Как разобрать заднюю дверь лада гранта: Как разобрать заднюю дверь Лада Гранта

МИШЕЛЬ МАРТИН, ВЕДУЩИЙ:

Сегодня мы собираемся начать с рассмотрения продолжающихся усилий по эвакуации мирных жителей из Афганистана. Сегодня Пентагон признал опасные условия вокруг аэропорта в Кабуле, назвав это нестабильной и динамичной ситуацией.Тем не менее, американские военные заявляют, что с прошлой недели они уже эвакуировали из Афганистана около 17000 человек. Сейчас в Афганистане основное внимание уделяется США, но Америка — не единственная страна, которая спешит вывести людей из этой страны. После США у Германии было самое большое военное присутствие там, и она тоже проводит собственную эвакуацию.

Ранее сегодня министр обороны Германии сообщил журналистам, что их военные перебросили по воздуху почти 2000 человек из Кабула. Но с учетом того, что Германия уже приняла более полумиллиона афганских беженцев за последние несколько лет, намного больше, чем США.С., теперь вопрос в том, будут ли приветствоваться еще беженцы. И это становится вопросом предвыборной кампании в преддверии сентябрьских выборов. Эсме Николсон получила отчет из Берлина.

ESME NICHOLSON, BYLINE: Пока немецкие солдаты в Кабуле пытаются эвакуировать афганцев, которые помогали им в течение последних двух десятилетий, политики в Берлине, которые готовятся к выборам, играют в виноватую игру, почему эвакуация не началась раньше. Тем временем афганцы в Германии протестуют перед зданием министерства иностранных дел, чтобы вывести своих родственников из Афганистана.Тридцатидвухлетний Ахмад (ph), который не назвал свою фамилию из-за страха за свою семью дома, проработал девять лет в немецких войсках. Он приехал в Германию в 2015 году, но его семья все еще находится в Афганистане.

АХМАД: (через переводчика) Я думаю о своей семье днем ​​и ночью. Я не вижу способа отвести их в безопасное место и не могу вернуться. Поскольку я работал в армии, моя семья сейчас в опасности. В свой первый день работы в армии я спросил их, что будет, если моя семья или я попадем в беду.И мне сказали, что немецкая армия поддерживает меня. Теперь этот день настал, и о нас забыли.

НИКОЛСОН: Его опасения оправданы. Немецкая телекомпания Deutsche Welle подтвердила в четверг, что талибы застрелили родственника репортера, работающего на его пушту, и добрались до Германии. Правительство Германии обещает помочь тем, кого наняло напрямую, но это неясно для тех, кто работал в других организациях или в качестве субподрядчиков и фрилансеров. Хотя в Германии широко распространено беспокойство по поводу тяжелого положения афганцев, оставшихся вынести правление Талибана, сама миссия никогда не пользовалась популярностью.

ТОМАС ВИГОЛЬД: Общественное мнение считает, что эти 20 лет были напрасными.

НИКОЛСОН: Томас Вигольд сообщает о вооруженных силах Германии.

ВИГОЛЬД: И это еще хуже, когда речь идет об одной из основных задач немецких вооруженных сил, а именно обучении и консультировании афганской национальной армии, потому что эта армия в большинстве случаев не произвела ни единого выстрела, передав свои базы талибам. . И вот солдаты задаются вопросом — зачем мы тренировали этих людей?

НИКОЛСОН: Эксперт по безопасности Яна Пульерин, возглавляющая Европейский совет по международным отношениям в Берлине, говорит, что местные политики нервничают по поводу беженцев из-за сентябрьских выборов.Политика канцлера Ангелы Меркель 2015 года, разрешающая въезд беженцев из Сирии, спровоцировала рост крайне правого популизма. Но Пульерин говорит, что Германия и Европа с тех пор ограничили иммиграцию.

ЯНА ПУЛЬЕРИН: Если вы посмотрите на то, как трудно стало добраться до Европы, это фантомные дебаты, потому что мы обсуждаем то, что вряд ли произойдет так же, как в 2015 году.

НИКОЛСОН: А для афганцев, добравшихся до Германии, многие из них все еще сталкиваются с неопределенностью. Ахмад приехал шесть лет назад, но убежище ему не предоставили.

АХМАД: (через переводчика) У меня есть временное разрешение на пребывание здесь, которое я должен продлевать каждые три месяца. Это означает, что мне не разрешают работать, и я не могу спать, потому что беспокоюсь.

НИКОЛСОН: Этот шаткий статус официально известен как гедулдет, что означает терпимый. Ахмад не только живет в страхе быть депортированным, но и говорит, что после 20 лет вмешательства Запада в его страну, он надеялся на большее, чем просто терпимость.

Для новостей NPR: я Эсме Николсон из Берлина.

Авторские права © 2021 NPR. Все права защищены. Посетите страницы условий использования и разрешений на нашем веб-сайте www.npr.org для получения дополнительной информации.

стенограмм NPR создаются в срочном порядке Verb8tm, Inc., подрядчиком NPR, и производятся с использованием патентованного процесса транскрипции, разработанного NPR. Этот текст может быть не в окончательной форме и может быть обновлен или изменен в будущем. Точность и доступность могут отличаться. Авторитетной записью программирования NPR является аудиозапись.

Наша система финансирования школ несправедлива и сдерживает Австралию. Вот как это исправить

Прошло пять лет с тех пор, как Отчет Гонски был заполнен, а плоть выброшена.

В Австралии сейчас есть два почти полностью финансируемых государством, но очень разных школьных сектора.

Сектор государственных школ получает все свое текущее финансирование (кроме добровольных взносов) от правительств и должен принимать всех учащихся, которые хотят учиться.

Он обслуживает студентов из всех социально-экономических слоев, распределенных на 52 процента ниже и на 48 процентов выше контрольного среднего, установленного Индексом социально-образовательных преимуществ сообщества (ICSEA), показателем социального и образовательного уровня учащихся.

Неправительственный сектор, охватывающий католические и другие религиозные системы, а также независимые школы, также получает регулярное финансирование от правительства.

Они взимают сборы на уровнях, не подлежащих установлению правительством, и они могут занимать деньги для капитальных работ и обслуживать ссуды из своего общего текущего дохода.

Эти школы обслуживают гораздо более узкий круг учащихся, чем государственные школы: католические школы сейчас набирают только 11 процентов своих учеников из ниже среднего ICSEA; для независимых школ этот показатель составляет всего 5%.

Отдельно, но не равно

Любой, у кого хватит терпения провести достаточно времени на веб-сайте «Моя школа», может убедиться, что объем государственного финансирования негосударственных школ сейчас огромен.

Более 91 процента католических школ получают от 90 до 99 процентов финансирования государственных школ на том же уровне ICSEA; и 79 процентов независимых школ получают от 80 до 95 процентов финансирования государственных школ на том же уровне ICSEA.

Со времени выпуска Доклада Гонски государственные расходы на негосударственные школы увеличивались на 6 процентов в год по сравнению с 3 процентами для государственных школ.

Родителей предупредили о повышении платы за обучение

Есть опасения, что плата за обучение вырастет, если правительство не разработает «последовательную стратегию» финансирования школ.

Несмотря на гарантированный уровень государственного финансирования, большинство негосударственных школ, тем не менее, продолжают увеличивать плату за обучение.

Многим не требуется полное или даже частичное государственное финансирование для обеспечения высококачественного образования.

Кроме того, система государственных школ имеет определенные обязательства и подотчетность правительству.

Несмотря на получение государственных средств, негосударственные школы имеют избирательный процесс зачисления, могут по закону отказать в приеме, имеют установленное законом освобождение от ряда антидискриминационных положений (которые не всегда выполняются) и не подпадают под действие законодательства о свободе информации.

Государственные школы делают тяжелую работу

Социально-образовательный градиент ОЭСР, который связывает образовательную успеваемость с социально-экономическим статусом, для Австралии намного круче, чем в других западных странах, что отражает резкое влияние неблагоприятного положения на успеваемость в этой стране.

Хотя государственные школы Австралии охватывают весь спектр достижений, они являются основным источником образования для учащихся из малообеспеченных семей.

Неправительственный сектор, чей вес в подавляющем большинстве находится в верхней части шкалы ICSEA, должен делать гораздо меньше тяжелой работы в сфере образования.

Ситуация неуклонно ухудшается.Правительства Содружества и штатов никогда не тратили на образование больше, чем в настоящее время, однако наши национальные показатели в области образования продолжают снижаться.

Неужели это действительно то, чего хочет Австралия?

Воспитание образовательного низшего класса не в наших национальных интересах.

Дети в наших школах, находящихся в крайне неблагоприятном положении, характеризуются не только низким социально-экономическим статусом, измеряемым доходом родителей, образованием и занятостью, но и множеством недостатков.

Типичная пригородная государственная школа, обслуживающая сообщество мигрантов, может иметь 80 процентов детей с языковым образованием, отличным от английского, из 10 или более разных языковых групп, проживающих в стране менее трех лет и, вероятно, не останутся в школе надолго. (потому что родители ищут работу).

В региональном центре набор обычно включает много детей длительно безработных, некоторые из которых никогда не читали, даже не держали в руках книгу или знают, что страницы перевернуты. справа налево.

Такие школы — неотложные отделения австралийского образования. Тем не менее, они лишены специальной поддержки, нормальной в таких обстоятельствах в больнице.

Детям из социальной неблагополучной среды требуется немедленная диагностика потребностей в обучении, а также немедленное и интенсивное индивидуальное обучение.

Им требуется индивидуальное обучение и обучение в небольших группах, логопеды, консультанты, сотрудники по связям со школой / семьей, включая переводчиков, и ряд других видов поддержки.

А для этого нужны деньги.

Гонски о гораздо большем, чем справедливый ход

Образование должно быть общественным благом для нации, а не позиционным благом для некоторых: оно требует стратегически дифференцированного финансирования, направленного на наиболее нуждающиеся области. Вот чего добивался Гонски.

Гонски был больше, чем справедливость и справедливость для всех детей. По сути, речь шла о создании нашего национального запаса человеческого капитала.

До 8 лет ребенок учится читать. Кроме того, цель — читать, чтобы учиться.

Если дети все еще фонетически произносят большинство слов в возрасте 12 лет, их понимание будет слабым, их обучение будет ограничено, и, скорее всего, они не полностью выздоровеют.

Использование любых ресурсов, необходимых для обучения ребенка чтению, отвечает не только интересам ребенка, но и национальным интересам, чтобы будущий взрослый был трудоспособным, квалифицированным, творческим и самодостаточным.

Каждому ребенку — будь то из семьи в четвертом поколении с доходом в три раза выше среднего по стране или из семьи, которая была безработной в течение трех поколений, или из недавно прибывшей семьи беженцев, не говорящей по-английски, — следует предоставить такой вид и объем индивидуальной поддержки, необходимой для реализации их потенциала.

Что нужно сделать?

1. Отдельная школа, а не система, должна стать единицей измерения потребностей в соответствии с общим шаблоном для всей страны.

Существующие источники данных делают это возможным. Общие потребности каждого сектора должны строиться снизу вверх, как сумма образовательных потребностей школ в секторе.

Финансирование сектора больше не должно определяться сверху вниз путем политических переговоров с лидерами системы, такими как власти штата, независимые школьные интересы, церковные власти и Австралийский союз образования.

Борьба за финансирование может затянуться

Борьба между Содружеством и штатами, похоже, затянется до июньской встречи COAG.

2. Финансирование Содружества и штата должно быть объединено, а общие приоритеты финансирования должны определяться Советом по образованию COAG.

Предложение Гонски по стандарту школьных ресурсов достигло бы этого: нынешний стандарт этого не делает. Оба уровня правительства несут ответственность как по отношению к государственным, так и по отношению к негосударственным школам.

3. COAG должен определить долю общих потребностей, которые правительства могут позволить себе удовлетворить в течение периода финансирования.

4. Имеющееся финансирование должно распределяться в соответствии с потребностями после гораздо более реалистичной, чем в настоящее время, оценки способности негосударственных школ обеспечивать свои стандарты школьных ресурсов за счет платы за обучение и инвестиций. Школам, государственное финансирование которых будет сокращено, должно быть предоставлено достаточное время для перехода.

5. В качестве условия получения государственного финансирования должен быть установлен предел (рассчитанный по градуированной шкале) для уровня оплаты, который может взиматься негосударственными школами.

Австралия на распутье

В отсутствие предложения по переосмыслению текущего процесса финансирования школ у государственных министров нет другого выхода, кроме как призывать к неуместно названным «последним двум годам финансирования Гонски».

Хотя это могло бы временно облегчить положение школ, находящихся в неблагоприятном положении, дополнительное финансирование стратегически нецелесообразно в долгосрочной перспективе. В соответствии с текущими договоренностями, часть финансирования, необходимого школам, находящимся в неблагоприятном положении, будет по-прежнему поступать в другие школы.Общая стоимость образования будет продолжать расти по спирали без каких-либо изменений в нашем социально-образовательном градиенте.

Ничего серьезного не может быть достигнуто путем прекращения финансирования самых богатых негосударственных школ, на которые обучается менее 5 процентов школьного населения.

Это была бы значительная экономия в размере 900 миллионов долларов в год, но это не помогло бы устранить настоящую причину проблемы. Что необходимо, так это реформа корня и филиалов, основанная на стратегическом перераспределении имеющихся средств с учетом потребностей и без учета секторов.

Австралия находится на перепутье.

Будет ли качественное образование по-прежнему признаком социального положения, или у наших политических хозяев хватит смелости действовать в долгосрочных национальных интересах и гарантировать, что оно станет общественным благом для всех?

Кен Бостон АО — бывший генеральный директор Департамента образования Нового Южного Уэльса и входил в состав экспертной комиссии Гонски.

Спросите эксперта: тонкое искусство лепки — и почему его лучше оставить профессионалу

Из выпуска Acoustic Guitar за май / июнь 2021 года | Мартин Кейт

Q: В какой момент вы решаете, что лады должны быть заменены? Какими советами вы можете поделиться в отношении ладов? Каковы последствия игры на гитаре со слишком изношенными ладами? Может ли владелец легко заменить лады или оставить это мастеру во время обычного обслуживания установки? Лады сложно одевать? Мы очень ценим ваше понимание.

— Art Bouthot

A: Спасибо за вопросы — это отличная тема. Лепнина — это, пожалуй, самая распространенная работа в мастерской по ремонту гитар. Будь то создание инструмента с нуля, восстановление старинного коллекционного предмета или просто установка новой гитары начального уровня, вполне вероятно, что потребуется некоторое количество лепнины.

Ношение ладов инструмента может привести к нескольким нежелательным последствиям. Первый и самый очевидный — это жужжание нот в определенных позициях.Поскольку очень немногие из нас играют каждую ноту на гитаре одинаково часто, некоторые лады, обычно 1–5, обычно изнашиваются быстрее, чем остальные.

Чтобы гитара играла чисто, без гудения, верхние части ладов должны быть идеально выровнены от одного к другому. По мере того, как некоторые из них изнашиваются, они оказываются ниже своих ближайших соседей, у которых меньше действий. Жужжание — неизбежный результат. Небольшие выемки на изношенных ладах также могут затруднить плавное сгибание нот.

