Фото лады икс рей фото: LADA XRAY 2021 — фото в новом кузове: салон, вид снаружи, багажник — ПЕЖО Центр Тамбов — официальный дилерский центр Peugeot в Тамбове

Содержание

Фотографии » LADA Xray | Лада Х Рей

На российском рынке кроссовер LADA XRAY присутствует уже более 4 лет. Многие модели с таким сроком жизни претерпевают смену поколения. Но АВТОВАЗ если об этом и думает, то свои планы не раскрывает. А вот независимые дизайнеры уже начали работать в этом направлении и представили свое видение второго На прошлой неделе АВТОВАЗ сообщил о запуске в серийное производство новой версии LADA XRAY Cross. Автомобиль вместе с приставкой Instinсt получил черную крышу, новые детали в оформлении интерьера и экстерьера, а также мультимедийную систему Яндекс.Авто. Теперь же появились первые официальные фото АВТОВАЗ в феврале этого года начал окрашивать автомобили семейства Лада Икс Рей в новый яркий оттенок. Новый цвет называется «Лазурный синий». Автомобили с таким оттенком уже начали появляться в дилерских центрах LADA. Публикуем официальные фотографии кросс-версии Лада Икс Рей Кросс, оснащенной новой бесступенчатой автоматической коробкой передач (АТ, вариатор, CVT).

На фото показан интерьер автомобиля, а также полностью раскрыты детали интерьера. В Сети опубликовали первые фотографии кроссовера Лада Икс Рей в новой комплектации. Речь идет о версии кроссовера с минимальным оснащением. В Сети опубликовали первое фото Лада Икс Рей с обновленной автоматизированной механической трансмиссией с новой прошивкой. АВТОВАЗ организовал масштабный тест-драйв кросс-версии нового автомобиля пополнившего семейство LADA XRAY. Новинку, получившую приставку Cross и другие опции, смогли протестировать на дорогах Казахстана журналисты ведущих автомобильных изданий. Официальный лада Клуб также отправляется на АВТОВАЗ начал отгружать в дилерскую сеть первые экземпляры кросс-версии LADA XRAY. Это подтверждают оказавшиеся в распоряжении официального Лада Клуба фотографии, на которых новинка запечатлена во время погрузки на автовоз. В Сети появилась свежая порция фотографий кросс-версии Лада Икс Рей.

Новинку, дебют которой состоится в рамках Московского автосалона, АВТОВАЗ продолжает тестировать на дорогах общего пользования. В Тольятти фотошпионам вновь удалось заснять кросс-версию Лада Икс Рей. Автоваз продолжает тестировать новинку на дорогах общего пользования.

1 2 3 4 5 6 7

LADA XRAY Cross – Цены и комплектации, обзор, фото – Первый Лада Центр, Краснодар.

1.8 л 16-кл. (122 л.с.), 5МТ / Classic (GAB33-50-XRZ)

• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет черный
• Обивка сидений ткань. Цвет черный
• Розетка 12V на центральной консоли

• Электроусилитель рулевого управления

• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Аудиоподготовка

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Рейлинги
• Декоративная насадка выпускной трубы
• 17» легкосплавные диски Proton
• Запасное стальное колесо временного использования 15»

1.8 л 16-кл. (122 л.с.), 5МТ / Classic / Optima (GAB33-50-X01)

• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет черный

• Обивка сидений ткань. Цвет черный
• Розетка 12V на центральной консоли

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (2DIN, FM/AM с функцией RDS, USB, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

1.8 л 16-кл. (122 л.с.), 5МТ / Comfort (GAB33-51-XRZ)

• LADA Ride Select (селектор выбора режима движения)

• Электронная блокировка дифференциала (EDL)

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения

• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Складная спинка переднего пассажирского сиденья
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет черный
• Обивка сидений ткань. Цвет черный
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетки 12V на центральной консоли, для задних пассажиров и в багажном отделении
• Выдвижной ящик под сиденьем переднего пассажира
• Двойной пол багажного отделения
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка

• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (2DIN, FM/AM с функцией RDS, USB, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

6 л 16-кл. (113 л.с.), АТ / Classic/ Optima (GAB44-50-XRZ)

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)

• Защита двигателя и подкапотного пространства

1.8 л 16-кл. (122 л.с.), 5МТ / Luxe (GAB33-52-XRZ)

• LADA Ride Select (селектор выбора режима движения)
• Электронная блокировка дифференциала (EDL)

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Складная спинка переднего пассажирского сиденья
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет (по выбору) оранжевый/черный
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Отделка руля и чехла селектора КПП кожей
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетки 12V на центральной консоли, для задних пассажиров и в багажном отделении
• Розетка USB для задних пассажиров
• Выдвижной ящик под сиденьем переднего пассажира
• Двойной пол багажного отделения
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев рулевого колеса
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Подогрев задних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (2DIN, FM/AM с функцией RDS, USB, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

1. 6 л 16-кл. (113 л.с.), АТ / Comfort (GAB44-51-XRZ)

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Аудиосистема (2DIN, FM/AM с функцией RDS, USB, AUX, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

1. 8 л 16-кл. (122 л.с.), 5МТ / Luxe / Prestige (GAB33-52-XU4)

• LADA Ride Select (селектор выбора режима движения)
• Электронная блокировка дифференциала (EDL)

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Складная спинка переднего пассажирского сиденья
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет (по выбору) оранжевый/черный
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Отделка руля и чехла селектора КПП кожей
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетки 12V на центральной консоли, для задних пассажиров и в багажном отделении
• Розетка USB для задних пассажиров
• Выдвижной ящик под сиденьем переднего пассажира
• Двойной пол багажного отделения
• LED-подсветка интерьера
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Усиленная тонировка задних стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев рулевого колеса
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Подогрев задних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Камера заднего вида
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система с навигацией (7» цветной дисплей с TouchScreen, FM/AM с функцией RDS, USB, AUX, Bluetooth, Hands free), 6 динамиков

1. 6 л 16-кл. (113 л.с.), АТ / Luxe (GAB44-52-XRZ)

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Складная спинка переднего пассажирского сиденья
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет (по выбору) оранжевый/черный
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Отделка руля и чехла селектора КПП кожей
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетки 12V на центральной консоли, для задних пассажиров и в багажном отделении
• Розетка USB для задних пассажиров
• Выдвижной ящик под сиденьем переднего пассажира
• Двойной пол багажного отделения
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

1. 6 л 16-кл. (113 л.с.), АТ / Luxe / Prestige Connect (GAB44-52-X05)

