Широкое участие аутофагии в болезни Альцгеймера: исследование иммуно-электронной микроскопии. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 64 , 113–122 (2005).

Артикул Google Scholar

68

Пикфорд, Ф. и др. Связанный с аутофагией белок беклин 1 демонстрирует сниженную экспрессию на ранних стадиях болезни Альцгеймера и регулирует накопление бета-амилоида у мышей. J. Clin. Вкладывать деньги. 118 , 2190–2199 (2008).

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

69

Нильссон, П.и другие. Секреция абета и образование бляшек зависят от аутофагии. Cell Rep. 5 , 61–69 (2013).

CAS Статья Google Scholar

70

Goetzl, E.J. et al. Измененные лизосомные белки в экзосомах плазмы нервного происхождения при доклинической болезни Альцгеймера. Неврология 85 , 40–47 (2015).

CAS Статья Google Scholar

71

Свердлов Р.Патологические каскады болезни Х. Альцгеймера: кто первым, что движет. Neurotox. Res. 22 , 182–194 (2012).

Артикул Google Scholar

72

Маттсон, М. П., Баргер, С. В., Бегли, Дж. Г. и Марк, Р. Дж. Кальций, свободные радикалы и эксайтотоксическая гибель нейронов в первичной культуре клеток. Methods Cell Biol. 46 , 187–216 (1995).

CAS Статья Google Scholar

73

Маккэнн, Г.M. et al. Диагноз деменции из-за болезни Альцгеймера: рекомендации рабочих групп Национального института старения и ассоциации Альцгеймера по диагностическим руководствам по болезни Альцгеймера. Демент Альцгеймера. 7 , 263–269 (2011).

Артикул Google Scholar

74

Dubois, B. et al. Совершенствование исследовательских диагностических критериев болезни Альцгеймера: критерии IWG-2. Lancet Neurol. 13 , 614–629 (2014).

Артикул Google Scholar

75

Schindelin, J. et al. Фиджи: платформа с открытым исходным кодом для анализа биологических изображений. Nat. Методы 9 , 676–682 (2012).

CAS Статья Google Scholar

76

Eitan, E., Zhang, S., Witwer, K. W. & Mattson, M. P. Истощенные внеклеточными пузырьками сыворотки плодов коровы и человека обладают пониженной способностью поддерживать рост клеток. J. Extracell Vesicles 4 , 26373 (2015).

Артикул Google Scholar

Вода | Бесплатный полнотекстовый | Характеристики датчиков влажности почвы в песчаных почвах Флориды