Еще одна проблема изношенных ладов — интонация.Шкала ладов тщательно продумана и обрезана, чтобы точно разместить центр каждого лада в правильном положении. Разница всего в десять тысячных дюйма (толщина простой струны 0,010) может привести к слышимой расстроенной ноте. По мере износа лада первоначальная закругленная форма короны меняется на плоское плато, а точка звона струны смещается вперед к переднему краю этой поверхности. На больших ладах с заметным износом это может означать изменение примерно на 0,030 дюйма — более чем достаточно, чтобы вызвать проблемы с интонацией у любого, у кого хорошо настроенный слух.По этой причине после любого выравнивания верхние части ладов необходимо тщательно отшлифовать до ровной короны.

Почему это изнашивается? Традиционный лад изготовлен из нейзильбера, который представляет собой смесь меди и никеля (настоящего серебра в сплаве нет). Струны сделаны из смеси сплавов — стали, фосфористой бронзы и никеля, и это лишь некоторые из них. Сталь тверже, чем мельхиор, и каждый раз в конечном итоге она побеждает в битве. Тем не менее, даже при использовании бронзы и других материалов для обертки, твердость которых ближе к самим ладам, абразивная текстура обертки все равно будет довольно эффективно шлифовать лады.Вот почему лады в низком положении часто показывают чистые маленькие ложечки под простыми струнами и рифленые выступы износа под нижними струнами.

Удивительно, но в некоторых случаях рисунок износа на соседних ладах может быть достаточным, чтобы они не гудели, несмотря на значительную потерю ладового материала. Я видел несколько гитар с ладами, которые выглядели почти изношенными, но при этом играли без заметного гудения. По этой причине я обычно придерживаюсь консервативного подхода к работе на ладу и предлагаю его только в том случае, если игрок испытывает какие-то проблемы.Если нет гудения, а действие и интонация разумные, то я обычно не предлагаю рефрет или выравнивание.

За последнее десятилетие производители представили несколько новых сплавов для ладов, которые набирают популярность. Проволока из нержавеющей стали значительно тверже традиционной проволоки и, как было доказано, намного лучше сопротивляется износу. С ним труднее работать, и его установка требует больше времени, поэтому многие мастера берут за это дополнительную плату. Мнения мастеров и исполнителей разнятся по поводу того, влияет ли сплав ладов на тональность инструмента.Некоторые клянутся, что нержавеющая сталь придает более яркий, немного более металлический оттенок, в то время как другие говорят, что они вообще не слышат никакой разницы.

Еще один недавний выход на сцену — золотой лад EVO, названный в честь его характерного золотого цвета. Этот сплав изначально разрабатывался как гипоаллергенный металл для медицинских целей, но нашел свое место в качестве хорошей альтернативы нейзильбер для ладов. По твердости и износостойкости он находится где-то между мельхиоровым серебром и нержавеющей сталью, что делает его хорошим компромиссом между характеристиками и простотой установки.

Теперь к последней части вашего вопроса. Хотя я обычно рекомендую игрокам применять практический подход к настройке и обслуживанию, я бы рекомендовал проявлять осторожность, когда дело доходит до работы с резьбой. Большая часть ухода за ладом — это улица с односторонним движением: вы можете удалить только материала, а небольшая шлифовка может иметь большое значение.

Первым важным шагом является простая диагностика проблемы — если у вас гудящий лад, это может быть по ряду причин: низкий прорезь под гайку, высокий или свободный лад, низкий лад, неправильный рельеф грифа и т. Д. .В некоторых случаях отправка сообщений является правильным решением, но в других случаях может вызвать больше проблем. Опытные мастера знают, что выравнивание ладов — это, как правило, самая последняя часть настройки / регулировки, после того как устранены все другие потенциальные причины жужжания ладов.

Повторная перетяжка инструмента имеет свой набор потенциальных ловушек. Удаление старых изношенных ладов может быть ужасно разрушительным для грифа, если не сделано осторожно. Я видел в остальном безупречные винтажные гитары с ужасно потрескавшимися грифами из-за плохих рефретов.Иногда лады просто вдавливаются или приклеиваются, а в некоторых случаях, например, в винтажных крыльях, их даже вбивают боком от края накладки грифа. Знание того, как подходить к каждому случаю, значительно снизит вероятность неприятных косметических повреждений. (Примечание: мой мобильный телефон автоматически корректирует «рефрет» на «сожаление», что иногда вполне уместно.)

После удаления старых ладов важнейшим этапом является подготовка поверхности грифа. Довольно часто ее нужно отшлифовать до гладкой плоской поверхности.Выемки на ногтях можно заполнить или отшлифовать, а прорези для ладов нужно очистить, а иногда и углубить. Если на накладке грифа есть инкрустация, это иногда может быть деликатным процессом — шлифование жемчужной инкрустации — это не весело!

Получите подобные истории в своем почтовом ящике

Сами по себе слоты — это еще одна область, где несколько тысячных долей дюйма действительно могут иметь значение. Лад, предназначенный для прорези шириной 0,023 дюйма, будет ощущаться очень плотно в прорези 0,021 дюйма, и если вы столкнетесь с проблемой, то гриф может загнуться назад.(Учтите: крошечная разница в 0,002 дюйма на прорезь умножается на 20 прорезей до 0,040 дюйма — довольно много дополнительного материала, чтобы вдавить его в поверхность грифа.) Умные мастера по ремонту иногда используют эту технику компрессионного фреттинга в своих интересах. чтобы исправить искривленный гриф на винтажных гитарах без анкерных стержней, но когда это делается случайно, это может вызвать серьезные проблемы. Опытный строитель будет знаком с ощущением хорошо подобранного лада и паза, а также будет знать, слишком ли он натянут или слишком свободен.

Связанные накладки грифа требуют дополнительных шагов. Хвостовик лада (зазубренная часть, которая входит в прорезь) необходимо обрезать или подпилить с каждого конца, чтобы бусинка (видимая часть установленного лада) могла налегать на переплет. Это требует времени и некоторых специализированных инструментов (фрезы для резки заподлицо, файлы и, как правило, некоторые увеличительные средства просмотра).

Наконец, почти каждый ремонт включает в себя регулировку пазов для гаек, и, чаще всего, это означает новую гайку. Прорези для гаек изнашиваются и часто опускаются из-за предшествующей резьбы.Свежие лады обычно оказываются выше старых изношенных, и это может означать, что все прорези для гаек внезапно оказываются слишком низкими.

Имея это в виду, я рекомендую найти местного мастера, который сделает вашу лепнину. Это хлеб с маслом для любого гитарного техника, и разумная почасовая ставка — это небольшая плата за накопленный опыт и специализированные инструменты, необходимые для успешной работы. Хорошая работа с ладом имеет огромное значение для ощущения, тона и играбельности, и она будет полезна каждый раз, когда вы берете гитару в руки.

Мартин Кейт — мастер, мастер по ремонту и реставрации, а также рабочий музыкант из Вудстока, Нью-Йорк. martinkeithguitars.com

Эта статья впервые появилась в выпуске журнала Acoustic Guitar за май / июнь 2021 года.

Все, что вам нужно знать об исторической замене окон

Стоит ли ремонтировать оригинальные окна?

«NPS делает упор на ремонт, и вы тоже должны», — говорит Чик.«Если оригинальные окна можно отремонтировать, отремонтируйте их. Экспертная комиссия вашего исторического района будет любить вас за это ». Помимо сохранения истории и природных ресурсов, в некоторых случаях ремонт исторических окон может быть менее затратным. Однако при выборе ремонта или замены исторических окон следует учитывать несколько факторов.

Новые окна будут во много раз более энергоэффективными, чем существующие окна. И даже эффективность существующих окон может снизиться, если вы решите вернуть их в рабочее состояние.Старые деревянные окна, заклеенные краской, обеспечивают лучший погодный барьер, чем старые рабочие окна, и после того, как эти уплотнения сломаны, вы можете ожидать большего проникновения воздуха, что увеличит затраты на электроэнергию и снизит уровень комфорта. Старые деревянные окна также требуют частого ухода, который может быть дорогостоящим. Окна, подверженные воздействию сильной жары и солнца или влажного климата, могут нуждаться в ремонте каждые пару лет.

Если здание находится в небольшом городке, на некотором расстоянии от большого города, возможно, вам не удастся найти мастера, обладающего опытом и знаниями для выполнения этой работы.«Люди, которые ремонтируют исторические окна, больше похожи на ремесленников, чем на плотников, и их сейчас не так много, как в прошлые годы», — говорит Чик. Правильная подготовка важна не только для правильного выполнения работы, но и для безопасного выполнения ремонта. Ремонт старых окон может подвергнуть рабочих и окружающую среду воздействию опасных материалов, таких как свинец и асбест. Если вы живете в большом сообществе, рядом с вами может быть организация, которая предоставляет список квалифицированных подрядчиков и консультантов, например Heritage for Ohio.А если вы или местный плотник, незнакомый с консервационными работами, решите заняться ремонтом самостоятельно, по всей стране есть частные организации, которые предлагают онлайн-обучение и личные семинары, например, Rethos в Миннесоте.

Лучшие гитарные капо 2021: 10 лучших капо для акустической и электрогитары

Скромный каподастр — невероятно простое устройство. Проще говоря, это зажим для струн вашей гитары, предназначенный для увеличения высоты звука — точно так же, как гайка на более высоком ладу.Лучшие гитарные капо — идеальный инструмент, который позволит вам запихнуть сложные резкие или плоские тональности, или когда вам нужно транспонировать песню на более высокий тон, но при этом использовать те же формы аккордов. Каподастр — это основной продукт, и независимо от того, играете ли вы на акустической гитаре или на электрогитаре (или на обеих!), Мы рекомендуем каждому инвестировать в один из вариантов, описанных в этом руководстве.

Когда дело доходит до выбора, вы абсолютно избалованы сумасшедшим количеством моделей, доступных для покупки в Интернете за очень небольшие деньги.Но с таким большим выбором, как отличить дешевые подделки от лучших покупок? Вот где мы и начинаем, поскольку мы ближе познакомимся с некоторыми из лучших капо, доступных сегодня и для любого бюджета.

Наши виджеты сравнения цен прямо сейчас нашли лучшие цены в Интернете. У нас также есть несколько полезных советов по покупке, чтобы дать вам больше информации перед покупкой. Нажмите кнопку выше, чтобы отправиться прямо туда.

Лучшие гитарные капо: наш лучший выбор

G7th Performance 3 ART Guitar Capo вышел недавно, и мы до сих пор были им очень впечатлены.Он достаточно легкий, долговечный и почти так же быстро настраивается, как и очень удобная конструкция с быстросъемным пружинным зажимом. Основы здесь более чем описаны.

Вы также получаете преимущества технологии адаптивного радиуса G7th. Вы узнаете больше о радиусах грифа в нашем разделе советов по покупке, но достаточно сказать, что G7th можно использовать как с плоскими, так и с изогнутыми грифами с минимальными компромиссами при настройке. Достигнув прекрасного баланса между простотой, удобством использования и общим качеством, мы с радостью опустошили наши кошельки для G7th, несмотря на то, что цена была выше средней.

Лучшее на сегодняшний день G7th Performance 3 ART Guitar Capo сделок

Лучшие гитарные капо: Руководство по продукту

1. G7th Performance 3 ART Capo

Один из лучших гитарных капо на рынке. Но оправдывает ли это ценник?

Цена: $ 55 / £ 39 | Тип: Сцепление с пружинной оберткой | Вес: 63 г | Регулируемое натяжение: Да | Подходит для: Шестиструнной акустической или электрогитары

Подходит для любого радиуса грифа

Простота в использовании, даже одной рукой

Достаточно легкий и тонкий

Это не дешево

Каподастр можно купить менее чем за 10 баксов, так в чем же грандиозная идея G7th с ценой чуть менее 55 долларов? Неужели это того стоит?

Что ж, в G7th Performance 3 ART используется фирменная технология Adaptive Radius — система на верхней панели, которая подстраивается под кривизну грифа вашей гитары.Выгода? Теоретически не должно быть жужжания струн на ладу каподада, поскольку устройство даже соприкасается со всеми шестью струнами. В свою очередь, это также дает наилучшую возможную стабильность настройки.

В сочетании с прочной конструкцией, удобством использования одной рукой и, на самом деле, не самым дорогим предложением, G7th заслуживает внимания любого гитариста, которому требуются высокие характеристики от своих капо.

2. Shubb C1 Steel String Capo

Самая последняя версия отраслевого стандарта

Цена: $ 26 / £ 20 | Тип: Рычаг / винт | Вес: 68 г | Регулируемое натяжение: Да | Материал: Никелированная латунь | Подходит для: Шестиструнная акустическая или электрогитара

Изящная форма не мешает игре

Модели C2-5 доступны для 12-струнных, банджо и т. Д.

Рычаг / винт медленнее, чем у других моделей

Со стандартным Капо серии C Shubb интегрировали многие функции, ранее доступные только в модели S.Значит, спецификация Deluxe по стандартной цене. Торговаться! Капо изящного дизайна, его миниатюрная рамка не должна мешать вам играть на зажатом ладу.

Просто переверните рычаг, чтобы зафиксировать капо, или снимите его — то есть после того, как вы отрегулировали винт-натяжитель на оптимальное давление. Конечно, это всего лишь 20-секундная задача, но если вы регулярно перемещаете каподастик вокруг грифа или на вторую гитару, скорость быстросъемного каподастера может быть предпочтительнее.

Тем не менее, это небольшая проблема.Это классический дизайн, хорошо продуманный отраслевой стандарт, который обеспечит годы надежной эксплуатации. Покупайте с уверенностью.

3. Капо Ernie Ball Axis

Один из самых простых в использовании капо по отличной цене

Цена: 15 долларов США / 15 фунтов стерлингов | Тип: Быстросъемный пружинный зажим | Вес: 99,8 г | Регулируемое натяжение: Нет | Материал: Легкий алюминий | Подходит для: Шести- и семиструнной акустической или электрогитары

Быстрая работа одной рукой

Работает с изогнутыми и плоскими грифами

Подходит для шестиструнных и семиструнных гитар

Эти руки могут попасть в way

Очаровательно выглядящий капо Эрни Болла Axis, безусловно, имеет сдержанную привлекательность, но его таланты не являются чисто поверхностными.Его главная сила — простота управления одной рукой. Нужно переместить каподастр в середине песни? Без проблем! Просто возьмите ось и переместите ее. Пружины делают за вас натяжение. Пока вы будете осторожны, чтобы не согнуть струны в процессе, использовать капо не легче, чем это.

И не нужно беспокоиться об искривлении грифа гитары. Axis имеет два обтянутых резиной дужки — один для плоского грифа, а другой — для закругленного. Просто переверните каподастр, чтобы он соответствовал вашей доске.Руки могут немного мешать, но в целом эргономика довольно хорошая, поэтому мы не жалуемся.