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира с функцией отключения
• Подголовники задних сидений 3 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Автоматическое запирание дверей при начале движения
• Автоматическое включение аварийной сигнализации при экстренном торможении
• Автоматическое отпирание дверей и включение аварийной сигнализации при столкновении
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• LED-дневные ходовые огни
• Противотуманные фары с функцией освещения поворота
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Дисковые тормоза задних колес
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC) с функцией отключения
• Противобуксовочная система (TCS)
• Система помощи при трогании на подъеме (HSА)
• Защита двигателя и подкапотного пространства

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов
• Центральный подлокотник с боксом
• Складная спинка переднего пассажирского сиденья
• Заднее сиденье с раскладной спинкой в пропорции 60/40
• Панель приборов. Цвет (по выбору) оранжевый/черный
• Обивка сидений комбинированная ткань/экокожа. Цвет (по выбору) оранжевый/серый
• Отделка руля и чехла селектора КПП кожей
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Футляр для очков
• Розетки 12V на центральной консоли, для задних пассажиров и в багажном отделении
• Розетка USB для задних пассажиров
• Выдвижной ящик под сиденьем переднего пассажира
• Двойной пол багажного отделения
• LED-подсветка интерьера
• Подсветка мест входа-выхода в передних дверях

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте и по вылету рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Усиленная тонировка задних стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев рулевого колеса
• Подогрев передних сидений 3х уровневый
• Подогрев задних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Камера заднего вида
• Датчики дождя и света
• Климат-контроль
• Охлаждаемый вещевой ящик
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Мультифункциональное рулевое колесо
• Мультимедийная система с навигацией (7» цветной дисплей с TouchScreen, FM/AM с функцией RDS, USB, AUX, Bluetooth, Hands free, Android Auto, Apple Car Play), 6 динамиков

Lada Xray 2020 — модель в новом кузове Cross

Как будет выглядеть новый Lada Xray 2020 модельного года в кузове Cross, стало известно еще несколько лет назад, когда Волжский автозавод представил первый концепт модели с дополнительными пластиковыми накладками в нижней части кузова и увеличенным дорожным просветом. По сравнению с основным высоким хэтчбеком, созданным в свое время на базе модели Renault Sandero Stepway, новинка подверглась определенным доработкам, которые собственно и повлияли на такую длительную задержку при запуске ее в серию.

По сути серийная Lada Xray Cross 2020 получила новый кузов с интегрированными в крышу рейлингами, внедрение которых потребовало некоторого изменения штампов и штамповой оснастки. Результатом всех кузовных доработок стали несколько увеличенные габариты авто, причем, не только за счет более высокого дорожного просвета. Достаточно отметить, что модель в новом кузове получилась еще и самой широкой во всей производственной гамме АвтоВАЗа — 1810 мм, что даже шире «Весты Кросс» с ее 1785 мм. В итоге, так называемый кроссовый рестайлинг привел к тому, что автомобиль стал позиционироваться скорее как новая модель, нежели иная техническая модификация, адаптированная под определенные дорожные условия.

Однако, изменения коснулись не только кузова, но и технической части кроссовой Лады Икс-Рей: новинку оснастили дисковыми тормозами на всех колесах и немного откалиброванной коробкой передач Renault JR5-523 под колеса большего размера. Салон получил улучшенную отделку и повышенный уровень комфорта. На консоли управления оборудованием появился вращающийся селектор режимов движения с пятью вариантами выбора: зимний режим работы штатной системы стабилизации (ESC), режим движения по песку, спортивный режим, а также включение и отключение обычного режима работы системы стабилизации. Клиренс составил внушительные 215 мм.

Со старта продаж Lada Xray Cross была доступна в одной единственной версии с 1,8-литровым мотором (ВАЗ-21179, 122 л.с.) и механикой, более дешевый 1,6-литровый ВАЗ-21129 мощностью 106 л.с. под капот более продвинутого «Иксрея» было решено не устанавливать, но позже стало известно, что производитель для своей новинки также рассматривает внедрение иностранных агрегатов.

Речь идет о применении на модели вариатора японского производства Jatco JF015E в паре с ниссановским мотором HR16 (1,6 л, 113 л.с.). Данная связка HR16+CVT в частности используется в кроссовере Renault Kaptur, а также в кроссовых исполнениях Logan и Sandero с приставкой Stepway. Такая технически «японизированная» модификация «Иксрея» без каких-либо проблем прошла сертификацию Росстандарта, позже вазовцы возможно смогут подружить японский вариатор и со своим 122-сильным двигателем. Предположительно, отечественный производитель готовит бесступенчатую коробку на смену своему нерасторопному роботу, к работе которого изначально имелось слишком уж много нареканий.

Что касается обещанного ранее полного привода, то на новой модели Lada Xray Cross режима 4х4 не будет — внедрение подобной системы на своем первом полноценном кроссовере в Тольятти посчитали нецелесообразным. Хотя на ранних стадиях проектирования новинки рассматривались не только вариант полным перенесением полноприводной трансмиссии от технически родственного Renault Duster, но и даже внедрение таких инновационных систем, как установка на заднюю ось отдельного гидравлического привода и гибридизированного привода на электротяге. По неофициальным пока сведениям, первым полноприводным вазовским кроссовером как раз на базе «Дастера» станет следующее поколение «Нивы» Lada 4х4.

На видео ниже представлен один из самых первых обзоров выставочного экземпляра новой модели, снятый в ходе ее публичной презентации на вазовском стенде Московского международного автосалона в августе 2018 года. Ролик содержит интервью с Олегом Груненковым — директором проекта по созданию модельного семейства «Иксреев». Во втором видео проведены более подробный обзор и тест-драйв серийной версии Lada Xray 2020 в новом кузове Cross с целью выяснить: неужели новинка от АвтоВАЗа лучше «Дастера» и «Креты»? Нужен ли вообще полный привод в условиях не самого экстремального бездорожья?

Напоследок также отметим, что еще одна ранее анонсированная новая модель линейки «Иксреев» — Lada Xray Sport, выход которой также ожидался к 2020 году, в ближайшее время точно не появится. Напомним, концепт такого автомобиля был продемонстрирован еще в 2016-ом одновременно с прототипом седана Vesta Sport, с которым в итоге должен был иметь некоторую стилистическую и техническую унификацию и оснащаться таким же 145-сильным двигателем.