3.1. Точность датчика

Значения θ _v , измеренные датчиками, сравнивались с результатами, полученными при гравиметрическом определении в лаборатории. Сравнение различных датчиков представлено в таблице 3. В целом датчики точно измерили θ _v , а несколько датчиков показали R ² > 0.90 (TDR315S, TDR315L, GS1, 5-ET, TDR315, TDT-ACC-SEN-SDI и CS655). Однако некоторые датчики (10HS, GS3 и Hydra Probe) не были эффективны при определении θ _v , что привело к низкому R ² и высокому CV (таблица 3). на основе метода измерения TDR (таблица 3). Кроме того, все датчики Acclima имели R ² ≥ 0,90. Из них только датчик TDT-ACC-SEN-SDI использует другой метод измерения, а именно TDT.Варбл и Чавес [49] указывают на схожесть характеристик датчиков TDT и TDR в почвах с разной текстурой, поскольку эти методы работают на одинаковых электромагнитных частотах. RMSE является разумным индикатором точности датчика [50]. Небольшое значение RMSE указывает на более высокую точность. Категории для интерпретации значений RMSE описаны Fares et al. [16]. Эти категории включают хорошие (RMSE ≤ 0,01 м ³ м ⁻³ ), удовлетворительные (0,01 ≤ RMSE ≤ 0,05 м ³ м ⁻³ ), плохие (0.05 ≤ RMSE ≤ 0,10 м ³ м ⁻³ ) и очень плохой (RMSE ≥ 0,10 м ³ м ⁻³ ). Датчики, оцениваемые в этом исследовании, имели значения RMSE в диапазоне от 0,023 до 0,049 м ³ м ⁻³ (Таблица 3). Полученные данные аналогичны данным Singh et al. [51], где датчики дали значения RMSE от 0,02 м ³ м ⁻³ до 0,04 м ³ м ⁻³ . Авторы отметили, что датчики CS655 и TDR315 были наиболее точными, с RMSE ³ м ⁻³ в почве с низким содержанием глины.Это значение ниже, чем то, что мы нашли для этих датчиков (CS650 = 0,035 м ³ м ⁻³ и TDR315 = 0,028 м ³ м ⁻³ ) в песчаных почвах Флориды. являются недавно выпущенными моделями, доступны ограниченные исследования для оценки характеристик датчика. Однако точность, установленная производителем, составляет ± 0,02 м ³ м ⁻³ для определения θ _v [36], что приблизительно соответствует данным, полученным в настоящем исследовании, которые показывают RMSE, равную 0.023 м ³ м ⁻³ для TDR310S, 0,026 м ³ м ⁻³ для TDR315L и 0,028 м ³ м ⁻³ для датчика TDR315L (таблица 3). также имели низкое СКО (0,026 м ³ м ⁻³ ) (Таблица 3). Это значение было меньше, чем значение RMSE 0,048, сообщенное Datta et al. [6] для GS1 в мелкосуглинистой почве. Эти авторы сообщили, что сенсоры TDR315, CS655 и GS1 лучше работают в почве с более низким содержанием соли и глины.Adeyemi et al. [52] сообщил о RMSE 0,03 м ³ м ⁻³ для датчиков GS1 и TDR315. Эти результаты были получены путем оценки характеристик датчика в песчаной почве с характеристиками, аналогичными тем, которые оценивались в настоящем исследовании. Наши результаты показали, что датчики TDR315, CS655 и 5TE хорошо работают на песчаных почвах с общим уравнением, представляющим более низкий средний квадрат ошибка (таблица 3). Варбл и Чавес [49] протестировали датчик 5TE и пришли к выводу, что общее уравнение датчика не является точным в супесчаных почвах.Совсем недавно исследование датчиков 5TE, TDR315 и CS655 показало RMSE 0,039, 0,050 и 0,078 м ³ м ⁻³ , соответственно, в суглинистых почвах, что является завышенной оценкой θv, присутствующей в образцах [53]. CS650, CS616, Hydra Probe, 10HS и GS3 имели более высокие значения CV, при этом значения R ² варьировались от 0,72 до 0,86 (таблица 3). ВАЗ и др. [4] оценили датчики Hydra Probe, 10HS и CS616 в почве, состоящей из 92,7% песка, которая аналогична почвам, оцениваемым в настоящем исследовании.RMSE, полученная этими авторами, составляла 0,058 м ³ м ⁻³ для CS616, 0,018 м ³ м ⁻³ для датчика Hydra и 0,077 м ³ м ⁻³ для 10HS. В настоящем исследовании мы получили более высокое RMSE (0,037 м ³ м ⁻³ ) для зонда Hydra. Тем не менее, датчики CS616 и 10HS показали более низкие значения, чем представленные Vaz et al. [4], что указывает на то, что общее уравнение лучше подходит для почв, оцениваемых в этом исследовании, из-за текстуры почвы.