4. Капо Dunlop Trigger

По-прежнему среди лучших капо…

Цена: 20 долларов США / 18 фунтов стерлингов | Тип: Быстросъемный пружинный зажим | Вес: 63,5 г | Регулируемое натяжение: Нет | Материал: Авиационный алюминий | Подходит для: Шестиструнная акустическая или электрогитара

Простота использования

Надежное качество сборки

Жесткая конкуренция со стороны Эрни Болла

Только конструкция с одним радиусом

Каподастр Dunlop Trigger появился уже давно.Кто-то скажет, что это еще один из тех «отраслевых стандартов». Что ж, в 2020 году у него есть естественный конкурент в лице модели Ernie Ball Axis, оба являются быстроразъемными пружинными конструкциями. Как и в Axis, вы можете легко изменить тональность, просто нажав на подпружиненные рычаги триггера. Легкий!

Однако, несмотря на обнадеживающую прочную конструкцию Trigger, обеспечивающую стабильную интонацию при использовании, Axis отличается не только ценой, но и гибкостью. Но здесь нет ничего, что можно было бы не любить. Это отличный каподастр с доказанной долговечностью.Если он вам нужен, можете быть уверены, что Trigger вам пригодится.

5. Planet Waves D’Addario NS Capo Pro

Прекрасная эргономика от дизайнера Неда Стейнбергера, Джима Д’Аддарио и Planet Waves

Цена: $ 20 / £ 20 | Тип: Винт / пружинный зажим | Вес: 45 г | Регулируемое натяжение: Да | Материал: Авиационный алюминий | Подходит для: Шестиструнная акустическая или электрическая гитара

Эргономичный тонкий дизайн

Регулировка микрометра помогает минимизировать шум

Вам может понадобиться второй капо

Немногое

Легкий и тонкий, этот каподастр от D ‘addario разработан таким образом, чтобы оказывать как можно меньшее негативное влияние на вашу игру.Минимальная масса означает, что NS Pro не утяжеляет вашу гитару (потенциальная проблема при капоинге на 1-м или 2-м ладах), а его миниатюрный рост позволяет легко играть на каподаже.

Эта модель предназначена для гитар с закругленным грибом. Это означает, что вам понадобится еще один каподастр для классической гитары или инструментов с более плоским радиусом, которые, честно говоря, предлагает Д’Аддарио. Просто имейте в виду, что это не универсальный каподастик. Хотите сэкономить деньги? Взгляните на модель NS Lite Д’Аддарио — правда, это пластик, но из высокопрочного литого АБС-пластика, поэтому он должен выдерживать тяготы многолетнего использования.

6. Thalia Capos 200 Series

Предложение Thalia по премиальной цене обеспечивает отличную настройку и интонацию

Цена: 75 долларов США / 60 фунтов стерлингов | Тип: Быстросъемная обратная точка опоры | Вес: 91 г | Регулируемое натяжение: Нет | Материал: Цинк, литье под давлением | Подходит для: Шестиструнная акустическая или электрогитара

Красиво оформленная

Отличная настройка / интонация

Варианты индивидуального стиля

Регулируемое натяжение может быть предпочтительным

Thalia утверждает, что решила проблемы настройки традиционных капо, сопоставив их устройства Подушечки ладов должны соответствовать радиусу грифа гитары, что требует меньшего давления на струны.Включены 14 тюнинговых комплектов: пэды на семь радиусов как в стандартной, так и в высокой форме (в том числе для 12-струнных гитар). Просто вставьте комплект для настройки, соответствующий радиусу грифа вашей гитары.

Это каподастр премиум-класса, который хорошо выполняет свою работу. Мы предпочитаем регулируемое натяжение G7th — вам нужно немного силы, чтобы защелкнуть Thalia на месте. И, конечно же, надбавка к цене представляет собой довольно выгодное вложение, поэтому мы рекомендуем также сохранить бюджетный капо. Вы же не хотите потерять свою Талию за 75 долларов на концерте!

7.Paige Original 6-String Acoustic Capo

Установите и забудьте! Один из лучших доступных капо с запахом

Цена: 30 долларов США / 28 фунтов стерлингов | Тип: На запах | Вес: 45 г | Регулируемое натяжение: Да | Материал: Металл | Подходит для: Шестиструнный акустический

Равномерное давление обеспечивает хорошую интонацию

Оставьте его за гайкой, когда он не используется

Невозможно отрегулировать для определенных радиусов

Не самое быстрое смещение позиции

Нам просто нужно было включите обертку в наш список, и Paige станет достойным претендентом на ваши деньги.Натяжной винт расположен посередине задней части грифа, натягивая переднюю руку капо с равномерным давлением через гриф. Это конструкция, которая в значительной степени сводит к минимуму натяжение струны вбок, так что ожидайте стабильной настройки.

Версия для электрогитары включает более толстую резину, чтобы облегчить изгиб струны и приспособиться ко всем радиусам грифа, кроме самых пышных. Доступен также более широкий вариант — важная проблема с обертыванием. Обязательно измерьте размер грифа гитары, чтобы убедиться, что он подходит к Paige 2.Ширина 062 дюйма (или 2,187 для широкой модели) перед покупкой.

8. Guitto GGC-02 Revolver capo

Хорошо продуманный бюджетный капо от производителя новых аксессуаров Joyo

Цена: 10 долларов США / 14 фунтов стерлингов | Тип: Винт / пружинный зажим | Вес: 120 г | Регулируемое натяжение: Да | Материал: Цинковый сплав | Подходит для: Шестиструнная акустическая или электрогитара / гавайская гитара

Подлинно полезный съемник булавок и прорезь для выбора

Впечатляющее качество сборки по цене

Классный стиль револьвера

Большие ручки могут мешать игре

Итак, кто знал капо может включать в себя функции, помимо зажима струн на грифе гитары? Эти крутые коты из нового бренда аксессуаров Joyo, Guitto, вот кто!

В дополнение к подпружиненному зажиму с регулируемым винтом, это бюджетное предложение от китайской компании предлагает два действительно полезных дополнения.Во-первых, есть слот для запасного отмычки — приятный штрих! И, во-вторых, есть съемник бриджа, который поможет вам быстро заменить струны на вашей акустике.

Корпус из цинкового сплава, отлитый под вакуумом, с гальваническим покрытием, тоже должен быть хорошего качества. И даже если вы не являетесь постоянным пользователем каподастра, по этой цене все равно стоит держать один (или два) в сумке для этих импровизированных джемов.

9. Creative Tunings Универсальный стандарт SpiderCapo

Причудливый, креативный и определенно заслуживает второго взгляда

Цена: 40 долларов США / 30 фунтов стерлингов | Тип: Универсальное частичное капо с боковым захватом | Вес: 45 г | Регулируемое натяжение: Да | Материал: Вал из нержавеющей стали / ручка из алюминия | Подходит для: Шестиструнная акустическая или электрогитара

Создавайте альтернативные строчки без перенастройки гитары

Ладовые ноты выше или ниже каподастра

Могут препятствовать изгибу струн

На незажатых струнах сложно играть каподастр fret

Творческий подход к скромному устройству, SpiderCapo позволяет зажимать каждую струну индивидуально, в свою очередь предлагая мир альтернативных настроек — многие из которых вы, возможно, не пробовали бы иначе.И все это без перенастройки струны!

Вы можете, например, поместить SpiderCapo во 2-ю позицию, зажать ладовые струны открытого аккорда A и оставить остальные открытыми — это открытая настройка A. Однако вы можете капонировать только на один лад, поэтому более сложные аккордовые строи не подходят.

SpiderCapo подходит для любого радиуса грифа, но вы будете регулировать давление на каждой отдельной струне — потенциально медленный процесс. Кроме того, незатянутые струны нельзя раздражать в позиции каподада, что является странной причудой; выше или ниже каподастра все же подливка.

Тем не менее, если каподастр может подпитывать новые творческие идеи, это уже само по себе окупает цену входа. Скорее всего, он подойдет технически опытным акустическим фингеристам, но мы рекомендуем его любому игроку, ищущему новое вдохновение.

10. Kyser Pro / Am 6-струнный капо для гитары

Лучший каподастр для гитаристов с ограниченным бюджетом?

Цена: 8 $ | Тип: Винтовой зажим | Вес: 45 г | Регулируемое натяжение: Да | Материал: Легкий алюминий | Подходит к: Шестиструнная акустическая или электрогитара

Ну и цена!

Нет помощи пружины или рычага; только винтовой зажим

Больше резины на нижнем рычаге успокаивает

Эстетика

Спойлер! В другом месте этого списка есть капо лучшего качества.Так зачем же включать бюджетное предложение Кайсера в список «лучших капо», спросите вы? Что ж, это самая дешевая модель в нашем списке. Если вы хотите, чтобы каподастра «засунула в сумку и забыла об этом», то это идеальный вариант. Купите два или три и будьте уверены, что вы никогда не останетесь без него.

Да, это несколько утилитарно, но он будет выполнять свою работу лучше, чем любой эластичный тип с оберткой, всего лишь на крохотную часть вашего с трудом заработанного. Если у нас есть проблема, то это винтовой натяжитель, который вам нужно настраивать вручную каждый раз, когда вы перемещаете Pro / Am.Это немного зевота, но такой ценой мы действительно не жалуемся.

Лучшие гитарные капо: Совет по покупке

Вы можете сбить с толку все эти разговоры о радиусах грифа, но это не так. Радиус относится к кривизне этой важной части вашей гитары. Некоторые гитары (например, некоторые винтажные фендеры) имеют закругленные доски, тогда как другие почти плоские. Хотя у каждого из них есть свои преимущества, достаточно сказать, что разные конструкции грифа представляют собой компромисс в дизайне каподастра.

Закрепите закругленный каподастр на плоском грифе (или наоборот), и в итоге вы получите нежелательное жужжание струн (шум, издаваемый там, где струны не полностью зажаты) и плохую настройку (где струны резко выталкиваются из-за чрезмерного натяжения. капо). В идеальном мире каждый каподастр будет применять одинаковую силу ко всем шести струнам (и на каждой позиции лада), чтобы предотвратить эти проблемы.

В конечном счете, при выборе одного из лучших капо вы должны прежде всего выбрать тот, который подходит для вашей гитары.Большинство брендов предлагают широкий выбор вариантов, поэтому, если вы видите каподастр, который вам нравится, вероятно, он будет подходить вам по размеру. Как правило, их можно разделить на закругленные капо для более округлых грифов; более плоский дизайн, как правило, для шредди SuperStrats и классических гитар; и все-в-одном — капо, которые либо подходят для разных радиусов (например, G7th), либо включают в себя как плоскую, так и закругленную поверхность.

Существуют различные архитектуры каподастра, каждая из которых имеет свои преимущества и недостатки, но проблема радиуса грифа должна быть вашей самой большой проблемой.Как только вы определитесь с этим, возникает проблема между эргономикой, качеством сборки и функциями (и, эй, это помогает, если это тоже круто, верно?). Имея это в виду, в этом руководстве по лучшим гитарным капо мы рекомендовали только прочные, прочные капо. Если он из ткани, пластика или резинки, его нет!

Применение зондов FRET в анализе пластичности нейронов

Мозг представляет собой сильно взаимосвязанную функциональную сеть, состоящую из миллиардов нейронов, которые общаются друг с другом через синапсы.На протяжении всей жизни нейронные связи, которые поддерживают функцию мозга, модифицируются и уточняются в зависимости от активности, это явление называется нейрональной пластичностью. Механизмы пластичности могут влиять на функцию и структуру нейронов посредством модификаций на уровне синапсов, дендритов и аксонов (Citri and Malenka, 2008; Holtmaat and Svoboda, 2009).

Различные формы пластичности жестко регулируются сложной сетью каскадов передачи сигналов, которые являются результатом белок-белкового взаимодействия, посттрансляционной модификации, субклеточной транслокации белков, синтеза белков и т. Д.Следовательно, временная и пространственная точность этих событий имеет решающее значение для поддержки правильного функционирования мозга в развивающемся и зрелом мозге. Разработка зондов, которые предлагают пространственно-временное обнаружение этих клеточных событий, жизненно важна для нашей способности исследовать эти важные молекулярные механизмы в биологических системах. Для этой цели оптическая микроскопия позволяет регистрировать сложные и разнообразные нейронные сигналы с высоким временным и пространственным разрешением из живых биологических образцов.

Технологические достижения последних двух десятилетий внесли значительный вклад в нашу способность расширять методы флуоресцентной визуализации за пределы простого морфологического анализа. Одним из ключевых достижений является резонансная передача энергии Фёрстера (FRET). Впервые описанный Фёрстером (1946), метод описывает, как энергия «донорного» флуорофора может возбуждать «акцепторный» флуорофор, что приводит к испусканию света последним. Эффективность FRET зависит от двух основных факторов: расстояния между двумя флуорофорами и их взаимной ориентации.Эта функция позволяет рассчитать изменение расстояния и угла между двумя флуорофорами, что побудило Люберта Страйера называть FRET «молекулярной линейкой» (Страйер, 1978). Используя это свойство FRET, были разработаны различные оптические зонды для обнаружения аспектов различных клеточных функций in vitro и in vivo .

Чувствительность и совместимость визуализации FRET с визуализацией в реальном времени имеют решающее значение для анализа молекулярных механизмов пластичности нейронных цепей.В частности, в последние годы был достигнут большой прогресс в анализе синаптической пластичности возбуждающих синапсов в возбуждающих нейронах, которые обычно образуются на дендритных шипах (Hayashi and Majewska, 2005; Bosch and Hayashi, 2012). Визуализация FRET сейчас применяется in vivo и предлагает уникальную возможность изучить, как и когда изменяются нейроны или синапсы и какие сигнальные события способствуют таким изменениям в ответ на стимулы в неповрежденном мозге.

В этой статье мы дадим обзор основных и практических аспектов визуализации FRET, обобщим доступные в настоящее время датчики на основе FRET, а затем обсудим, как эти датчики продвинули наше понимание молекулярных механизмов, лежащих в основе нейрональной пластичности, в основном долгосрочной гиппокампа. потенцирование (ДП).

Мониторинг

В 1991 году группа Цзяня сделала первую попытку визуализировать живые клеточные функции с помощью FRET (Adams et al., 1991; Zhang et al., 2002). Они попытались визуализировать внутриклеточную динамику аденозин-3 ‘, 5’-циклического монофосфата (цАМФ), сконструировав зонд на основе цАМФ-зависимой протеинкиназы, в котором регуляторные и каталитические субъединицы были помечены флуоресцеином и родамином соответственно.При связывании цАМФ регуляторная субъединица отделяется от каталитической субъединицы, тем самым устраняя FRET.

Впоследствии они также сообщили о датчике напряжения FRET, использующем меченный флуоресцеином лектин в качестве донора и оксонол, анионное флуоресцентное соединение, в качестве акцептора в живых клетках (Gonzalez and Tsien, 1995). При мембранном потенциале покоя оба красителя локализуются на наружном листке плазматической мембраны, и возникает FRET. После деполяризации отрицательно заряженный оксонол перемещается к внутреннему листку плазматической мембраны и увеличивает расстояние от донора, что приводит к снижению эффективности FRET.

Однако подходы FRET с использованием флуоресцентных соединений с малой молекулярной массой технически сложны. Например, создание зонда цАМФ требует громоздкого процесса очистки белка, in vitro, химического связывания с красителями и введения в клетки. Успех зонда на основе оксонола во многом связан с идентификацией оксонола как флуоресцентной молекулы, которая перемещается через плазматическую мембрану при изменении мембранного напряжения.