Согласно последним новостям, Волжский автозавод заморозил проект по созданию заряженной модификации своего высокого хэтчбека, видимо посчитав такой «спортивный рестайлинг» нерациональным. Сама же Lada Vesta Sport благополучно была доведена до серийного производства.

рентгеновских снимков цветов

Действительно ли эти изображения были сделаны с помощью рентгеновских лучей? Такие же рентгеновские снимки, как в медицинском кабинете? Да, были.

Можно ли назвать эти рентгеновские снимки «фотографиями», а процесс — «фотографией»? Думаю, да. Процесс включает воздействие на датчик электромагнитного излучения. Это именно то, что происходит с обычной камерой: электромагнитное излучение, испускаемое или отраженное объектом фотографии, фиксируется во время экспозиции.

Рентген, подсолнечник © Harold Davis

Большая часть, но не все, это излучение, улавливаемое традиционным способом, находится в визуальном спектре, то есть его можно увидеть человеческими глазами.

Но датчик DSLR также будет регистрировать излучение, выходящее за рамки видимого спектра (камера «видит» больше, чем мы, особенно в темноте), а обычные камеры можно модифицировать для захвата инфракрасного спектра (ИК) (в другая, более длинная сторона видимого спектра от рентгеновских лучей, которая короче видимого света с точки зрения длины волны).

ИК-снимки обычно называют «фотографиями» без какого-либо особого отличия от обычных, более коротковолновых снимков видимого света. Для сравнения, я считаю, что при рентгеновском облучении, которое захватывает даже более короткую радиационную волну, чем при обычном облучении видимым светом, следует использовать ту же терминологию.

Конечно, как фотографу, процесс рентгеновского снимка кажется очень знакомым!

Рентгеновский снимок колоколов © Гарольд Дэвис

Какое оборудование вы использовали для создания этих изображений? Для получения этих изображений мы использовали рентгеновскую систему, предназначенную для маммографии. Я надеюсь в будущем использовать какое-то другое рентгеновское оборудование.

Насколько это безопасно? Надеюсь! Во время съемки мы использовали экран из свинцового стекла (как и обычный оператор рентгеновского аппарата), и мне сказали, что с точки зрения статистики любое дополнительное воздействие радиации, с которым я мог столкнуться, вряд ли увеличится. мой пожизненный риск заболеть раком.

Cala Lilies Fusion X-Ray © Гарольд Дэвис

Как вы получили доступ к оборудованию? Мой друг и сотрудник Др.Юлиан Кёпке — физик и врач, практикующий радиолог. Мы использовали это оборудование в его радиологической практике в нерабочее время.

Как выглядит процесс создания? Процесс создания этих рентгеновских изображений цветов и ракушек больше похож на создание фотограммы — то, что Ман Рэй назвал рентгенографом — чем на использование обычной камеры. Цветы располагаются на верхней части регистрирующей среды, в данном случае цифрового датчика, а затем экспонируются. Но экспонирование осуществляется с помощью рентгеновских лучей, а не света в видимом спектре, как на фотограмме, где объекты помещаются поверх светочувствительного носителя (исторически чаще это бумага с эмульсионным покрытием, а не цифровой датчик).

Рентгеновские лучи выявляют внутреннюю форму и формы, а не проявление поверхности объекта. Можно смотреть на лепестки цветка, как на марлю или вуаль, и видеть капилляры внутри листа.

Спрей Розы X-Ray © Harold Davis

Вместо поверхности раковины, когда рентгеновская «камера» направлена на раковину, выявляются внутренние спирали, формы и формы структуры.

Медицинский рентгеновский процесс включает в себя как генерацию рентгеновского излучения, так и его регистрацию цифровым датчиком.В этом смысле это аналогично срабатыванию студийного стробоскопа и улавливанию световых волн, излучаемых стандартным датчиком камеры. Со стационарным медицинским рентгеновским аппаратом я больше всего напомнил старомодный аналоговый увеличитель для темной комнаты, где световой луч от увеличителя фиксируется на носителе непосредственно под ним (фотобумага, чувствительная к свету в аналоговой темной комнате) .

X-Ray Fusion подсолнечника © Harold Davis

Оказывается, что рентгеновское излучение как источник электромагнитного излучения имеет совсем другие свойства, чем видимый спектр.Рентгеновские лучи рассеиваются и затухают в отличие от привычного нам видимого света. Таким образом, чтобы получить хорошие рентгеновские композиции, необходимо было работать с характеристиками того, как рентгеновское излучение, испускаемое системой маммографии, которое мы использовали, будет захвачено цифровым датчиком, и соответствующим образом расположить цветочные композиции.

Две розы (вид сбоку) © Harold Davis

Проще говоря, система маммографии была разработана для наилучшего отображения формы женской груди человека.Мы получили лучшие результаты, поскольку наша композиция могла имитировать эту трехмерную форму и расположение.

Обычно мы размещаем цветы на листе оргстекла и выравниваем оргстекло по отметкам, нанесенным на машине. Это было сделано для того, чтобы позволить фотографии в световых коробах создать «сплавленные» версии этих изображений. Затем мы с Джулианом забились за щитом из свинцового стекла оператора, пока Джулиан управлял машиной.

Dahlia Fusion X-Ray Inversion © Гарольд Дэвис

Что такое рентген? Видимый свет, который мы видим, состоит из волн (также частиц), длина которых излучается или отражается вдоль электромагнитного спектра.Видимый свет колеблется от 400 до 750 нм с точки зрения длины волны. Для сравнения, рентгеновские лучи, которые мы использовали, имели длину волны примерно 0,04 нм (или короче по длине волны примерно в 10 000 раз, чем видимый свет).

Рентгеновские лучи представляют собой невидимую для наших глаз форму электромагнитного излучения с более короткой длиной волны, чем видимый спектр. Рентгеновское излучение, впервые названное и обнаруженное Вильгельмом Конрадом Рентгеном в 1895 году (за что Рентген получил Нобелевскую премию), в основном используется сегодня для медицинской визуализации (также в исследовательских и промышленных целях).

Рентгеновский снимок подсолнечника © Harold Davis

Я считаю, что захват рентгеновского излучения — это просто еще одна форма фотографии, использующая цифровой датчик для захвата данных, генерируемых воздействием излучения электромагнитной волны — независимо от того, относится ли рассматриваемое изображение частей человеческого тела для диагностических целей, или цветка для художественных целей.