Аналогичным образом, в исследовании, проведенном Singh et al. [53], датчики CS616 и Hydra Probe показали более высокие результаты по отношению к определенному среднеквадратичному значению. Датчик CS616 был также оценен Варблом и Чавесом [49], что привело к завышению объемного содержания воды в 0,03 м ³ м ⁻³ для супесчаной почвы. Кроме того, результаты показали, что более высокая точность была получена для датчика CS616 в супесчаных глинистых почвах при более низких θv, а не при высоких θv. Датчик GS3 показал среднеквадратичное значение 0.049 м ³ м ⁻³ , что отличается от точности производителя на ± 0,03 м ³ м ⁻³ в минеральных грунтах [32]. Это значение попадает в категорию справедливой точности, как определено Fares et al. [16]. Эти результаты показывают, что датчик GS3 очень чувствителен к изменчивости свойств почвы (например, объемной плотности почвы, общей пористости, гранулометрического состава, размера пор, электропроводности и т. Д.), Что оказывает значительное влияние на характеристики датчика. Подобные результаты с высоким RMSE (0.038 м ³ м ⁻³ ) были определены Straten et al. [54] в песчаных почвах с органической фракцией 2%. Son et al. [55] протестировали датчик GS3 и обнаружили завышение θv со среднеквадратичным отклонением 0,028 м ³ м ⁻³ , что указывает на то, что общее уравнение производителя больше подходит для илистых суглинков, чем для песчаных почв. Наблюдалась положительная корреляция. между значениями θ _v (измеренными датчиками) и значениями θref (определенными гравиметрическим методом) (рис. 3, рис. 4 и рис. 5).Это означает, что измерения датчика коррелируют с гравиметрическими определениями. При сравнении графика регрессии с эталонной линией 1: 1 значения в верхней половине указывают на завышение θ _против , а значения в нижней половине указывают на занижение θ _против . Датчики 10HS, GS1 и GS3 имели самый низкий коэффициент корреляции (r = 0,8990, r = 0,9212 и r = 0,8394 соответственно; рис. 3a – c), и точки выбросов могли быть вызваны генерацией неоднородных показаний из этих датчики.Это было более очевидно для датчиков 10HS и GS3, которые показали низкую точность, низкий R ² и высокий CV (Таблица 3). Однако другие датчики показали высокую положительную корреляцию между θ _v и θref (r> 0,90). Датчики 10HS, GS1, GS3 (рис. 3a – c), CS650 (рис. 4b), TDR310S, TDT-ACC-SEN -SDI и TDR315L (рис. 5b – d) завышали θv, поскольку большинство точек находились выше контрольной линии 1: 1. Многие исследователи также сообщали о завышении θv датчиком CS655 [56,57,58].Сходные результаты Datta et al. [6] показали, что все датчики (TDR315, CS655 и GS1) завышают θv в почве с низким содержанием глины, расположенной в центральной части Оклахомы. Adeyemi et al. [52] обнаружили, что TDR315 и GS1 занижают θv в супесчаной почве. Singh et al. [51] сообщили, что датчики TDR315 и CS655 дали значение θv, аналогичное эталонному θ в песчаной почве (RMSE ³ м ⁻³ ), но расхождение было больше для глинистых почв. Увеличение содержания глины приводило к занижению θv TDR315 и завышению θv CS655 [51].Датчики CS616 и Hydra Probe недооценили θv в песчаных почвах (рис. 4c, d). Напротив, Evett et al. [59] обнаружили, что CS616 завышает θv, а Hydra Probe завышает ε _a по сравнению с TDR (наклон = 1,437, R ² = 0,966, RMSE = 1,08) больше, чем Acclima, который был сильно скорректирован с помощью полученного из TDR ε _a. (наклон = 1,108, R ² = 0,996, RMSE = 0,256). В нашем исследовании датчики 5TE, CS655 и TDR315 очень точно определяли θv (R ² ≥ 0.9604; Рис. 3d, Рис. 4a и Рис. 5a).