Появление генетически кодируемых зондов FRET в конце 1990-х годов резко изменило ситуацию.Это во многом связано с развитием и распространением зеленого флуоресцентного белка (GFP) и его цветовых вариантов (Shaner et al., 2005). В эпохальном исследовании генетически кодируемых зондов FRET Miyawaki et al. разработали первый индикатор кальция на основе GFP, Cameleon, используя голубой флуоресцентный белок (CFP) в качестве донора и желтый флуоресцентный белок (YFP) в качестве акцептора (Miyawaki et al., 1997). Cameleon состоит из белка кальмодулина (CaM), слитого с последовательностью M13 (CaM-связывающий пептид из 26 остатков киназы легкой цепи миозина), фланкированного CFP и YFP.Мотив gly-gly между CaM и пептидом M13 придает этому зонду его конформационную гибкость. В отсутствие кальция CaM и последовательность M13 не взаимодействуют друг с другом. Однако в присутствии кальция они образуют комплекс, который сокращает расстояние между донорными и акцепторными флуорофорами, позволяя возникать FRET. Используя этот зонд, они наблюдали динамику кальция в живых клетках и продемонстрировали потенциал FRET для анализа динамики нейронных цепей. С тех пор зонды для других молекул, таких как цАМФ, гуанозин-3 ‘, 5’-циклический монофосфат (цГМФ) и Cl ^—, малый GTP-связывающий белок (малый G-белок), фосфоинозитид и сигнальные события e.g., развито фосфорилирование (таблица).

Таблица 1

Список генетически кодируемых зондов FRET .

По сравнению с зондами FRET на основе низкомолекулярных флуоресцентных молекул, генетически кодируемые зонды FRET обладают рядом преимуществ. Их можно легко сконструировать с помощью стандартных методов молекулярной биологии, что делает конструкцию зонда простой и гибкой. Они могут быть экспрессированы в клетках путем простого введения векторной ДНК в нейроны без очистки белков и химической маркировки. Использование подходящего метода трансдукции ДНК или промотора для экспрессии зонда позволяет маркировать специфический тип клеток.Благодаря этим техническим преимуществам, генетически закодированные зонды FRET в настоящее время широко используются в качестве стандартных инструментов в биологических системах.

Стратегии конструирования зондов

Множественные генетически закодированные зонды FRET были разработаны для использования в нейрональных и ненейрональных клетках. Эти зонды можно разделить на несколько категорий в зависимости от подхода, используемого для обнаружения различных типов биологических явлений (таблица, рисунок).

Стратегии проектирования зондов . Голубой, донор; желтый, акцепторный. (A) Протеаза. (B) Межмолекулярное взаимодействие белков. (C) Состояние полимеризации. (D) Изменение внутренней конформации белка, которое можно использовать для обнаружения активации белка, если оно сопровождает изменение конформации структуры. (E) Изменение конформации слитого белка, вызванное активацией / инактивацией. Показан пример обнаружения активации малой ГТФазы (зеленый) малым белком, связывающим ГТФазу (красный). (F) Изменение конформации слитого белка, вызванное ковалентной модификацией / инактивацией.Здесь показан пример обнаружения киназной активности по субстратной последовательности (серый цвет) и фосфопротеин-связывающему домену (оранжевый). (G) Небольшая молекула на липиде мембраны.

Подход, основанный на расщеплении

Первый зарегистрированный на основе GFP зонд, детектирующий активность фактора Ха, использовал подход, основанный на расщеплении (рисунок) (Mitra et al., 1996). В этом типе зонда последовательность расщепления протеазой фланкирована донорными и акцепторными флуорофорами. В базовых условиях FRET возникает между флуорофорами.Однако расщепление целевой последовательности приводит к разделению донорных и акцепторных молекул, что приводит к снижению эффективности FRET. Тот же подход был использован для изучения других протеаз, включая каспазы (Xu et al., 1998; Onuki et al., 2002; Li et al., 2006; Joseph et al., 2011). При использовании этого типа зонда следует отметить, что расщепление протеазой необратимо. Следовательно, он не подходит для обнаружения протеазы с высокой базальной активностью. Кроме того, измерение не может быть повторено несколько раз, поскольку нерасщепленная фракция уменьшается, а расщепленная фракция накапливается с течением времени.

Межмолекулярный подход FRET

Взаимодействие между белками можно отслеживать с помощью межмолекулярного FRET, где одна сторона белкового комплекса помечена донором, а другая — акцептором (рисунок). Взаимодействие может быть гетеромером двух разных белков или гомомером одного и того же белка. Применение этого подхода включает небольшую активность G-белка (Yasuda et al., 2006), 3-фосфоинозитид-зависимую протеинкиназу 1 (PDK) -Akt (Calleja et al., 2007), фосфатазу и гомолог тензина, удаленные из хромосомы 10. (PTEN) -миозин V (van Diepen et al., 2009) и взаимодействия протеин-тирозинфосфатаза 1B (PTP1B) -рецепторных тирозинкиназ (RTK) (Haj et al., 2002) (Таблица). Вариантом этого подхода является гомомультимерный FRET, где мономер в полимерном белковом комплексе помечен как донорными, так и акцепторными молекулами (рисунок), что позволяет контролировать статус полимеризации белка. Это было использовано для обнаружения полимеризации / деполимеризации актина (Okamoto et al., 2004).

Количественный аспект FRET трудно контролировать в межмолекулярном FRET (по сравнению с внутримолекулярным FRET), потому что уровень экспрессии донорных и акцепторных молекул часто варьируется между клетками.Напротив, во внутримолекулярном зонде FRET донор и акцептор находятся в одной и той же молекуле, и, таким образом, отношение донора к акцептору всегда постоянно. Кроме того, эндогенные белки могут участвовать в образовании белковых комплексов, что может снизить межмолекулярную эффективность FRET. Следовательно, с межмолекулярной FRET эффективность должна быть измерена как среднее количество клеток или сравниваться до и после лечения (например, индукции синаптической пластичности) в одной и той же клетке. На практике донор, который не взаимодействует с акцептором, увеличивает фон измерения, тогда как избыток молекул акцептора обычно не вызывает проблем (Okamoto and Hayashi, 2006).Поэтому по возможности следует использовать избыточные молекулы акцептора.

Внутримолекулярный подход FRET

Этот подход обнаруживает конформационные изменения зонда через изменение расстояния и угла между донорными и акцепторными белками, расположенными на одной и той же молекуле. Поскольку оба флуорофора находятся на одной и той же молекуле, могут быть устранены такие осложнения, как дифференциальное перераспределение донорных и акцепторных белков и гетерогенность уровня экспрессии донора и акцептора среди клеток.Используя этот подход, было создано множество различных зондов, позволяющих обнаруживать ковалентные модификации белков, мембранное напряжение, небольшие биологические молекулы и передачу сигнала (таблица). Можно разработать зонд для обнаружения конформационных изменений, присущих интересующему белку, или разработать гибридный белок, который изменяет свою конформацию при наступлении определенного биологического события. Преимущество внутримолекулярного FRET заключается в относительной простоте конструирования зонда, который показывает FRET.Но иногда бывает трудно найти правильное положение флуорофора, чтобы внешние раздражители изменяли эффективность FRET.

Изменение внутренней конформации белка. Если интересующий белок изменяет свою конформацию путем активации / инактивации, можно разработать зонд для обнаружения конформационного изменения в качестве способа мониторинга уровня активности (рисунок). Этого можно достичь, фланкируя белок донором и акцептором или вставляя один или оба флуорофора между доменами.Этот подход успешно применялся для Ca ²⁺ / CaM-зависимой протеинкиназы II (CaMKII) (Takao et al., 2005; Kwok et al., 2008; Fujii et al., 2013), кальциневрина (Fujii et al. ., 2013), c-raf (Terai, Matsuda, 2005), p21 протеин-активированная киназа 1 (PAK1) (Parrini et al., 2009), B-raf (Terai, Matsuda, 2006), регулятор конденсации хромосом 1 (RCC1) (Hao and Macara, 2008), рецептора витамина A (Shimozono et al., 2013) и для мониторинга изменений мембранного потенциала (Tsutsui et al., 2008; Akemann et al., 2012). Рентгеновская кристаллическая структура является полезным ориентиром для определения мест на белке, где может быть размещена пара донора и акцептора.

Изменение конформации, вызванное специфическим взаимодействием белков. Активация или инактивация белка может запускать взаимодействие с конкретным целевым белком. Используя такое взаимодействие, можно разработать зонд FRET для обнаружения активации белка (рисунок). Упомянутый выше зонд Cameleon попадает в эту категорию.Другой пример — серия зондов Raichu, которые были разработаны для наблюдения за активностью малых G-белков (Mochizuki et al., 2001). Базовая структура зондов Raichu состоит из четырех модулей; донор, акцептор, G-белок и G-белок-связывающий домен от его партнера по связыванию (рисунок). Неактивная GDP-связанная форма не взаимодействует друг с другом G-белком-связывающим доменом. При связывании с GTP G-белок и G-белок-связывающий домен взаимодействуют друг с другом, сближая два флуорофора, тем самым приводя к FRET.Эта стратегия дизайна зонда была применена к Ras, белку семейства Rho и другим небольшим G-белкам (Hao and Macara, 2008; Kiyokawa et al., 2011).

Изменение конформации, вызванное ковалентной модификацией белка. Зонд этого типа состоит из донора и акцептора, которые фланкируют субстратный домен, который может быть ковалентно модифицирован интересующим белком, и белковый домен, который специфически распознает ковалентно модифицированный белок (рисунок). Когда белок ковалентно модифицируется, он связывается с соседним доменом узнавания, что приводит к конформационному изменению всей молекулы, что приводит к изменению FRET.За счет использования специфических киназных субстратов и доменов узнавания фосфор-белок, эта стратегия была применена для разработки сенсоров FRET для киназ и фосфатаз, включая PKA (Zhang et al., 2001), C (Violin et al., 2003), и D (Kunkel et al., 2007), Akt (Sasaki et al., 2003) и Src (Ting et al., 2001). Следует отметить, что этот тип зонда фактически обнаруживает временную интеграцию как киназной, так и фосфатазной активности. Кроме того, помимо целевого белка могут присутствовать киназы или фосфатазы, которые также фосфорилируют или дефосфорилируют зонд.

Небольшие молекулы на мембранах. Используя аналогичную стратегию, можно также измерить небольшие молекулы на мембранах (рисунок). В этом случае один из флуорофоров прикреплен к мембране через жесткие α-спиральные линкеры, тогда как другой флуорофор сохраняет свою гибкость через шарнир гли-гли. Между ними вставлен специфический липид-связывающий домен. Когда небольшой связывающий домен молекулы взаимодействует со своей интересующей мишенью, через шарнир происходит конформационное изменение, что приводит к увеличению эффективности FRET.Эта стратегия в основном использовалась для разработки зондов для вторичных посредников липидов, таких как фосфатидилинозитол 3,4-бисфосфат (PI (3,4) P ₂ ), фосфатидилинозитол 4,5-бисфосфат (PI (4,5) P ₂ ), фосфатидилинозитол 3,4,5-трифосфат (PIP ₃ ), фосфатидилинозитол 4-монофосфат (PI (4) P) и диацилглицерин (DAG) (Sato et al., 2003, 2006a; Nishioka et al., 2008; Уэда, Хаяси, 2013).

Обнаружение FRET

Несколько методов визуализации для обнаружения FRET используются в типичных условиях биологических лабораторий (Miyawaki, 2003; Yasuda, 2006, 2012).

Ратиометрическое обнаружение FRET

При ратиометрическом обнаружении FRET изображения акцептора и донора собираются отдельно, а затем вычисляется соотношение интенсивности флуоресценции между двумя изображениями. Когда возникает FRET, соотношение акцептор / донор увеличивается. Поскольку для этого измерения может использоваться любая флуоресцентная микроскопия (например, широкопольная, конфокальная, двухфотонная), часто используется ратиометрическое измерение FRET, хотя это не лучший вариант по нескольким причинам. При выполнении визуализации этого типа необходимо проявлять максимальную осторожность, чтобы минимизировать спектральное просвечивание, правильно вычесть фон и учесть перемещение флуорофора.Эти факторы делают визуализацию небольших структур особенно сложной задачей. Например, CFP, донорный флуорофор, который часто используется в паре с YFP в качестве акцептора, может просачиваться в канал YFP, тем самым уменьшая отношение сигнал / шум. Следовательно, чтобы минимизировать проступание, следует использовать подходящий полосовой фильтр, даже если общая яркость сигнала ухудшается. Кроме того, вычитание фона должно выполняться с большой осторожностью, поскольку незначительное изменение фона может существенно повлиять на соотношение сигналов.Также следует внимательно рассмотреть вопрос о перемещении зонда. Это может быть особенно проблематичным при измерении межмолекулярного FRET между двумя разными молекулами, которые могут по-разному перемещаться во время пластичности нейронов. Например, если донор движется, а акцептор — нет, это вызовет очевидное изменение коэффициента флуоресценции без фактического изменения взаимодействия белков. Эту ситуацию можно обойти, используя зонд с внутримолекулярным FRET, где и донор, и акцептор находятся на одной и той же молекуле, или межмолекулярный FRET между гомомерами, где оба, как ожидается, будут двигаться параллельно (Ni and Zhang, 2010).Также возможно математически скорректировать FRET, отдельно измерив количество местного акцептора. Но в таких случаях лучше использовать флуоресцентную микроскопию для визуализации в течение всей жизни, которая полагается только на флуоресценцию донора (см. Ниже).

Обесцвечивание акцептора

При фотообесцвечивании акцептора соответствующей длиной волны флуоресценция донора уменьшается и увеличивается. Этот маневр, называемый отбеливанием акцептора, дает количественное определение FRET, поскольку он зависит только от интенсивности флуоресценции донора.Длина волны возбуждающего света, интенсивность и продолжительность должны быть тщательно выбраны, чтобы фотообесцвечивать только акцепторный флуорофор. Фотообесцвечивание донорского флуорофора приведет к недооценке FRET. Это можно сделать, просто осветив донорский белок без акцептора и убедившись, что флуоресценция донора не обесцвечивается. Следует отметить, что фотообесцвечивание акцептора необратимо, и поэтому фотообесцвечивание акцептора — это конечный эксперимент, в котором требуется только один конкретный и точный статический показатель эффективности FRET (Miyawaki, 2003).Очевидно, по этой причине отбеливание акцепторов несовместимо с покадровой съемкой.

Визуализация времени жизни флуоресценции

Третий подход к количественной оценке FRET основан на параметре флуоресценции, называемом временем жизни флуоресценции (Yasuda, 2006). Когда флуоресцентная молекула возбуждена, она излучает флуоресценцию, затухающую с момента активации, обычно экспоненциально. Когда возникает FRET, время жизни флуоресценции донора сокращается. Поскольку время жизни флуоресценции не изменяется в широком диапазоне концентраций и не зависит от флуоресценции акцептора, оно менее подвержено артефактам, вызванным изменением локальной концентрации донора и акцептора, что особенно важно в гетероолигомере FRET.Напротив, ратиометрическое измерение может показать псевдоположительный сигнал, вызванный просачиванием между каналами флуоресценции, что может быть проблемой при измерении FRET из структуры, в которой состав белка может измениться. Таким образом, микроскопия с визуализацией времени жизни флуоресценции (FLIM) является идеальным выбором для обнаружения FRET.