Что такое «термоядерный» рентген? Наша первоначальная идея заключалась в том, чтобы совместить рентгеновские снимки цветов с цветами в световых коробах для получения прозрачных изображений.Такой «фьюжн» позволил бы показать внутреннюю и внешнюю стороны цветочной композиции. Мы использовали прозрачный жесткий лист оргстекла, чтобы выровнять цветы для обоих процессов.

Георгины Fusion X-Ray © Harold Davis

Что вы используете для постпродакшна? Фотошоп.

Вы назвали эту работу «сотрудничеством». Пожалуйста, объясни. Как я уже отмечал, мой друг и случайный студент Джулиан — физик, врач и радиолог, интересующийся фотографией и астрофотографией.Мы сотрудничали и работали вместе, чтобы создать эти изображения, создав идеальное партнерство технической и научной и художественной сторон вещей!

Рентгеновский снимок коллекции Shell © Harold Davis

С помощью рентгеновских снимков вы снимали что-нибудь, кроме цветов? Пока, помимо цветов, я сделал несколько рентгеновских снимков ракушек. Я действительно надеюсь поэкспериментировать с другими предметами, когда смогу.

Планируете ли вы делать больше с помощью рентгеновской фотографии? Очень бы хотелось.Я очень доволен тем, как это сотрудничество зашло так далеко, но очевидно, что с художественной точки зрения можно сделать гораздо больше.

Где я могу увидеть больше ваших рентгеновских снимков? Посмотрите мою онлайн-галерею рентгеновских снимков и рентгеновских снимков методом Fusion, а также категорию рентгеновских снимков в моем блоге.

Рентген колоколов на белом фоне © Harold Davis

Instrument X-Ray: основы акустической гитары — Shopify

Покупка вашей первой гитары может быть нервным процессом для новичков, но как только вы узнаете части гитары, принять это решение станет намного проще.Знание частей и назначения частей гитары может помочь новичкам понять их потребности в инструменте.

Давайте углубимся в детали акустической гитары и посмотрим на отдельные части инструмента, на то, как они называются, и на то, как они могут повлиять на то, как звучит ваша гитара.

Самая большая и определяющая часть любой гитары — это ее корпус. Корпус акустической гитары представляет собой полый деревянный ящик, который резонирует со звуком, издаваемым струнами.Если вы посмотрите на разные гитары, вы заметите, что все они имеют свою уникальную форму. Каждая конкретная форма тела дает различный звук, поскольку форма влияет на то, как звук распространяется по инструменту. Поскольку форма играет такую большую роль в окончательном звучании, каждый корпус гитары также зависит от типа музыки или стиля игры.

Например, гитара, которую вы видите на фотографии, — это Dreadnought (также известная как модель DS). Это наиболее распространенная форма корпуса акустических гитар.Это довольно громоздкая и большая гитара, и поэтому она также обязана своим названием такому же большому британскому линкору. Размер этой гитары обеспечивает большую низкочастотную характеристику, поэтому лучше всего играть на этой гитаре медиатором. Всего существует девять различных типов корпусов акустических гитар, каждый из которых имеет свой собственный звук и предпочитаемый стиль игры! Но не только форма тела формирует звук. Вид дерева, из которого изготовлена гитара, также играет важную роль.Довольно часто верх туловища делают из дерева, отличного от бока или спины. Это позволяет производителю более точно формировать звучание инструмента.

Большая дыра в центре тела называется Звуковой дырой. Это отверстие гарантирует, что звук, производимый корпусом гитары, будет проецироваться на переднюю часть гитары. Если у вас есть гитара, которая поддается выбору стиля игры, вы обычно найдете Pick Guard на корпусе рядом со звуковым отверстием.Этот охранник нужен для того, чтобы — когда вы действительно собираетесь атаковать — вы не поцарапаете дерево. В классических акустических гитарах, которые обычно имеют корпус OO, это отверстие иногда окружено красивыми графическими деталями: розеттой. Так как классическая гитара предназначена для игры без медиатора, вы не найдете защитного кожуха на корпусе гитары.

Конечно, гитара бесполезна без струн, и чтобы удержать их на месте, нам понадобится мост, седло и несколько булавок. Эти детали также находятся на корпусе гитары, прямо под звуковым отверстием.Бридж — это дополнительный кусок дерева, который удерживает шпильки, к которым прикреплены струны. Седло, которое установлено на верхней части бриджа, имеет пять небольших выемок, через которые натягиваются струны. Струны доходят до грифа гитары, где они соединяются со стойками струн, которые, в свою очередь, соединяются с колышками. Поскольку струны закреплены на мосту и соединены со стойками для струн, которые можно поворачивать и затягивать с помощью колышков, струны можно затягивать и ослаблять.Это то, что позволяет вам настроить струны на ноты, которые вы хотите услышать. Обычно струны настраиваются следующим образом: E, A, D, G, B, E — причем последняя E на целую октаву выше первой.

Наконец, прыгнув от корпуса до грифа, мы добрались до одной из самых важных частей гитары: грифа. Гриф гитары разделен ладами на небольшие секции. Эти лады определяют места на грифе, где вы можете нажать на струны, чтобы изменить высоту звука на определенную ноту.Когда вы нажимаете на гитарную струну, вы фактически делаете ее короче, так что создаваемая вами нота всегда будет выше ноты, на которую настроена гитарная струна. Изменяя высоту тона разных струн и играя на этих струнах вместе, вы можете создавать аккорды, необходимые для исполнения вашей любимой песни.

Теперь, когда вы знаете, как идентифицировать части акустической гитары, вы можете просмотреть нашу коллекцию и выбрать идеальную для себя, чтобы начать работу! Следите за обновлениями в нашей следующей публикации, посвященной электрогитаре.

Рентгеновская фотография

Рентгеновская фотография очень привлекательна, потому что она раскрывает скрытую реальность, которую не видит человеческий глаз. В отличие от инфракрасной и ультрафиолетовой фотографии, это невозможно сделать с помощью камеры — вам нужно иметь разрешение на использование чьего-либо рентгеновского аппарата.

Мы собираемся осветить пару наиболее важных фактов о рентгеновской фотографии, чтобы вы могли безопасно ее исследовать!

Поиск рентгеновских аппаратов

Где найти рентгеновские аппараты? Имейте в виду, что у разных врачей всегда есть такое оборудование — вы должны найти способ получить разрешение на его использование, и аппарат должен иметь правильную настройку напряжения. Например, если вы хотите сфотографировать цветы, рентгеновский аппарат, необходимый для изображения растительного материала, должен иметь установленное напряжение от 10 до 40 киловольт (кВ).