3.2. Уравнения калибровки для конкретных почв

Мы создали уравнения калибровки для нескольких песчаных почв, представляющих наиболее распространенные типы, используемые для выращивания цитрусовых во Флориде (Рисунок 6; Рисунок 7). Показания датчиков были сняты по возрастающим значениям θv, что позволило успешно установить уравнения калибровки для конкретных почв для всех датчиков, во всех отобранных почвах и на двух испытанных глубинах. Датчики с выходным напряжением, периодом и диэлектрической проницаемостью следовали аналогичным тенденциям для всех типов почвы и глубины почвы.Наклоны на всех почвах различались для каждого датчика, что свидетельствует о том, что требуются калибровочные уравнения для конкретных почв для повышения точности датчика в зависимости от используемой почвы. Такой результат ожидается, поскольку были оценены несколько SMS, и большинство исследований пришли к выводу, что точность датчика может быть значительно увеличена за счет использования уравнений для почвы или участка, определенных в лаборатории и в поле, вместо использования общих уравнений, предоставленных производителями. [60,61,62]. В этом исследовании уравнения были установлены в соответствии с различными факторами, включая датчик, тип почвы и глубину почвы.Линейные, квадратичные или независимые члены более высокого порядка каждого уравнения были определены с помощью регрессионного анализа с использованием электрической проницаемости, напряжения или периода в качестве независимой переменной и θv, определенного гравиметрическим методом, в качестве зависимой переменной. Показания датчиков снимались с приращением θv, получая диапазон значений, который позволял определить уравнение для каждого грунта и глубины. В результате калибровочное уравнение для конкретной почвы на обеих глубинах представило R ² в диапазоне от 0.От 83 до 0,99 для почвы Pineda (Таблица 4), от 0,81 до 0,99 для почвы Riviera (Таблица 5), от 0,81 до 0,99 для почвы Candler (Таблица 6), от 0,46 до 0,99 для почвы Astatula (Таблица 7) и от 0,79 до 0,99 для почвы Immokalee (таблица 8). На основе определения калибровочных уравнений для конкретной почвы были рассчитаны новые значения RMSE. За исключением случаев 10HS (0,129 м ³ м ⁻³ ) и GS3 (0,054 м ³ м ⁻³ ), все датчики имели более низкое среднеквадратичное значение, чем указано в стандартном уравнении производителя (5TE = 0.018; CS616 = 0,025; CS650 = 0,024; CS655 = 0,020; GS1 = 0,030; Зонд Гидры = 0,024; TDR310S = 0,019; TDR315 = 0,022; TDR315L = 0,019; и TDT-ACC-SEN-SDI = 0,022 м ³ м ⁻³ ). Факторы, повлиявшие на увеличение RMSE для датчиков 10HS и GS3, до сих пор неизвестны. Однако важно отметить, что эти датчики показали самый высокий CV по сравнению с другими протестированными датчиками (Таблица 3). Хигнетт и Эветт [63] указали, что для эффективного управления орошением, основанного на определении содержания влаги в почве, RMSE оценки содержания воды должно быть между 0.01 и 0,02 м ³ м ⁻³ . Таким образом, согласно RMSE, представленному в таблице 3, ни один из оцениваемых датчиков не будет иметь точности, необходимой для определения содержания воды с использованием общего уравнения производителя. Следовательно, чтобы уменьшить коэффициенты вариации в максимально возможной степени и найти наименьшее RMSE, следует использовать уравнения калибровки для конкретных почв для повышения точности датчика. Наши результаты показывают, что использование уравнения для конкретных почв оказало заметное влияние на улучшение точность определения θv в песчаных почвах Флориды.ВАЗ и др. [4] также сравнили характеристики общих калибровочных уравнений производителя для различных датчиков (CS616, Hydra Probe, 5TE и 10HS) с уравнениями для конкретных почв, разработанными для семи почв с различной текстурой. Эти авторы также продемонстрировали, что калибровка для конкретных почв повышает точность измерений до значений в диапазоне от 0,02 до 0,03 м ³ м ⁻³ . Это улучшение необходимо для песчаных почв, подобных тем, которые используются для выращивания цитрусовых во Флориде, поскольку водоудерживающая способность снижается из-за наличия крупных пор в песчаных почвах с содержанием песка более 96–97%.Fares et al. [16] также пришел к выводу, что уравнения калибровки для конкретных почв могут смягчить влияние различных свойств почвы и повысить точность датчиков для измерений содержания воды. Результаты полевых испытаний в супесчаных суглинках и супесчаных песчаных почвах показали, что линейная калибровка для TDT, CS616 , а датчики 5TE могут уменьшить погрешность заводской калибровки θv до менее 0,02 ± 0,035 м ³ м ⁻³ [49]. Предыдущие исследования также отметили, что RMSE в θv было меньше при использовании калибровок для конкретного места по сравнению с обычными калибровками [5,64,65].Singh et al. [53] сообщили, что калибровка для конкретной почвы привела к значительному повышению точности θv за пределами заводской калибровки. RMSE CS616 превысил 0,10 м ³ м ⁻³ на обеих глубинах при использовании стандартной калибровки и упал ниже 0,02 м ³ м ⁻³ для данных по глубине и комбинированных данных при использовании калибровки для конкретной почвы. Авторы заметили, что RMSE оцениваемых датчиков (5TE, EC5, Hydra Probe2, CS616, CS655 и TDR 315), установленных на глубине 0.15 и 0,76 м были ниже 0,015 м ³ м ⁻³ с использованием песка для калибровки регрессии для конкретных почв и ниже 0,020 м ³ м ⁻³ , как определено путем объединения всех калибровок регрессии.