Существует два основных метода измерения FLIM: измерения во временной и частотной областях (Yasuda, 2006). Во временной области измеряется затухание флуоресценции после короткого (<пикосекунд) импульса возбуждения, в то время как в частотной области измеряется время жизни путем различной модуляции интенсивности возбуждающего света и усиления детектора (гетеродинирование) на высокой частоте (Yasuda, 2006).Обе системы визуализации являются дорогостоящими, поскольку для FLIM требуется специальный источник света и детектор с временным разрешением. Однако, если у кого-то уже есть двухфотонный микроскоп, добавить компоненты в существующую систему несложно. Современные системы позволяют обнаруживать сигналы FRET с временным разрешением второго порядка от одиночных дендритных шипов (Murakoshi et al., 2011), что все еще медленнее, чем логометрическая визуализация, которая может переходить к скорости видео.

Для измерения во временной области в настоящее время широко используется коррелированный по времени счет одиночных фотонов.Этот метод измеряет время, прошедшее между импульсом возбуждения и испускаемым одиночным фотоном, которое объединяется в гистограмму. Затем данные будут подогнаны под экспоненциальную кривую (Ясуда, 2006). Когда ожидаются два состояния, например, в случае сосуществования как связанной, так и несвязанной пары FRET, можно выполнить двойную экспоненциальную аппроксимацию, чтобы получить соотношение двух компонентов (Yasuda, 2006). Однако следует тщательно рассмотреть вопрос о том, подходит ли подгонка двойной экспоненты к данной паре FRET, исходя из структуры белка.Например, если донор образует гомодимер, этого достаточно, чтобы усложнить ситуацию. Когда существует эндогенный аналог, часто в случае клетки, димер может находиться либо между двумя экзогенными донорными молекулами, либо между одним донором и одним эндогенным аналогом, в дополнение к димеру, состоящему из двух эндогенных молекул. В результате акцептор взаимодействует либо с двумя, либо с одной, либо с нулевыми флуоресцентными молекулами. Математически можно выполнить тройную (или более) экспоненциальную аппроксимацию. Однако такое измерение требует (1) яркого образца, (2) возможности оборудования, которое быстро улавливает большое количество фотонов на большом количестве пикселей, и (3) простоты сложного анализа данных.Аутофлуоресценция клеток также усложняет анализ (Colyer et al., 2012). Чтобы обойти это, можно вычислить среднее время жизни фотонов, которое теоретически дает время жизни в единственной экспоненте. Это не даст абсолютной доли компонента, показывающего FRET, но, сравнивая средний срок службы с течением времени, даст достаточную информацию даже по кривой затухания с шумом, не подходящей для подгонки (Lee et al., 2009; Murakoshi et al., 2011).

Другой проблемой измерения во временной области является «мертвая зона» выборки.Например, в системе, созданной на основе двухфотонного микроскопа на основе титан-сапфирового лазера, частота повторения лазера составляет 80 МГц или каждые 12,5 нс. Между каждым циклом всегда существует мертвая зона выборки, в которой система сбора данных должна перезагружаться для следующего цикла. Учитывая, что время жизни многих флуоресцентных белков составляет 2–5 нс, мертвая зона может ограничивать эффективный диапазон подгонки и недооценивать, особенно компонент с более длительным сроком службы. Недавние исследования, которые представили широкопольный детектор счета фотонов и анализ векторов, могут предоставить новый подход к проведению экспериментов FLIM, устраняющий эти недостатки (Kwok et al., 2008; Colyer et al., 2012).

Выбор флуоресцентных белков

Для эффективного измерения изменения расстояния и угла между двумя флуорофорами в конструкции FRET критически важно начать с подходящей пары флуоресцентных молекул с эффективным FRET. Эффективность FRET ( E ) зависит от нескольких параметров, характерных для каждой пары флуоресцентных белков. Расстояние Ферстера ( R ₀ ), расстояние, на котором эффективность передачи энергии составляет 50%, зависит от перекрытия излучения донора и возбуждения акцептора ( Дж ), квантового выхода донора ( Q ₀ ) и акцепторного молярного коэффициента экстинкции (ε _A ).По мере увеличения значений для J , Q ₀ и ε _A увеличивается и значение R ₀ , что, в свою очередь, дает большее значение E . Пока что CFP (или улучшенная версия, такая как Cerulean или K26R / N164H мутант ECFP) и YFP (например, Venus) является наиболее часто используемым для логометрических измерений FRET. Пара CFP-YFP дает R ₀ 4,8–5,2 нм, в зависимости от используемых вариантов (Rizzo et al., 2006; Kwok et al., 2008; Лам и др., 2012). Недавно сообщалось, что Clover и mRuby2 имеют радиус Ферстера 6,3 нм и в настоящее время считаются лучшей парой FRET, доступной на сегодняшний день (Lam et al., 2012).

Для FLIM улучшенный GFP (EGFP) часто используется в качестве донора и в сочетании с мономерным красным флуоресцентным белком (mRFP) или mCherry в качестве акцептора. Яркость акцептора не является проблемой для FLIM, поскольку она зависит исключительно от измерения флуоресценции донора. Следовательно, нефлуоресцентные белки-гасители, такие как REACh (Ganesan et al., 2006), darkVenus (Kwok et al., 2008) и super REACh (Lee et al., 2009) также могут быть использованы в качестве акцепторов для донорского EGFP. В идеале донор должен показывать единственное время жизни с FLIM, как в случае с EGFP. Первоначальный улучшенный CFP (ECFP) не является оптимальным, поскольку он показывает два компонента срока службы в дополнение к его относительно слабой флуоресценции. Cerulean и mTurquoise2 ярче и имеют моноэкспоненциальное затухание, поэтому их можно использовать, когда необходим голубой диапазон (Rizzo et al., 2004; Goedhart et al., 2012).

EGFP имеет слабую тенденцию к димеризации (Zacharias et al., 2002), что может приводить к проблемам с агрегацией белка, в зависимости от белка, с которым он слит (Lantsman and Tombes, 2005). Следовательно, мономеризованные версии EGFP, такие как мутант A206K (нумерация аминокислот основана на GFP дикого типа), предпочтительны для экспериментов FRET, поскольку они уменьшают любой псевдоположительный сигнал FRET, вызванный неспецифической агрегацией. Однако в некоторых случаях, например, в сенсорах протеаз на основе расщепления, димеризация донорных и акцепторных молекул может быть полезной для увеличения разницы в эффективности FRET до и после расщепления.Фактически, исследование случайного мутагенеза для повышения эффективности FRET каспазного зонда привело к идентификации пары CyPet-YPet (Nguyen and Daugherty, 2005), которая, как впоследствии было показано, образует димер между донором и акцептором (Ohashi et al., 2007). Подробный обзор флуоресцентных белков см. В Shaner et al. (2005) и Newman et al. (2011).

Применение зондов FRET для изучения динамики нейронных цепей

Ряд зондов FRET был разработан и протестирован на различных типах клеток.Здесь мы перечисляем некоторые из недавних достижений исследований с использованием зондов FRET в нейронных цепях. См. Таблицу с расширенным списком различных датчиков FRET.

Ca

Внутриклеточный Ca ²⁺ играет важную роль в регулировании различных клеточных функций, таких как передача сигналов, регуляция генов, гибель клеток и выживание. В базовых условиях внутриклеточная концентрация Ca ²⁺ поддерживается на низком уровне с помощью различных механизмов экструзии и секвестрации Ca ²⁺ .После активации нейронов локальная внутриклеточная концентрация Ca ²⁺ увеличивается за счет притока из внеклеточной жидкости или оттока из внутриклеточного пула (Hayashi and Majewska, 2005). Различные источники Ca ²⁺ могут иметь различную кинетику, субклеточную локализацию и функции. Поэтому неудивительно, что зонд FRET, чувствительный к Ca ²⁺ , был одним из первых когда-либо созданных генетически кодируемых сенсоров FRET (Miyawaki et al., 1997). Популярным использованием этого типа зонда является обнаружение активности нейронных цепей посредством обнаружения потенциалов действия, когда приток Ca ²⁺ в клетки через зависимые от напряжения каналы Ca ²⁺ .Одновременно можно отслеживать активность сотен нейронов (Wallace et al., 2008).

Поскольку Miyawaki et al. охарактеризованный камелеон, первый зонд FRET, воспринимающий Ca ²⁺ , описаны различные зонды с различным сродством к Ca ²⁺ (Miyawaki, 2005). Cameleon был расширен до серии желтых верблюдов, которые имели более высокую чувствительность к Ca ²⁺ и лучшее соотношение сигнал / шум (Nagai et al., 2004; Horikawa et al., 2010). Griesbeck et al. использовали тропонин C и I для создания сенсорного белка Ca ²⁺ серии Tn (Heim and Griesbeck, 2004).Cameleon в основном применялся для рыбок данио (Mizuno et al., 2013) и C. elegans (Haspel et al., 2010). Недавно YC-Nano 140, новая версия камелеона, была экспрессирована в бочкообразной коре головного мозга мышей с использованием аденоассоциированного вирусного вектора и показала разные ответы между двумя группами нейронов, которые проецируются в разные области неокортекса (Chen et al., 2013).

Используя отдельный подход, не связанный с FRET в качестве основного способа обнаружения, Nakai et al. генерировал G-CaMP (Nakai et al., 2001). G-CaMP был разработан для экспрессии CaM и пептида M13, вставленного в стенку β-цилиндра GFP, что в конечном итоге искажает его общую структуру GFP и гасит его флуоресценцию. Увеличение концентрации Ca ²⁺ индуцирует взаимодействие CaM и пептида M13, что затем приводит к изменению конформации β-ствола. Это, в свою очередь, изменяет статус протонирования флуорофора и ослабляет флуоресценцию. Родственный датчик Ca ²⁺ , называемый перикамом, также использует аналогичную стратегию (Nagai et al., 2001). Недавно были разработаны B-GECO и R-GECO, синяя и красная версия G-CaMP, позволяющая одновременно обнаруживать кальций в более чем одном субклеточном компартменте или типе клеток (Zhao et al., 2011). С улучшением чувствительности зондов и методов обнаружения теперь возможно визуализировать приток Ca ²⁺ в отдельные дендритные шипы, вызванный унитарным возбуждающим постсинаптическим потенциалом (epsp) (Ohkura et al., 2012). В настоящее время G-CaMP становится первым выбором для визуализации Ca ²⁺ , особенно in vivo , потому что удобно обнаруживать ответы Ca ²⁺ с помощью одного канала.Однако недавний отчет, в котором сравнивалась чувствительность между G-CaMP3 и YC в клетках Пуркинье острого среза мозжечка мышей (Yamada et al., 2011), показал, что YC демонстрирует лучший ответ, чем G-CaMP3, что указывает на необходимость тщательного подбора оптимальных зондов. выбранный в данной интересующей области мозга.

Датчик активности CaMKII, Camui

CaMKII является членом семейства серин / треониновых протеинкиназ, которые высоко экспрессируются в головном мозге, особенно при постсинаптической плотности (PSD) возбуждающих синапсов (Kennedy et al., 1983; Chen et al., 2005). CaMKII принимает активное участие как в индукции, так и в поддержании функциональных и структурных LTP (Lisman et al., 2002; Matsuzaki et al., 2004). Активация CaMKII предшествует структурному увеличению стимулированных шипов, указывая тем самым, что CaMKII является молекулярным триггером последующих процессов, которые приводят к структурным изменениям. Кроме того, CaMKII играет структурную роль в синапсе благодаря своей способности связывать F-actin (Okamoto et al., 2007, 2009).

В базовых условиях CaMKII остается неактивным за счет внутрисубъединичного стерического блокирования сайта связывания субстрата (S-сайт) в киназном домене псевдосубстратной областью внутри аутоингибиторного домена (Lisman et al., 2002). Связывание Ca ²⁺ / CaM с регуляторным доменом (соседним с аутоингибиторным доменом) изменяет его конформацию и нарушает ингибирующее взаимодействие в S-сайте. Это нарушение освобождает киназный домен от аутоингибирования и позволяет ему быстро самофосфорилировать треонин 286 (T286) CaMKII, а также другие субстраты. Автофосфорилирование CaMKII по Т286 предотвращает связывание аутоингибиторного домена с Т-сайтом каталитического домена и блокирование киназной активности, тем самым позволяя киназе сохранять значительную активность даже в отсутствие Ca ²⁺ .Таким образом, этот холоэнзим остается активным в течение длительного периода времени, значительно превосходя пик Ca ²⁺ . На основании этих наблюдений CaMKII был предложен как молекула памяти, которая может использоваться для хранения долговременной информации после того, как синапс подвергается LTP (Lisman et al., 2002).

Однако прямая демонстрация стойкой активации CaMKII после индукции LTP отсутствовала из-за недостатка эффективных методов определения пространственной и временной активации CaMKII на уровне единственного шипа.Чтобы обойти это, был разработан зонд FRET, Camui, с использованием внутримолекулярного подхода FRET для обнаружения конформационных изменений, связанных с активацией CaMKII, путем слияния донорных и акцепторных флуорофоров на обоих концах CaMKII (Takao et al., 2005; Kwok et al. , 2008). Камуи показывает FRET в его базальном неактивном состоянии. Добавление АТФ, СаМ и Са ²⁺ приводит к быстрому и стойкому снижению FRET. Конформационные изменения из-за связывания Ca ²⁺ / CaM и аутофосфорилирования ответственны за изменение FRET.Это стойкое, независимое от Ca ²⁺ изменение FRET отсутствует, когда не используется АТФ или когда используется мертвый мутант киназы. Более того, фосфоблокирующий мутант (T286A) останавливает стойкое изменение FRET, тогда как фосфорно-имитирующий мутант (T286D) показывает снижение FRET без стимуляции Ca ²⁺ . Следовательно, Камуи обнаруживает коллективную активацию CaMKII путем связывания Ca ²⁺ / CaM и аутофосфорилирования в T286. Используя FLIM-версию Camui, green-Camuiα, Lee et al.обнаружили, что активность CaMKII является лишь временной (<2 мин) после индукции структурного LTP (sLTP), хотя активация CaMKII требуется для поддержания структурной синаптической пластичности. Это намного короче, чем предполагалось (Lee et al., 2009).

Мы исследовали пространственную и временную регуляцию CaMKII при быстрой пластичности глазного доминирования (OD) в слое II / III зрительной коры головного мозга хорька in vivo , парадигматической модели для изучения роли сенсорного опыта в формировании корковых нейронных цепей (Mower и другие., 2011). Воспользовавшись поверхностным расположением пирамидных нейронов слоя II / III для оптического обнаружения сигналов Камуи (рисунок), мы обнаружили, что кратковременная монокулярная депривация (MD, 4 часа) приводит к активации CaMKII в большинстве синапсов в лишенных доменах глаза ( Фигура ). Однако изменение активности CaMKII не наблюдалось в шипах, расположенных в бинокулярных и неотделенных доменах глаза после тех же визуальных манипуляций. Четыре часа MD также привели к устранению небольшой фракции шипов в лишенном глазном домене, чья базальная активность CaMKII была ниже, чем средняя активность CaMKII в том же кортикальном участке.Шипы, которые сохранились после MD, имели либо высокую базальную активность CaMKII, либо повышенную активность. Таким образом, возникающая картина роли активности CaMKII in vivo заключается в том, что (1) удаленные шипы имеют низкую активность CaMKII (хотя не все шипы с низкой активностью удаляются) и (2) высокая активность CaMKII может иметь защитную роль. для шипов, и эти сохранившиеся шипы потенциально могут служить субстратом для реорганизации интракортикальных пресинаптических партнеров.