Многие рентгеновские аппараты имеют минимальное напряжение 60 кВ, поэтому поиск идеального может занять некоторое время. Аппараты, предназначенные для получения изображений мягких тканей, обычно являются лучшим выбором, например, маммографы.

Фото Оуэна Бирда

Безопасность прежде всего

Работа с рентгеновскими аппаратами представляет серьезную опасность для здоровья.Если вы не защищены, этот вид излучения может вызвать повреждение щитовидной железы, кожи, репродуктивных тканей и т. Д. Вот почему пациенты всегда носят фартуки с подкладкой из свинца — эти тяжелые прокладки предотвращают повреждение чувствительных частей тела.

Поскольку вы не пациент и аппарат издает звуковой сигнал за несколько секунд до того, как будет сделан снимок, вам не нужно надевать фартук — вы можете просто выйти из комнаты. Стена между вами и рентгеновским аппаратом защитит вас.

Фото Мэтью Шварца

Использование правильной техники

Единственный способ найти идеальные настройки — это метод проб и ошибок.Поскольку рентгеновская фотография не так популярна, трудно найти какие-либо точные рекомендации.

Фотография цветка ниже была сделана с выдержкой от 24 до 29 кВ. Помимо напряжения, вам также необходимо выбрать правильное значение электрического заряда (в миллиамперах). Для изображения ниже было использовано значение 4 миллиампера, но вам может потребоваться его изменить, если вы снимаете другой вид цветка или, возможно, совершенно другой объект, например морскую ракушку.

Убедитесь, что рентгеновские лучи проникают через лепестки и листья цветка и делают их прозрачными.Нежный вид цветов, сфотографированных на рентгеновских аппаратах, поистине восхитителен!

Фото Cadop

Идеальные объекты для рентгеновской фотографии

Вы можете экспериментировать с разными типами цветов, такими как розы, орхидеи и лилии. Помимо цветов, вы также можете попробовать различные фрукты, например, папайю или ананас. Грибы — тоже прекрасный выбор.

Вам не нужно ограничиваться растениями — вы можете попытаться получить интересные рентгеновские снимки ракушек, морских коньков и даже таксидермических верховых животных более крупных животных.Имейте в виду, что кости могут выглядеть по-настоящему драматично на высококонтрастных черно-белых изображениях.

Фото Мэтью Шварца

Рентгеновские фотографии после обработки

Изображения, получаемые с помощью рентгеновского аппарата, называются файлами DICOM. DICOM используется во всем мире для хранения, обмена и передачи медицинских изображений, но вы можете конвертировать такие файлы в TIF или PSD в Photoshop и обрабатывать их как обычные фотографии. После преобразования изображений DICOM в файлы, которые можно редактировать в Photoshop, вы можете оставить их как фотографии в оттенках серого, но вы также можете проявить творческий подход и раскрасить их.

Если вы решили раскрасить их, обязательно поэкспериментируйте с различными режимами наложения, найденными в палитре слоев. Если вы хотите придерживаться классического черно-белого изображения, вы можете попробовать использовать команду инвертирования в Photoshop и поменять местами светлые и темные тона. Иногда обратная версия вашего изображения будет выглядеть более мощной, чем исходная.

Одно можно сказать наверняка — вы сможете получать потрясающие рентгеновские снимки после некоторой практики!

Фото Мэтью Шварца

Чтобы узнать больше о рентгеновской, инфракрасной и ультрафиолетовой фотографии, перейдите по ссылкам ниже.

Дополнительная литература:

Как снимать инфракрасную фотографию
16 замечательных инфракрасных фотографий
4 безумных метода фотографии, о которых вы, вероятно, не знали
Начало работы с УФ-фотографией
Рентгеновские фотографии цветов
Ник Визи: рентгеновская фотография

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Дифференциальная динамика RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках, измеренная с помощью FRET и автоматизированного анализа изображений

Abstract

Генетически закодированные биосенсоры на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) широко применяются для изучения пространственно-временной регуляции молекулярной активности в живых клетках с высоким разрешением.Эффективная и точная количественная оценка большого количества данных изображений из этих одноклеточных измерений FRET требует надежного и автоматизированного анализа данных. Однако нелинейное движение живых клеток представляет собой огромную проблему для решения этой задачи. Основываясь на регистрации изображения движения отдельной клетки, мы разработали автоматизированные методы анализа изображений для отслеживания и количественной оценки сигналов FRET в определяемых пользователем субклеточных областях. Кроме того, субклеточные пиксели были классифицированы в соответствии с их связанными сигналами FRET и динамикой анализируемых кластеров.Результаты показали, что индуцированное EGF снижение активности RhoA в мигрирующих клетках HeLa значительно меньше, чем в неподвижных клетках. Более того, активность RhoA поляризована в мигрирующих клетках с градиентом полярности, ориентированным в противоположном направлении миграции клеток. Напротив, отсутствует постоянное предпочтение полярности RhoA среди стационарных клеток. Таким образом, наши методы анализа изображений могут предоставить мощные инструменты для высокопроизводительного и систематического исследования пространственно-временной молекулярной активности в регулировании функций живых клеток с их формами и положением, непрерывно меняющимися во времени.

Образец цитирования: Eichorst JP, Lu S, Xu J, Wang Y (2008) Дифференциальная динамика RhoA в мигрирующих и стационарных клетках, измеренная с помощью FRET и автоматического анализа изображений. PLoS ONE 3 (12): e4082. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082

Редактор: Терри Минс, Массачусетская больница общего профиля / Гарвардский университет, США

Поступила: 6 ноября 2008 г .; Принята к печати: 26 ноября 2008 г .; Опубликовано: 30 декабря 2008 г.