Подставка MCM-41 для сверхмалых наночастиц γ-Fe2O3 для удаления h3S (Журнальная статья)

Кара, К., Ромби, Э., Мусину, А., Мамели, В., Арду, А., Санна Ангоци, М., Ацори, Л., Низнанский, Д., Синь, Х. Л., и Каннас, К. Подставка MCM-41 для сверхмалых наночастиц γ-Fe2O3 для удаления h3S . США: Н. П., 2017. Интернет. DOI: 10.1039 / C7TA03652C.

Кара, К., Ромби, Э., Мусину, А., Мамели, В., Арду, А., Санна Ангоци, М., Ацори, Л., Низнанский, Д., Синь, Х.Л., и Каннас, К. Подставка MCM-41 для сверхмалых наночастиц γ-Fe2O3 для удаления h3S . Соединенные Штаты.https://doi.org/10.1039/C7TA03652C

Кара, К., Ромби, Э., Мусину, А., Мамели, В., Арду, А., Санна Ангоци, М., Ацори, Л., Низнанский, Д., Синь, Х.Л., и Каннас, К. Сидел . «Носитель MCM-41 для сверхмалых наночастиц γ-Fe2O3 для удаления h3S». Соединенные Штаты. https://doi.org/10.1039/C7TA03652C. https://www.osti.gov/servlets/purl/1425090.

@article {osti_1425090,
title = {Поддержка MCM-41 сверхмалых наночастиц γ-Fe2O3 для удаления h3S},
author = {Кара, С.and Rombi, E. и Musinu, A. и Mameli, V. и Ardu, A. и Sanna Angotzi, M. и Atzori, L., и Niznansky, D. и Xin, H. L. and Cannas, C.},
abstractNote = {В этой статье MCM-41 предлагается для создания мезоструктурированных сорбентов на основе Fe2O3 в качестве альтернативы другим носителям из диоксида кремния или оксида алюминия для среднетемпературного удаления h3S. MCM-41 был синтезирован в виде микрометрических (MCM41_M) и нанометрических (MCM41_N) частиц и пропитан с помощью эффективной процедуры с двумя растворителями (гексан-вода) для получения соответствующих композитов γ-Fe2O3 @ MCM-41.Активная фаза однородно диспергирована в каналах размером 2 нм в форме сверхмалых наночастиц маггемита, обеспечивающих высокую реактивность активной фазы. Конечные микрометрические (Fe_MCM41_M) и нанометрические (Fe_MCM41_N) композиты были испытаны в качестве сорбентов для удаления сероводорода при 300 ° C, и результаты сравнивались с эталонным сорбентом (коммерческий ZnO без подложки) и аналогичным сорбентом на основе диоксида кремния (Fe_SBA15). Сорбенты на основе MCM-41, имеющие наибольшую площадь поверхности, показали превосходные характеристики, которые сохранялись после первого цикла сульфидирования.В частности, микрометрический сорбент (Fe_MCM41_M) показал более высокое значение SRC, чем нанометрический (Fe_MCM41_N), из-за низкой стабильности наноразмерных частиц во времени, вызванной их высокой реакционной способностью. Наконец, более того, низкая температура регенерации (300–350 ° C), помимо высокой способности к удалению, делает системы на основе MCM41 альтернативным классом регенерируемых сорбентов для термически эффективных процессов очистки в системах с комбинированными циклами интегрированной газификации (IGCC).