In vivo визуализация активности CaMKII с использованием Camui.(A) Экспрессия Camui в зрительной коре головного мозга хорьков позволила визуализировать активность CaMKII в дендритах и ​​шипах нейрона в специфическом домене глазного доминирования (OD). Карты кровеносных сосудов и OD были получены с использованием оптического изображения внутреннего сигнала ( Верхняя панель : A, передняя; M, медиальная). Серая шкала указывает индекс окулярного доминирования (белый — преобладает ипсилатеральный глаз; черный — преобладает контралатеральный глаз). Карта кровеносных сосудов и двухфотонное микроскопическое изображение с малым увеличением были сопоставлены с перекрестными ссылками для идентификации двухфотонных изображений (, нижняя панель, ) на данной карте OD.Дендритный сегмент (красный прямоугольник) увеличивается (, справа, ) и отображается как изображения с разделением каналов (CFP и YFP), а также ратиометрическое изображение в режиме отображения с модуляцией интенсивности, указывая соотношение CFP / YFP. Теплый оттенок свидетельствует о высокой активности CaMKII. (B) Примеры изображений шипов со сниженной (слева) или повышенной (справа) активностью CaMKII после 4 часов монокулярной депривации. Цифры под изображениями указывают нормализованное отношение CFP / YFP, измерение сигнала FRET. Из Mower et al.(2011).

Во-первых, этот результат, по-видимому, расходится с исследованием Lee et al., Где они наблюдали временную активацию CaMKII за счет индукции LTP с расцеплением глутамата. Однако этот результат, скорее всего, отражает способность CaMKII отвечать на разные паттерны нейрональной активности (De Koninck and Schulman, 1998; Fujii et al., 2013). В исследовании Lee et al. (2009), CaMKII активируется посредством локальной активации рецептора глутамата типа N -метил-D-аспартата (NMDA-R).Однако в зрительной коре он, вероятно, обнаруживает интеграцию сложных локальных и глобальных паттернов активности, которые охватывают как геббовские, так и гомеостатические механизмы. Дальнейшие исследования необходимы для полного выяснения роли CaMKII в синаптической пластичности как in vitro , так и in vivo .

Малый G-белок

Малое семейство G-белков, включающее подсемейства Ras, Rho, Ran, Rab, Sar / Arf, представляет собой большую группу сигнальных молекул, которые контролируют различные клеточные функции (Saneyoshi and Hayashi, 2012).Активность малого G-белка контролируется внутренней активностью GTPase и типом гуанинового нуклеотида, с которым он связан. Форма, связанная с GTP, представляет собой активную форму, которая преобразуется в форму, связанную с GDP, посредством активности GTPase. Цикл между GDP-связанными неактивными и GTP-связанными активными формами регулируется тремя классами белков, факторами обмена гуаниновых нуклеотидов (GEF), белками, активирующими GTPase (GAP) и ингибиторами диссоциации гуаниновых нуклеотидов (GDI) (Saneyoshi and Hayashi, 2012).GEF обменивают GDP, связанный с небольшим G-белком, с GTP, что приводит к активации сигнальной активности малого G-белка. Связанные с GTP формы G-белка переходят в неактивные формы, когда GAP вызывает активацию активности GTPase, которая превращает связанный GTP в GDP. GDI удаляет связанные с GDP неактивные формы G-белков с клеточных мембран и, следовательно, поддерживает их в неактивных формах.

Два члена семейства Ras, сам Ras и Rap, участвуют в синаптической пластичности. Zhu et al.показали, что Ras передает передачу сигналов NMDA-R и CaMKII, которая управляет синаптической доставкой глутаматных рецепторов типа α-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолепропионовой кислоты (AMPA-Rs) во время LTP (Zhu et al., 2002) . Напротив, Rap опосредует NMDA-R-зависимое удаление синаптических AMPA-R, которое происходит во время LTD. Таким образом, Ras и Rap служат в качестве независимых регуляторов для потенцирования и подавления центральных синапсов. Рас также участвует в формировании позвоночника. Экспрессия конститутивно активного Ras в нейронах неокортекса приводит к увеличению плотности шипов (Gartner et al., 2005). Напротив, потеря SynGAP, Ras-GAP, который специфически экспрессируется в головном мозге, ведет к увеличению образования позвоночника и увеличению размера позвоночника (Vazquez et al., 2004).

Чтобы выяснить активность Ras во время LTP в шипах нейронов гиппокампа, Yasuda et al. разработали межмолекулярный зонд на основе FLIM для обнаружения активности Ras, в котором момерный EGFP был помечен на N-конце Ras, а два момерных RFP были прикреплены к N- и C-концам Ras-связывающего домена (RBD) Raf. (Ясуда и др., 2006). Когда Ras на плазматической мембране активируется, RBD рекрутируется на мембрану и связывается с Ras, что приводит к увеличению FRET. Используя этот зонд, они исследовали активность G-белков в отдельных дендритных шипах в пирамидных нейронах CA1 во время sLTP. После индукции sLTP активировался Ras, который затем поддерживался в течение 30 мин (Yasuda et al., 2006). Интересно, что передача сигналов Ras не ограничивается шипами, но распространяется на более чем 10 мкм в дендритные стержни и в конечном итоге достигает соседних шипов, которые впоследствии могут подвергаться sLTP только при слабой стимуляции (стимуляция, которая обычно вызывает только временную потенциацию) (Harvey et al., 2008b). Эти данные указывают на то, что распространение Ras-зависимой передачи сигналов необходимо для локальной регуляции порога индукции LTP.

G-белки семейства Rho, в том числе член семейства гомологов ras (Rho), связанный с ras субстрат ботулинического токсина C3 (Rac) и гомолог белка 42 контроля клеточного деления (Cdc42), представляют собой небольшие GTP-связывающие белки, которые контролируют актиновый цитоскелет ( Komatsu et al., 2011; Saneyoshi, Hayashi, 2012). Поскольку актин является основным цитоскелетным белком в дендритных шипах, роль G-белков семейства Rho в поддержании и перестройке морфологии шипов была исследована (Saneyoshi and Hayashi, 2012).Экспрессия конститутивно активной формы Rac1 в пирамидных нейронах гиппокампа приводит к увеличению количества (Tashiro et al., 2000), длины и ширины шипов (Zhang and Macara, 2006), в то время как доминирующий негативный эффект оказывает противоположное действие. (Nakayama et al., 2000; Zhang, Macara, 2006; Impey et al., 2010). Напротив, конститутивно активная форма RhoA снижает плотность шипов (Tashiro et al., 2000; Impey et al., 2010) и вызывает упрощение структуры дендритных ветвей (Nakayama et al., 2000). Ингибирование активности RhoA приводит к увеличению количества шипов в некоторых нейронах (Tashiro et al., 2000; Impey et al., 2010). Cdc42 также участвует в морфогенезе позвоночника (Tashiro et al., 2000; Irie and Yamaguchi, 2002).

Муракоши также применил ту же стратегию конструирования зондов Ras для конструирования зондов для белков семейства Rho (Murakoshi et al., 2011). Были исследованы временные и пространственные масштабы распространения активности по дендритному стволу (Murakoshi et al., 2011).Активность как RhoA, так и Cdc42 поддерживалась до 30 мин, что согласуется с наблюдением, что равновесие нитчатого (F-) актина / глобулярного (G-) актина смещается в сторону F-актина после индукции LTP (Okamoto et al., 2004, см. Ниже). RhoA распространяется с постоянной длиной 4,5 мкм вдоль дендрита. С другой стороны, активность Cdc42 была ограничена только в стимулированном позвоночнике, константа длины которого составляет 1,9 мкм.

Фосфатидилинозитол 3,4,5-трифосфат (PIP

PIP ₃ представляет собой фосфоинозитид, который играет важную роль в различных клеточных функциях.PIP ₃ производится из фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP ₂ ) фосфоинозитид-3-киназой (PI3K) в ответ на гормон и нейротрансмиттер, в то время как PTEN преобразует PIP ₃ обратно в PIP ₂ . В пирамидных нейронах гиппокампа PIP ₃ является критическим для поддержания кластеризации AMPA-R во время LTP (Arendt et al., 2010). PIP ₃ также регулирует полярность нейронов, ветвление дендритов и образование аксональных филоподий, вызванное фактором роста нервов (Jaworski et al., 2005; Кетчек и Галло, 2010). Для реализации этих функций локальное накопление PIP ₃ приводит к привлечению эффекторных белков, таких как Akt (Thomas et al., 2001), верпролин-гомологичный белок семейства WASP (WAVE) (Oikawa et al., 2004) и GEF малых G белков в специфические субклеточные компартменты (Han et al., 1998; Shinohara et al., 2002; Innocenti et al., 2003).

Чтобы исследовать функцию и регуляцию PIP ₃ в шипах, мы разработали зонд PIP ₃ FRET, FLIMPA3, на основе FLIM, путем конкатенации донора, специфического домена связывания PIP ₃ , гибкого диглицина. шарнир и акцептор, прикрепленный к мембранам через жесткие α-спиральные линкеры (Sato et al., 2003; Муракоши и др., 2008; Ueda and Hayashi, 2013) (рисунок). Когда FLIMPA3 экспрессировался в пирамидных нейронах CA1 гиппокампа, мы обнаружили, что PIP ₃ обнаруживает большее накопление в шипах, чем в дендритных стержнях в базальных условиях (Ueda and Hayashi, 2013). Обработка ингибитором PI3K снижает накопление PIP ₃ в шипах, указывая на то, что накопление PIP ₃ в значительной степени обусловлено базальной активностью PI3K в шипах. Этот результат согласуется с предыдущим отчетом, в котором PI3K повсеместно локализуется в нейрональных клетках, но становится активным только после связывания AMPA-R (Man et al., 2003). Во время sLTP был снижен PIP ₃ в шипах. Применение ингибитора PTEN существенно не изменило снижение PIP ₃ . Кроме того, снижение PIP ₃ после sLTP сильно коррелировало с обогащением PIP ₃ до индукции sLTP. Следовательно, снижение PIP ₃ во время sLTP, вероятно, связано с добавлением мембраны из дендритного стержня. Интересно, что в то время как PIP ₃ глобально уменьшается в шипах во время sLTP, мы наблюдали специфическое накопление PIP ₃ в шипиках, филоподий-подобных выступах, обнаруживаемых на шипах.Когда PIP ₃ в шипиках блокировался ингибитором PI3K, который снижает уровни PIP ₃ , количество шипиков после sLTP уменьшалось, что указывает на то, что PIP ₃ в шипиках регулирует образование шипиков.

Электронно-микроскопические исследования показали, что шипики м. Транссинаптически эндоцитозироваться пресинаптическими окончаниями как отдельные пузырьки с постсинаптической стороны (Spacek and Harris, 2004). Следовательно, транс-эндоцитоз шипиков может служить механизмом ретроградной передачи сигналов или может способствовать ремоделированию постсинаптической мембраны путем удаления избытка мембраны (Spacek and Harris, 2004).Накопленный PIP ₃ в шипиках, которые передаются на пресинаптическую сторону, может действовать как ретроградный сигнал или способствовать образованию новых синапсов с функциональными пресинаптическими бутонами.

Киназа, регулируемая внеклеточными сигналами (ERK)

ERK — это серин / треониновая протеинкиназа, которая принадлежит к семейству митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK), которая играет важную роль в различных клеточных функциях, таких как дифференцировка и пролиферация клеток. , и выживание (Чанг и Карин, 2001).В нейронных цепях ERK участвует в широком спектре функций, включая регуляцию синтеза дендритных белков (Impey et al., 1998a, b; Roberson et al., 1999; Davis et al., 2000; Patterson et al., 2001). ; Waltereit et al., 2001), морфологические изменения в дендритных шипах (Wu et al., 2001; Goldin and Segal, 2003) и гиппокампальный LTP и формирование памяти in vivo (Giovannini et al., 2001). Аномальная передача сигналов ERK связана с умственной отсталостью (Costa et al., 2002).

Для получения информации о пространственно-временной динамике активности ERK в нейрональных клетках было разработано несколько зондов на основе FRET.Miu2 обнаруживает конформационные изменения активации ERK путем фланкирования ERK с помощью CFP и YFP (Fujioka et al., 2006). Erkus основан на обнаружении фосфорилирования субстратного белка (Sato et al., 2007) (рисунок). Последовательность субстрата ERK была получена из EGFR и слита с фосфосвязывающим доменом из FHA2 с помощью гибкого пептидного линкера. Домен D, последовательность, которая избирательно связывается с ERK, был присоединен для повышения специфичности и эффективности фосфорилирования. Этот гибридный белок фланкирован CFP и YFP.Когда фосфо-субстратный пептид фосфорилируется активной ERK, фосфопротеин-связывающий домен взаимодействует с фосфо-субстратным пептидом, что приводит к изменению общей конформации, что может быть обнаружено по изменению эффективности FRET. EKAR использует аналогичный подход, но с другим субстратом и доменом связывания фосфопротеинов (Harvey et al., 2008a).

Используя EKAR в пирамидных нейронах гиппокампа, Harvey et al. наблюдали активность ERK, индуцированную обратным распространением потенциалов действия (Harvey et al., 2008а). Стимулированные всплески потенциалов действия вызывали глобальный приток Ca ²⁺ через потенциал-управляемые каналы Ca ²⁺ , что приводило к активации Ras, расположенной выше по течению молекулы ERK (Yasuda et al., 2006; Harvey et al., 2008b). После стимуляции активность ERK достигла пика примерно к 5 мин, затем постепенно снизилась и, наконец, вернулась к базальному уровню к 30 мин. Время активации ERK было дольше, чем у Ras, что согласуется с идеей, что ERK является нижестоящим эффектором Ras.Они также исследовали активность ERK в соматической цитоплазме и ядре нейрональных клеток. После стимуляции тета-всплеска активность ERK в обоих регионах повышается параллельным образом, указывая тем самым, что глобальный приток Ca ²⁺ через VGCCs может быстро диффундировать между этими двумя компартментами (Harvey et al., 2008a).

Датчик хлорида

Ион Cl ^— регулирует свойства нейронов, такие как внутриклеточный pH, объем клеток и секрецию жидкости (Duran et al., 2010).Что еще более важно, Cl ^— является основным переносчиком электрического тока в тормозной синаптической передаче, опосредованной рецепторами ГАМК и глицина. Базальный уровень внутриклеточных хлорид-ионов (Cl ^—) поддерживается рядом механизмов, включая систему переносчиков хлоридов, состоящую из Na ⁺ -Cl ^—, Na ⁺ -K ⁺ -2Cl ^— и K ⁺ -Cl ^—, а также активация тонических ГАМК-рецепторов, кальций-активируемых каналов Cl ^—, цАМФ-активированных каналов Cl ^—, анионных каналов, регулируемых объемом клетки, и локализованных переносчиков внутри субклеточных органелл (Duran et al., 2010). Поскольку все эти факторы в сумме определяют внутриклеточную концентрацию Cl ^— , представляет большой интерес визуализация динамики внутриклеточного Cl ^— .