Авторские права: © 2008 Eichorst et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была частично поддержана отделом биоинженерии Иллинойского университета, Урбана-Шампейн, Фондом Уоллеса Х. Култера, Beckman Laser Institute Inc., грантом NSF 08-00870 и грантом NIH NS- 063405. Финансирующие агентства не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Миграция клеток играет важную роль в эмбриональном развитии, восстановлении тканей, инвазии рака и атеросклерозе [1]. Это высокоинтегрированный процесс, модулируемый множеством сигнальных путей, состоящий из расширения цитоскелета и образования фокальных комплексов спереди, а также разборки фокальной адгезии и сокращения цитоскелета сзади [1].Семейство малых Rho GTPases играет ключевую роль в регуляции актинового цитоскелета и, следовательно, миграции [1] — [3]. Эти GTPases функционируют как молекулярные переключатели в клетке, чередуя активные GTP-связанные и неактивные GDP-связанные состояния, опосредованные факторами обмена гуаниновых нуклеотидов (GEFs) и белками, активирующими GTPase (GAPs), соответственно [1] — [4]. Среди известных представителей малых Rho GTPases, таких как RhoA, Rac1 и Cdc42 [2], [3], RhoA, как сообщается, опосредует сборку сократительных актомиозиновых филаментов в задней части мигрирующих клеток через один из его нижестоящих эффекторов, ROCK [3] — [5]. Следовательно, было высказано предположение, что активность RhoA может концентрироваться в хвосте мигрирующих клеток [3]. Однако при использовании биосенсоров, основанных на флуоресцентном резонансном переносе энергии (FRET) [6], недавно было обнаружено удивительно высокая активность RhoA, которая присутствует не только в хвосте, но также и в передней части мигрирующих клеток [7], [8]. Эти результаты предполагают, что RhoA может выполнять разные функции в разных субклеточных местоположениях.

FRET — это явление квантовой механики. Когда два флуоресцентных белка (FP), донор и акцептор, находятся рядом с благоприятной ориентацией, возбуждение донорного FP может вызвать излучение от акцептора [9].FRET позволил разработать множество биосенсоров, способных обнаруживать молекулярную активность или белок-белковые взаимодействия в живых клетках [10], [11]. Два биосенсора RhoA на основе FRET были разработаны для визуализации пространственно-временной динамики активности RhoA в живых клетках [7], [12]. Группа Мацуда разработала биосенсор RhoA (Raichu-RhoA), который содержит RhoA (аминокислота 1–189), гибкий линкер и RhoA-связывающий домен (RBD) из его молекулы субстрата PKN, соединенный между голубым и желтым флуоресцентным светом. белок (CFP и YFP) [12].Активация RhoA может вызывать внутримолекулярное связывание между RhoA и доменом RBD в биосенсоре. Результирующее конформационное изменение может приблизить CFP и YFP и усилить сигналы FRET. Биосенсор Raichu-RhoA позволяет отслеживать активность RhoA во время деления клеток, поляризации и обмена фокальной адгезии в различных клетках [8], [12] — [15]. Другой биосенсор FRET RhoA был независимо разработан, содержащий последовательно полноразмерный RhoA, CFP, гибкий линкер, YFP и домен RBD ротекина [7].Этот биосенсор также успешно применялся для изучения различных клеточных функций, включая миграцию и полярность во время хемотаксиса [7], [16], [17].

Хотя разработка биосенсоров FRET значительно расширила наши знания о передаче сигналов в живых клетках, огромное количество данных визуализации, производимых этими биосенсорами, требует автоматических, интеллектуальных и объективных инструментов анализа изображений, позволяющих точную и эффективную интерпретацию биологической информации [ 18]. В частности, очень необходимы эффективные алгоритмы для отслеживания движения ячеек и учета различий в форме и геометрии отдельных ячеек.

Регистрация изображений широко применяется в технике и науке для автоматического отслеживания движущихся объектов во времени и для нахождения пиксельного соответствия между двумя изображениями похожих объектов [19], [20]. При анализе изображений живых клеток этот метод использовался для выравнивания, посредством простого переноса и вращения, флуоресцентных изображений на разных длинах волн [21] — [23] и изображений ядра в разные моменты времени одной и той же клетки [24]. Его также применяли для отслеживания флуоресцентных частиц внутри клеток [25].Более сложные методы регистрации изображений также применялись для анализа экспрессии генов in situ в мозге мышей [20]. Другие методы количественной оценки были разработаны для изучения распределения белка и полярности молекулярной активности путем разделения всей клетки на небольшие клинья в полярно-скоординированной системе [23], [26] — [28], чтобы изучить подвижность и энергию одиночных сперматозоидов путем отслеживания и улавливания [29], [30] или для извлечения данных о трехмерной анатомии сосудов [31]. Тем не менее, автоматическая регистрация движущихся клеток изображения целой клетки с помощью пиксельного отслеживания по-прежнему остро нуждается в высоком разрешении и эффективном количественном определении молекулярных сигналов в пространстве и времени.

В этой статье мы разработали автоматизированные методы анализа изображений для отслеживания движения отдельных клеток и количественной оценки сигналов FRET в субклеточных регионах с использованием биосенсора RhoA от доктора Мацуда [12]. Пространственно-временные паттерны активации RhoA были проанализированы в мигрирующих и неподвижных клетках HeLa в ответ на стимуляцию фактором роста. Наши результаты показывают, что глобальная активность RhoA в мигрирующих клетках подавляется в ответ на стимуляцию факторами роста в меньшей степени, чем в стационарных клетках.Активность RhoA была более сконцентрирована в противоположном направлении миграции в мигрирующих клетках, но не проявляла предпочтения в стационарных клетках.

Материалы и методы

Клеточные линии и культура

Клетки

HeLa (ATCC, Манассас, Вирджиния) культивировали в увлажненном 95% -ном воздухе, 5% -ном CO. ₂ инкубаторе при 37 ° C. Культуральная среда представляла собой среду Игла, модифицированную Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1 ед. / Мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 1 мМ пирувата натрия.Реагенты для клеточных культур были получены от Invitrogen (Сан-Диего, Калифорния).

Переходная трансфекция и микроскопическая визуализация

Поскольку биосенсор Raichu-RhoA может быть легко трансфицирован и хорошо охарактеризован для клеток HeLa, мы использовали этот биосенсор для визуализации динамики активности RhoA в клетках HeLa на стекле, покрытом фибронектином [12]. Биосенсор Raichu-RhoA трансфицировали в HeLa с помощью липофектамина (Invitrogen) [12] перед голоданием с 0,5% FBS в течение 36–48 часов.Затем клетки суспендировали в трипсин-ЭДТА и высевали на покрытые фибронектином чашки со стеклянным дном на 3-6 часов перед стимуляцией EGF (50 нг / мл). Во время визуализации клетки хранили в CO ₂ -независимой среде без сыворотки (Invitrogen) при 37 ° C. Объективный фокус был нацелен вблизи базальной стороны клетки. Изображения были получены с помощью аксиовертного инвертированного микроскопа Zeiss с фильтром возбуждения 420DF20, дихроичным зеркалом 450DRLP, двумя фильтрами излучения, управляемыми устройством смены фильтров (480DF30 для CFP и 535DF25 для YFP) и охлаждаемой камерой устройства с зарядовой связью (Cascade 512B; Фотометрия).Интенсивность возбуждающего света контролировалась регулируемыми фильтрами нейтральной плотности для обеспечения минимального фотообесцвечивания во время визуализации. Из изображений интенсивности флуоресценции CFP и YFP вычитали фон. Изображения отношения FRET были вычислены путем вычисления пиксельного отношения CFP / YFP для представления активности RhoA в пространстве и времени с использованием программного обеспечения MetaFluor 6.2 (Universal Imaging) или наших индивидуальных программ, разработанных в MATLAB (MathWorks).

Регистрация изображения

Чтобы автоматически регистрировать покадровые изображения движущейся клетки, мы отображали эти изображения клеток на единичный диск, который служил эталонным изображением как для регистрации последовательности покадровых изображений одной и той же клетки, так и для сравнения между ними. разные клетки различной формы.Чтобы отобразить ячейку на единичный диск, потребовалось четыре шага. Сначала с помощью сегментации определяли тело клетки. Во-вторых, контрольные точки на ячейке были вычислены с помощью триангуляции Делоне выпуклой оболочки тела ячейки. В-третьих, контрольные точки были сопоставлены с эталонным изображением (единичным диском) путем вычисления относительного положения точек в выпуклой оболочке. Наконец, ячейки были отображены в единичный диск с помощью кусочно-линейного преобразования [32], определяемого контрольными точками и триангуляцией Делоне (рис. 1).

Рис. 1. Диаграммы, изображающие алгоритм отслеживания региона.

(A) Центроид ячейки ( C ), контрольная точка ( P ) и граница пересечения в выпуклой оболочке ( E , на левом изображении) использовались для вычисления относительного расстояния и ориентация вектора, указывающего от центроида до контрольной точки. ( r , θ ) — полярные координаты точки на единичном диске ( P ‘), соответствующей контрольной точке ( P ) в изображении ячейки (правое изображение).(B) Процесс регистрации показан слева направо. Сначала ячейка разбивается на треугольную сетку внутри ее границы. Во-вторых, сетка была сопоставлена с единичным кругом путем вычисления относительного расстояния и ориентации векторов, указывающих от центроида к узлам сетки (или контрольным точкам). Наконец, контрольные точки и изображение ячейки были отображены на единичный диск с помощью кусочно-линейной интерполяции внутри треугольной сетки. (C) Верхние панели показывают изображения одной клетки, подвергающейся расширению или перемещению, с выбранной областью интереса в первом кадре.На нижних панелях показаны единичные диски, преобразованные из ячейки в разные моменты времени. Граница преобразованной области интереса в первом кадре используется для отслеживания и количественной оценки сигналов из одной и той же области на этих различных единичных дисках.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g001

Метод Оцу [33] был использован для вычисления порога интенсивности для сегментации тела клетки, поскольку флуоресцентные изображения, записанные с помощью биосенсора RhoA, были яркий и легко отделяемый от фона.Список узлов, очерчивающих контур клетки, был создан на основе идентифицированного тела клетки. Таким образом, внутри контура было создано изображение маски, чтобы представить форму ячейки. Изображения, собранные из канала YFP, использовались для обнаружения края ячейки и маски, поскольку они были ярче, чем изображения из канала CFP.

Чтобы зафиксировать форму ячейки единичным диском без неоднозначности, требуется, чтобы форма ячейки была выпуклой. Поэтому выпуклая оболочка, описывающая изображение маски ячейки, была вычислена [34] и использована в качестве границы для вычисления триангуляции Делоне [35].Затем узлы триангуляции использовались в качестве контрольных точек для изображения ячейки. Для каждой контрольной точки на изображении ячейки соответствующая контрольная точка в единичном диске была рассчитана на основе ее относительного положения в выпуклой оболочке. Вкратце, центроид ячейки () был сопоставлен с центром единичного диска () (рис. 1А). Для любой другой контрольной точки (), соответствующая точка на единичном диске, была вычислена на основе относительного положения точки между центроидом и краем выпуклой оболочки.Предположим, есть полярные координаты () с центром в центроиде; и луч от до пересекает край выпуклой оболочки в точке. Тогда полярные координаты соответствующей точки () в единичном круге задаются выражением () с центром в, где представляет относительное расстояние от до, т.е. (рис. 1A – B). И наоборот, любая точка на единичном диске может быть отображена обратно в разные ячейки или в одну и ту же ячейку с разными формами в разные моменты времени.

Выпуклая оболочка всей ячейки отображалась на единичный круг кусочно-линейным преобразованием [32].Внутри каждого треугольника в триангуляции Делоне преобразование является линейным и однозначно определяется тремя контрольными точками, которые являются узлами треугольника (рисунок 1B). Преобразование также является непрерывным на краях, общих для двух треугольников.

Отслеживание областей интереса (ROI)

Чтобы отслеживать интересующие области, покадровые изображения одной клетки сначала преобразовывались в серию единичных дисков. Затем пользователь выбрал и определил одну или несколько областей интереса на первом изображении ячейки.После этого была сгенерирована маска для области интереса и сопоставлена с первым единичным диском с помощью нашего метода регистрации изображений. Для отслеживания среднего сигнала FRET в этой области предполагалось, что маска области интереса на единичном диске остается в том же месте во времени (рис. 1C). Таким образом, одна и та же маска может быть применена ко всем единичным изображениям диска для отслеживания и расчета временного хода среднего отношения FRET в выбранной области (ах), которое было вычислено путем взятия отношения общей интенсивности CFP и YFP в пределах области. (s) в ячейке (рисунок 1C).Предположение о постоянных областях интереса в дисках эталонных единиц является точным, если клетки перемещаются только в плоскости визуализации или сжимаются / расширяются в радиальных направлениях, идущих от центроида. Ожидается, что клетки не будут вращаться вокруг своих центроидов в ходе эксперимента. Эти предположения являются разумными для клеток с медленной миграцией в пределах временного окна наших экспериментов и согласуются с моделью градиентного радиального расширения (GRE) [36], где ожидается, что клетки будут вытягивать или втягивать свои ламеллиподии локально перпендикулярно краю клетки и вдоль актиновые волокна.

Области интереса на эталонном единичном диске были сопоставлены с исходными изображениями ячеек, чтобы визуально подтвердить, что они действительно могут отслеживать фактическую область в мигрирующих ячейках (рис. 1С). Для повышения эффективности вычислений только узлы, очерчивающие ROI на единичном диске, но не всю маску, были преобразованы обратно в изображения ячеек.