Хлоридный сенсор Clomeleon состоит из CFP, гибкого пептидного линкера и чувствительного к Cl ^— YFP (с мутациями S65G, S72A, K79R, T203Y, h331L) (Kuner and Augustine, 2000). Интенсивность YFP снижается в присутствии Cl ^— , тем самым изменяя эффективность FRET в зависимости от концентрации Cl ^— .Используя этот зонд, в диссоциированных культурах нейронов и глиальных клеток гиппокампа исследовали динамику развития концентрации Cl ^— (Kuner and Augustine, 2000). В то время как концентрация Cl ^— в глиальных клетках была низкой на протяжении эмбриональных и постнатальных стадий, концентрация в нейронах была выше на эмбриональных стадиях, а затем снижалась во время постнатального развития, что согласуется с наблюдением, что активация рецепторов ГАМК в незрелых нейронах приводит к нейрональному развитию. возбуждение, а не торможение (Kuner, Augustine, 2000).С помощью этого зонда также можно было наблюдать приток Cl ^— через рецепторы ГАМК в пирамидных нейронах СА1 гиппокампа после стимуляции интернейронов (Berglund et al., 2006). Однако на данный момент чувствительность датчика Cl ^— не так хороша, чтобы визуализировать приток Cl ^—, вызванный единым тормозным постсинаптическим током (ipsc). Это потребует доработки зонда.

Актин

Актин является основным белком цитоскелета в дендритных шипах (Matus, 2005; Okamoto et al., 2009). Он существует в равновесии между двумя формами, глобулярным (G-actin) и нитчатым актином (F-actin) (Okamoto et al., 2009; Saneyoshi and Hayashi, 2012). Актин быстро обновляется в дендритном отделе позвоночника. Эксперимент с использованием восстановления флуоресценции после фотообесцвечивания (FRAP) GFP-слитого актина показал, что более 85% актина в дендритных шипах динамически обновляется со средней постоянной времени 44 с (Star et al., 2002). Этот динамический оборот лежит в основе молекулярной основы подвижности и морфологических изменений шипов (Okamoto et al., 2004, 2009; Матус, 2005; Honkura et al., 2008).

Как и в ненейронных клетках, F-актин в дендритных шипах подвергается уникальной направленной беговой дорожке, как показали эксперименты с использованием фотоактивируемого (PA) -GFP-актина или фотоконвертируемого флуоресцентного белка (Honkura et al., 2008; Frost et al. ., 2010). G-актин добавляется к зазубренному концу F-актина на периферии дендритных шипов и в основании дендритного шипа, F-актин непрерывно разбирается на G-актин на заостренном конце актина.Взятые вместе, существует общее направленное движение F-actin от периферии к основанию позвоночника (Honkura et al., 2008; Frost et al., 2010). Другой способ взглянуть на это — разделить популяцию актина на разные пулы. Первый пул F-actin, обнаруженный на периферии, имеет относительно высокий оборот около 40 секунд (Honkura et al., 2008). Второй пул — это популяция, которая находится у основания шипов, с временем обновления 17 минут (Honkura et al., 2008). Эти два бассейна относительно статичны и помогают сохранить общую форму и размер позвоночника.Кроме того, существует третий пул, который появляется после индукции LTP (Honkura et al., 2008). Время оборота этого пула составляет 2–15 минут, и он распространяется по всему позвоночнику. Этот пул необходим для поддержания увеличения дендритных шипов при индукции sLTP. Если этот пул выдавливается в дендритные стержни, то sLTP не поддерживается.

Актин существует в равновесии между F-актином / G-актином, но не было известно, как изменяется равновесие F-актин / G-актин во время синаптической пластичности. Это связано с тем, что дендритный шип слишком мал и не показывает дискретную структуру F-актина, которую можно наблюдать с помощью световой микроскопии.Чтобы обойти это, использовали межмолекулярный FRET подход для мониторинга равновесия F-actin / G-actin (Okamoto et al., 2004). Расстояние между мономерами актина в F-актине составляет 55 Å, что находится в соответствующем диапазоне для обнаружения с помощью FRET. Актин был помечен CFP и YFP в качестве донора и акцептора соответственно. Используя этот подход, Okamoto et al. наблюдали динамику актина в пирамидных нейрональных клетках гиппокампа CA1 во время двунаправленной пластичности (Okamoto et al., 2004). При тетанической стимуляции равновесие F-актин / G-актин сдвигалось в сторону F-актина, что сопровождалось увеличением позвоночника (рисунок).Напротив, длительная низкочастотная стимуляция, обычно вызывающая LTD, приводит к сокращению позвоночника и деполимеризации актина. Эти данные свидетельствуют о том, что равновесие F-actin / G-actin регулирует двунаправленную структурную пластичность.

Дендритный шип, экспрессирующий зонд FRET актина . Одиночный дендритный шип, подвергшийся локальной тетанической стимуляции, сопровождается увеличением шипа и полимеризацией актина. Из Okamoto et al. (2004).

Датчики напряжения

Электрофизиологические записи считаются «золотым стандартом» для измерения мембранных потенциалов нейронов.Однако у этого метода есть несколько недостатков, таких как инвазивный характер метода и ограничения в количестве нейронов, которые можно измерять одновременно. Чтобы обойти эти проблемы, с некоторым успехом были использованы чувствительные к напряжению флуоресцентные красители с малой молекулярной массой. Основным недостатком использования низкомолекулярных чувствительных к напряжению флуоресцентных красителей является отсутствие специфичности клеточного типа, поскольку красители обычно ложно загружаются и поглощаются клетками неспецифическим образом.Также важно отметить, что со временем количество красителей может уменьшиться или стать причиной токсичности. Поэтому эти красители больше всего подходят для использования в острых экспериментах.

Генетически закодированные сенсоры мембранного потенциала VSFP2 (Sakai et al., 2001) и Mermaid (Tsutsui et al., 2008) позволяют визуализировать мембранное напряжение большого количества отдельных нейронов с высоким временным разрешением. Оба зонда основаны на встроенной в мембрану фосфатазе, которая воспринимает напряжение, Ci-VSP, белке, полученном из оболочки оболочки, Ciona Кишечник .Ci-VSP состоит из домена сенсора напряжения (VSD) и домена фосфатазы (Murata et al., 2005). Фосфатазный домен на С-конце был заменен парой флуорофоров, соединенных тандемно. Деполяризация мембраны вызывает конформационные изменения в общей структуре, что приводит к уменьшению расстояния между флуорофорами и, в конечном итоге, к изменению эффективности FRET. В культивируемых корковых нейронах, экспрессирующих Mermaid, можно было наблюдать стимулированный всплеск (30 импульсов при 100 Гц) спайков (Tsutsui et al., 2008). Недавно были разработаны VSFP-бабочка и ArcLight, в которых акцептор перемещался с С-конца на N-конец (Akemann et al., 2012, 2013; Jin et al., 2012). VSFP-бабочка использовалась для визуализации изменений мембранного напряжения, вызываемых стимуляцией одного уса в пирамидных нейронах слоя 2/3 в коре головного мозга мышей (Akemann et al., 2012). Авторам также удалось визуализировать спонтанные медленные колебания мозга, перемещающиеся по соматосенсорной коре (Akemann et al., 2012).

Как измерить давление в шинах лады грант. Какое должно быть давление в шинах у автомобиля Лада Калина Какое давление в шинах у Лада Гранта

НАШИ ПАРТНЕРЫ:

Сайт о немецких автомобилях

Любой современный автомобиль или грузовик можно обслужить и отремонтировать самостоятельно, в обычном гараже. Все, что для этого потребуется, — это набор инструментов и заводская инструкция по ремонту с подробным (пошаговым) описанием операций.В такой инструкции должны быть указаны типы используемых рабочих жидкостей, масел и смазок, а главное, моменты затяжки всех резьбовых соединений деталей узлов и агрегатов автомобиля. Итальянские автомобили — Фиат (Fiat) Альфа Ромео (Альфа Ромео) Лансия (Lancia) Феррари (Феррари) Мазерати (Мазерати) имеют свои конструктивные особенности. Также в специальной группе можно выделить все французские автомобили — Peugout (Пежо), Renault (Renault) и Citroen (Ситроен). Немецкие машины сложны. Особенно это касается Mercedes Benz, BMW, Audi и Porsche (Porsche), чуть меньше — Volkswagen и Opel (Opel).Следующая большая группа, выделенная по конструктивным особенностям, — это американские производители — Chrysler, Jeep, Plymouth, Dodge, Eagle, Chevrolet, GMC, Cadillac, Pontiac, Oldsmobile, Ford, Mercury, Lincoln … Из корейских фирм следует выделить отметили Hyundai / Kia, GM — DAT (Daewoo), SsangYong.

Еще совсем недавно японские автомобили отличались относительно невысокой начальной стоимостью и доступными ценами на запчасти, но в последнее время по этим показателям они догнали престижные европейские бренды.Причем почти в одинаковой степени это касается всех марок автомобилей из страны восходящего солнца — Toyota (Toyota), Mitsubishi (Mitsubishi), Subaru (Subaru), Isuzu (Isuzu), Honda (Honda), Mazda (Mazda). или, как говорили ранее, Мацуда), Сузуки (Сузуки), Дайхатсу (Дайхатсу), Ниссан (Ниссан). Ну а автомобили выпускаются под японско-американскими брендами Lexus (Лексус), Scion (Scion), Infinity (Инфинити),

Правильное давление в шинах — очень важный аспект безопасного вождения. Хотя этот показатель можно назвать относительным, так как он показывает соотношение доли воздуха к объему, а не просто измеряет его количество в шине.Но такие измерения нужно проводить постоянно, потому что систематический контроль обеспечит безопасность во время движения и долговечность узлов автомобиля. Измерения проводятся с помощью специального прибора, называемого манометром. Они бывают разных типов и разных классов точности. Поэтому для постоянного использования стоит выбирать качественный прибор с высоким классом точности.

Автомобили отечественного производителя Lada Granta популярны и по сей день. Это связано с тем, что цена на них невысокая, и позволить себе такую ​​машину может даже среднестатистическая семья со средним достатком.Соотношение цены и качества примерно такое же, хотя некоторые модели Lada по-прежнему получают много негативных отзывов на форумах. Владельцы таких автомобилей часто не задумываются, какие нормы давления следует соблюдать. Они даже не знают, где указаны такие параметры. Аналогичную информацию можно найти в эксплуатационной книжке. Там производитель описывает, какие показатели подходят для какой модификации. Также указана информация о размерах шин, подходящих для таких автомобилей и количестве атмосфер для каждого из вариантов.

Манометр в шинах

Для 13-дюймовых шин допустимый предел при частичной нагрузке составляет 1,9 атмосферы. А при полной загрузке они увеличиваются до 2,1 бар на задних шинах. Но уже колеса размером 14 дюймов нужно накачать до 2,0 бар. При максимальной загрузке автомобиля показатели должны составлять 2,2 бара на шинах заднего моста. Общая грузоподъемность автомобиля — 475 килограмм.

На заметку.

После того, как шины автомобиля накачаны в шиномонтажном сервисе, рекомендуется по прибытии домой проверить уровень атмосферы собственным манометром.

Очень часто сотрудники таких организаций не заморачиваются и накачивают все шины до 2,0 бар. Причем для конкретной марки автомобиля такие показатели могут быть завышены или занижены. Поэтому прокачку нужно контролировать самостоятельно. Неправильное давление может вызвать множество проблем. Например, недостаточно накачанные шины могут привести к:

• быстрое стирание боковых протекторов на резине;
• перегрев шин и их преждевременный износ;
• нарушение управляемости автомобилем, особенно на поворотах;
• перерасход топлива.

Недокачанные шины обладают некоторыми преимуществами:

• мягкий ход автомобиля;
• отсутствие шума и дребезжания внутри машины.

Но недостатки явно перевешивают все достоинства. Чтобы потом не тратить деньги на новые шины, лучше придерживаться приемлемых норм.

Накачанные колеса также не очень хорошо влияют на состояние узлов и деталей автомобиля:

• подвеска быстро изнашивается;
• средний протектор на резине стерся;
• машина едет тяжело;
• в салоне можно услышать дребезжание и ощутить все неровности и ухабы на дороге.

Плюс только в экономии топлива, но не стоит этому радоваться. Недостатки здесь явно перевешивают все достоинства.

Замеры давления необходимо проводить только после трехчасового простоя автомобиля после поездки, на холодных шинах.

Давление в колесах «Лада» зимой

Зимой и летом давление внутри шины меняется из-за перепадов температуры окружающей среды.Например, летом, когда очень жарко, воздух внутри шины нагревается, и ее объем увеличивается. Поэтому колёса нельзя качать немного, примерно на 0,3 атмосферы. А зимой происходит с точностью до наоборот. Из-за невысокой температуры объем воздуха в шинах уменьшается, поэтому их следует прокачивать еще и на 0,3 атмосферы.

Очень важно, где находится автомобиль. Если стоит в теплом помещении, то при измерении давления манометр покажет оптимальные показания.Но если выйти на улицу в морозную погоду, производительность шин упадет примерно на 0,4 бара. А машина уже будет ездить на недокачанных шинах, а это небезопасно. Поэтому в гараже стоит накачать колеса и показатели следует немного завышать, так как на морозе они падают.

На заметку.

Еще одним фактором является загруженность автомобиля. Если колеса уже накачаны до необходимых параметров, учтены на морозе, а машина загружена по максимуму, в этом случае также нужно учитывать рекомендации производителя относительно показателей при повышенной загруженности.В итоге получается, что прокачивать нужно с учетом снижения давления на морозе и при максимальной нагрузке.

Поклонники универсала «Лада Калина» часто не задумываются об изменении давления в шинах в разное время года. Для таких автомобилей оптимальная производительность — 2,2 атмосферы на колесах передней оси и 2,3 — на задней. Большинство водителей согласны с этими рекомендациями производителя и не ощущают сильного дискомфорта во время вождения. Но зимой многие отклоняются от этих стандартов.В холодную погоду передние шины накачиваются до 2,0 бар, а задние — до 2,2 бар. Это с учетом того, что шины на машине заводские. Если машину поменять на широкопрофильные шины, то показатели давления увеличиваются. Должно быть 2,4 стержня спереди и 2,5 стержня сзади. Низкопрофильные и узкие шины требуют 1,9–2,0 АТМ на передней оси, а 2,0–2,2 на задней.

Седан Lada Vesta имеет большую максимальную грузоподъемность, чем предыдущая модель.Индекс грузоподъемности до 615 килограмм. В инструкции указаны параметры давления равные 2,1 атмосферы, как для передних колес, так и для задних. При увеличении нагрузки задние колеса нагнетаются до 2,2 бар. Такие показатели характерны для шин R15 и R16. Но зимой лучше держать давление в пределах 2,2 бар. Производитель рекомендует измерять количество воздуха в шине не реже одного раза в неделю. А также такое мероприятие необходимо провести перед длительной поездкой.

Давление в шинах «Лада Веста Кросс» имеет несколько другие параметры. Заводские колеса на машине — R17, поэтому передние колеса требуют накачки до 2,2 атмосфер, а задние — до 2,4. Но если устанавливаются шины другого размера, то нужно руководствоваться общей таблицей давления «Жигули».

Поклонникам модели Ларгус стоит учесть, что атмосферные показания в этой машине выше, чем в предыдущих рассматриваемых моделях. Давление в колесах Ларгус для шин R14 и R15 — 2.4 бара на передней оси и 2,6 на задней. Но владельцы таких автомобилей отмечают, что при таких параметрах машина очень жестко едет, поэтому рекомендуемые показания часто занижаются. При этом сильного износа резины нет. Но не стоит увлекаться недооценкой, так как это может привести к кучей проблем. Если водитель любит быструю езду, то снижение давления на 1,0 бар будет вполне оправданным. Резина нагревается с большой скоростью, и объем воздуха увеличивается, поэтому такое уменьшение на нее не повлияет.

Индикаторы давления в шинах для «Лада Лифтбек» ​​летом

Подсказку производителя для оптимальных показаний давления можно найти на средней стойке водительской двери. По ее словам, количество атмосфер в такой машине должно составлять 2,0 атмосферы на всех четырех колесах с минимальной нагрузкой. Максимальная нагрузка автомобиля предусматривает изменение показателей до 2,2 бар на задней оси и 2,0 бар на передней.

Летом, если машина стоит в прохладном гараже, показатели будут такими же, а при выходе машины на жару количество воздуха в шине увеличится.Поэтому перед поездкой стоит снизить давление примерно на 0,3 бар. Так удастся добиться максимально правильных параметров, которые заявлены производителем. Самое главное в этом случае — следить за поведением машины. Если автомобиль заносит на повороте или был замечен чрезмерный расход топлива, то сразу нужно проверить давление и довести его до оптимальной производительности. В противном случае придется покупать новые запчасти и шины.

Водитель должен систематически проверять давление.Если постоянно забывать о такой мелочи, то это может повлечь за собой множество последствий. Управляя автомобилем по оживленной трассе с неправильным давлением, вы можете подвергнуть опасности не только себя, но и других водителей и пешеходов.

Но разница не слишком существенная. Для колес размером R13 передние и задние колеса должны быть накачаны на 1,9 атмосферы, а R14 и R15 должны быть накачаны до 2 атмосфер.

Лада Гранта седан

13 шин в комплектации Norm

Lada Granta лифтбэк

14-я резина на лифтбек Granta

В этом случае следует также учитывать нагрузку, с которой автомобиль эксплуатируется большую часть времени.Если полезная нагрузка составляет примерно половину максимальной грузоподъемности, шины следует накачать, как описано выше. Но, если машина постоянно едет с полной нагрузкой, то давление в задних шинах следует немного увеличить. Для 13-ти колес сзади нужно накачать до 2,1 атм., А для 14-го и 15-го радиуса давление в задних шинах Lada Grant нужно повысить с 2,0 до 2,2 атмосферы.

Если вы едете на колесах, давление в которых чуть меньше, чем требует производитель автомобиля, то действительно будет немного комфортнее.Однако следует учитывать несколько факторов.

Факторы, которые следует учитывать

Прежде всего безопасность. Не зря производитель прописывает для шин конкретное значение давления. При движении на небольшой скорости, например до 60 км / ч, это особо не скажется, но если вы любитель скорости, то лучше не экспериментировать. Шины с давлением даже немного меньше номинального ухудшат управляемость автомобиля на высоких скоростях, а также увеличат его тормозной путь.

Меньше давления — больше расход

Во-вторых, меньшее давление в шинах означает большее сопротивление качению и, соответственно, больший расход топлива, а также повышенный износ самого протектора. Поэтому практически все производители шин рекомендуют водителям регулярно проверять давление в шинах своего автомобиля. Это нужно делать не реже одного раза в три недели.

Оптимальный размер резины для Лада Гранта

Чтобы сделать езду по неровной дороге более комфортной с шинами, лучше всего выбирать те, которые будут иметь самый высокий профиль.Это позволяет колесам поглощать большие неровности.

Для Lada Granta в данном случае лучшим вариантом будут шины размером 185 / 60R14.

Среди автомобилистов ведутся споры о том, какое давление должно быть на автомобиль «Лада Калина», «Гранта» или любую другую модель этого российского производителя. Одни смотрят в паспорте и накачивают шины в соответствии с нормативными значениями, другие пробуют несколько вариантов давления в колесах.

Однозначно можно сказать, что давление в шинах Гранта, Калина или Приора влияет на ходовую часть, влияет на расход топлива, а также способствует или предотвращает быстрый износ шин.

В «Жигули» есть 3 варианта состояния давления в колесах:

• занижены. Увеличивается контакт поверхности колес «Гранта», «Приора» или «Калина» с дорожным покрытием, что ускоряет износ изделия. Топливо расходуется быстрее, а тормозной путь длиннее;
• завышена. Колеса автомобиля меньше соприкасаются с дорожным покрытием, что увеличивает вероятность досрочного ремонта ходовой части.Увеличивается также скорость износа колес. При этом ухудшается управляемость автомобиля на высокой скорости или крутых поворотах. Пассажиры и водитель чувствуют, что поездка в машине становится менее комфортной — машина подпрыгивает даже на небольших неровностях;
• нормальный. Под таким давлением подразумевается показатель, находящийся в пределах 5-15% от того, что указано на автомобиле или в паспорте. В этом случае шины изнашиваются равномерно. Находиться в машине при движении по неровному дорожному покрытию или бездорожью комфортно.

Особенности накачки колеса

Для комфортного и безопасного вождения «Калины» зимой и летом необходимо измерять степень накачивания колес механическим или электронным манометром.

Оптимальный режим накачки Вы также увидите в таблице, представленной каждым производителем шин. Значения в нем корректируются в зависимости от:

• количество пассажиров, багажа;
Модель автомобиля
• (показатели «Гранты», «Приоры» и других моделей «Жигулей» различаются в зависимости от их веса).

Не забывайте поддерживать одинаковое давление зимой и летом.

Однако есть нюанс: если «Лада Калина» длительное время стояла в теплом гараже или на СТО, приготовьтесь к небольшому снижению прокачки колес после выхода на холод.

Таким образом, в холодное время года вам придется чаще накачивать шины своего автомобиля.

Нормативное значение указателя давления в передних и задних колесах для «Лада Калина» должно быть следующим:

• для модели ВАЗ-1117 — 1.9 атм на передние и задние колеса при частичной нагрузке, а также 1,9 / 2,1 на передние и задние колеса при полной нагрузке;
• для модели ВАЗ-1118 — 1,9 или 2 атм при частичной нагрузке, а также от 1,9 до 2,2 атм при полной нагрузке на передние и задние колеса соответственно;
• для модели ВАЗ-1119 — 2 атм при частичной и 2 / 2,2 атм при полной нагрузке на передние и задние колеса соответственно.

Наличие в салоне автомобиля до 3-х человек специалисты называют частичной загрузкой «Приоры», «Гранты» или другой модели Лады при условии, что багажник отсутствует. загружен.Полная загрузка — максимально возможное количество пассажиров в машине и груза в багажнике (массой менее 50 кг).

Если вы хотите узнать уровень накачивания колес, подождите, пока они остынут (после долгой поездки или пребывания на солнце). Это сделает показания манометра более точными.

Производители колесной резины

Для «Приоры», «Гранты» (лифтбэк) или другой модели Lada на рынке можно найти следующие типы резины:

• Matador 175/70 R13 Nordicca MP 52 82T.Используется для езды в холодное время года. Продукт хорошо себя показал на сухих и влажных поверхностях, на льду и снегу. Если вы собираетесь использовать продукцию для «Гранты» (седан или лифтбэк), накачайте колеса до 2 атм согласно инструкции производителя;
• Bridgestone 175/70 R13 Blizzak Revo GZ 82s. Это группа нешипованных зимних колес с мягким составом протектора. Оборудован большим количеством ламелей. Для «Приоры» подходит значение давления от 2 до 2,5 атм, что учитывает характеристики продукции этой фирмы;

• Kleber 175/70 R13 Viaxer 82T.Улучшенная резиновая смесь предназначена для путешествий в теплое время года. Имеет точность регулирования и снабжен дренажными каналами. Оптимальная величина прокачки для таких продуктов — 2,2 атм;
• Nokian 175/70 R13 Hakkapeliitta R2 82R. Он оформлен в елочку и оснащен ламелями. Он отличается мягкой резиной в протекторе и не накапливает снег в пятне контакта с дорожным покрытием. Надут от 2-х банкоматов, что подходит для Гранты;

• Fulda 175/70 R13 Ecocontrol 82T.Предназначен для летнего использования, производство Польша. Производитель допускает накачку шин до 2,5 атм;
• Barum 175/70 R13 Brillantis 2 82T. Рекомендуется к использованию на «Гранте», «Приоре» и других типах Лады по соотношению цены и качества.

На вопрос «какие шины можно поставить по гранту» однозначно ответить нельзя. Как и в случае с другими машинами, выбор шин и дисков является приоритетом для каждого водителя, поскольку правильный выбор обеспечит комфортную и безопасную поездку.

Для того, чтобы правильно выбрать размер и выяснить, какие шины лучше всего подходят для Лада Грант, следует разобрать множество факторов, напрямую влияющих на выбор.

Сфера влияния шин и дисков

Чтобы понять, какие шины на ладу Гранта подходят лучше всего, первым делом необходимо выяснить, на что влияет размер шин и колесных дисков автомобиля. Специалисты мастерской отмечают, что при замене покрышек следует руководствоваться тем, что разница в наружном диаметре минимальна.

Выбор шин влияет на следующие особенности эксплуатации автомобиля:

• тормозные и тяговые характеристики;
• трансмиссия;
• расход топлива;
• выбросы в атмосферу.

Увеличение радиуса колеса, шины и обода дает следующий эффект.

Обозначения: + — улучшение, — — ухудшение, 0 — без изменений.

Изменение размера шин определенно приведет к изменению точности управления автомобилем. По мере увеличения объема шины увеличивается и пространство, соприкасающееся с дорожным покрытием.Это обеспечивает достаточно места для маневрирования.

Заводские характеристики шин и дисков на ЛадаГранта

По заводской спецификации оригинальные шины на гранту с завода имеют радиус R14 и R13.
R14 — довольно классический вариант для малолитражек. И диски, и резина с такими габаритными характеристиками различаются по бюджету и их довольно легко найти на рынке. Аналогичная ситуация и с R13. Поэтому, анализируя, какие диски подходят для гранта, стоит помнить об этом моменте.

Размерные характеристики шин и дисков, подходящих также для LadaGranta
На сегодняшний день все переднеприводные модели АвтоВАЗа комплектуются дисками R15. И хотя оригинальные шины Lada Granta R15 с этой моделью колес имеют размерные характеристики 185/55, они также хорошо подойдут к шинам 175/70, 185/60 и даже 195/55.

Давление в шинах штатной заводской гранты, а именно R13 и R14 при частичной нагрузке, выглядит так:
R13 (175/70) — 0.19 / 0,19 (1,9 / 1,9)
R14 (175/65) — 0,20 / 0,20 (2,0 / 2,0)
Данные представлены в соотношении «кг / см2».
Давление в шинах спорт гранта примерно на том же уровне с поправкой на размерные характеристики колеса, а именно R16.

Постоянный контроль уровня давления в шинах обеспечивает безопасность движения и предотвращает износ шин. Если давление будет на пониженном уровне (ниже 1,9 атмосфер), то боковые части протектора из-за неравномерного распределения воздуха при движении будут изнашиваться намного сильнее.При прокачке шин (выше значения 2,0) пострадает средняя часть протектора, что также чревато своими последствиями.

Перечень негативных последствий неравномерного распределения давления в шине:

1. расширяется масштаб контакта с дорогой;
2. быстрый и неравномерный износ протектора;
3. снижение управляемости автомобиля;
4. потенциальная опасность создания аварийной ситуации на дороге.

Чтобы правильно измерить давление в шинах, вам понадобится манометр.Измерения следует проводить через некоторое время после поездки, чтобы воздух в шинах успел остыть после сильного нагрева во время движения. Показатель оптимального значения (для R13 — 1,9, для R14 — 2,0) обозначается цифрой, которую можно найти на бензобаке или на двери автомобиля. Важно, чтобы воздух не выходил из колеса при использовании калибра.

Полученное значение нужно сравнить с оптимальным и прокачать до нужного. Для параллельных колес на одной оси уровень давления должен быть одинаковым.

Можно ли установить на Лада Гранта колеса с габаритом R16 205/55

Колеса с радиусом R16 размерностью 205/55 не подходят как для обычной комплектации Лада Гранта, так и для модели Sport. Из-за слишком большого диаметра они будут слишком плотно прилегать, что при движении приведет к быстрому износу протекторов и снижению маневренности автомобиля. Владельцы Lada Granta рекомендуют ставить 195/50 или 205/45 с радиусом R16.

Зимняя резина для LadaGranta

Подбор зимней резины для Lada Granta должен осуществляться исходя из особенностей местности, по которой вам придется ездить.Если дороги недостаточно расчищены, а зима грозит частыми оттепелями, сменяющими заморозки, то в этом случае следует использовать шипованные шины.

Зимние шины должны мягко прилегать к поверхности дороги, чтобы обеспечить надежное сцепление даже на укатанном снегу, а основание протектора должно быть жестким для точного управления. Фирмы Goodyear, Pirelli и DinlopWinter имеют правильные размерные характеристики для Lada Granta, а именно в диапазоне от R13 до R16.

Зимние шины также должны пройти обкатку, чтобы они могли прочно сидеть на своих местах.Для качественной обкатки потребуется проехать около 500 километров. При обкатке старайтесь избегать резких торможений и скольжения. Для улучшения тяги также рекомендуется выбирать шины с узким профилем.

Летняя резина для ЛадаГранта

Качественная летняя резина должна обеспечивать высокий уровень сцепления как на сухом, так и на мокром асфальте, а также плавность хода. Шины должны иметь широкий профиль, и для этого лучше всего подходят шины с размерами R14 185/60 или R14 175/65.

Краткий чек-лист — Как правильно купить резину на Лада Гранта

1. Подбирайте подходящие шины, учитывая габаритные характеристики завода. Размер выбранных вами шин должен соответствовать этим данным.
2. Обратите внимание на рисунок протектора. От этого во многом зависит комфорт езды.

3. Обратите внимание на параметры ширины. Именно ширина пятна, сходящейся с проезжей частью, влияет на ускорение и замедление автомобиля.
4.Особое внимание следует уделить диаметру отверстия. Слишком высокие или широкие шины могут повредить подвеску, а слишком узкие шины увеличат нагрузку на подшипники.
5. Важно учитывать индекс максимальной скорости и индекс грузоподъемности.
6. Данные об износе протектора, сцеплении, температуре и максимальном давлении предоставляют информацию о сроке службы шин, характеристиках торможения, термостойкости и предельном давлении в шинах, соответственно.