Кластерный анализ

Чтобы изучить геометрические особенности субклеточных регионов со сходными уровнями активности RhoA, пиксели изображения клетки были классифицированы и разделены на шесть кластеров в соответствии со значениями их отношения RhoA FRET.Функция MATLAB kmeans использовалась для классификации пикселей в различные кластеры, минимизируя внутрикластерные вариации значений FRET [37], [38]. В результате каждый кластер содержал пиксели с одинаковыми значениями отношения FRET.

Программы MATLAB, реализующие эти функции, можно получить, написав соответствующему автору этой статьи.

Результаты

Регистрация изображения

В ходе экспериментов наблюдались два класса клеток HeLa со значительно различающимися паттернами миграции: мигрирующие и стационарные.Чтобы определить, является ли клетка HeLa мигрирующей или неподвижной, местоположение ее центроида отслеживалось во времени. Наибольшее расстояние, пройденное центроидом от исходного положения, было разделено на сумму расстояний, пройденных на каждом временном шаге в течение примерно 60 минут в каждом эксперименте. При соотношении больше или равном 0,5 клетка считалась мигрирующей. В противном случае ячейка считалась стационарной. Результаты подтвердили, что четко существует два класса клеток HeLa с соотношением расстояний, равным 0.71 и 0,1867 (таблица 1). Направление миграции каждой мигрирующей клетки можно определить по траектории ее центроида путем линейной аппроксимации.

С помощью нашего метода регистрации изображений, внутриклеточная активность RhoA при стимуляции фактором роста может быть визуализирована в рамках единого кадра эталонного изображения (рис. 2). Активность RhoA была высокой как на переднем, так и на заднем крае мигрирующих клеток (Рисунки 2A – 2B). Это подтвердило, что RhoA вносит вклад в удлинение актиновых филаментов и взъерошивание мембран на фронте клетки посредством mDia, тогда как регулирует сократимость актомиозина в задней части клетки [2].Как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках можно четко наблюдать пространственные паттерны двух концентрических кольцеобразных субклеточных структур с высокой активностью RhoA (Figure 2 and Movie S1). Внешнее кольцо с высокой активностью RhoA может отражать возникающую и динамическую активацию интегрина на активности RhoA [39]. Высокая активность RhoA во внутреннем кольце может указывать на относительно высокий стресс, возникающий в конвергентной зоне, где ретроградный поток актина ламеллы встречается с антероградным потоком актина тела клетки [40].Несмотря на эти отличительные субклеточные особенности, общая активность RhoA как мигрирующих, так и немигрирующих клеток HeLa снижалась после стимуляции EGF (Рисунок 2 и Movie S1). Похоже, что после стимуляции EGF активность RhoA оставалась относительно стабильной в задней части мигрирующих, но не стационарных клеток (рис. 2B и Movie S1).

Рис. 2. Изображения FRET и их преобразованные карты на единичных дисках биосенсора Raichu-RhoA (Venus / ECFP) в мигрирующих и неподвижных клетках.

Панель (A) показывает последовательность покадровых изображений FRET для репрезентативной мигрирующей клетки HeLa. Белая стрелка указывает направление миграции. Панель (B) показывает изображения FRET мигрирующей клетки в (A), преобразованные в единичный диск. Пространственно-временная динамика изображений FRET движущейся клетки HeLa также показана в фильме S1. Панель (C) показывает последовательность покадровых изображений FRET для репрезентативной стационарной клетки HeLa. Панель (D) показывает изображения FRET неподвижной ячейки в (B), преобразованные в единичный диск.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g002

Отслеживание областей интересов

Для отслеживания и количественной оценки локальной активности RhoA в субклеточных регионах в клетках HeLa было выбрано четыре ROI как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках. Четыре области интереса в мигрирующих ячейках охватывают переднюю, заднюю и две стороны ячейки (рис. 3A и ролик S2). Поскольку область интереса может выходить за пределы тела ячейки (рис. 3A, область 1), пороговое значение изображения YFP ячейки использовалось для оценки и вычисления сигнала FRET в части области интереса внутри тела ячейки.Таким образом, средние отношения FRET в пределах каждой области интереса мигрирующих клеток в разные моменты времени были рассчитаны для мониторинга динамической активности RhoA в субклеточных местах (рис. 3B). Оказалось, что активность RhoA во всех четырех регионах сразу упала и немного восстановилась после стимуляции EGF. Затем местная активность RhoA непрерывно снижалась в регионах на передовой и с обеих сторон. Однако в области около заднего края мигрирующей клетки активность RhoA оставалась относительно постоянной без значительного подавления после стимуляции EGF (рис. 3В).Это характерная особенность для различных проанализированных мигрирующих клеток. В результате разница между активностью областей интереса рядом с передней и задней частью ячейки показала значительное увеличение для мигрирующих ячеек. Это открытие подтверждает предыдущее исследование, что высокая активность RhoA важна в обеспечении сокращения хвоста мигрирующих клеток [2].

Рисунок 3. Отслеживание и анализ активности RhoA в различных областях интереса мигрирующей клетки HeLa.

(A) Слева: в первом кадре были выбраны четыре области интереса для мониторинга активности RhoA на передней, задней и двух сторонах мигрирующей ячейки.Справа: вычисленные контуры и местоположения областей интереса в ячейке в разные моменты времени на основе нашего алгоритма отслеживания. Покадровые изображения автоматически отслеживаемых областей интереса также показаны в фильме S2. (B) Временные зависимости соотношений FRET биосенсора Raichu-RhoA, усредненные по четырем областям интереса, показанным на (A).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g003

В стационарных ячейках, поскольку ячейки не двигались значительно, позиции ROI оставались относительно неизменными во времени (рис. 4A).Активность RhoA во всех четырех регионах сразу упала и немного восстановилась, прежде чем продолжить снижение после стимуляции EGF. В отличие от субклеточных различий активности RhoA, наблюдаемых в мигрирующих клетках, активность RhoA во всех четырех областях интереса стационарных клеток, по-видимому, снижалась с аналогичной кинетикой при стимуляции EGF (фиг. 4).

Рис. 4. Отслеживание и анализ активности RhoA в различных областях интереса стационарной клетки HeLa.

(A) Слева: в первом кадре были выбраны четыре области интереса для мониторинга активности RhoA на передней, задней и двух сторонах стационарной ячейки.Справа: вычисленные контуры и местоположения областей интереса в ячейке в разные моменты времени на основе нашего алгоритма отслеживания. (B) Временные зависимости соотношений FRET биосенсора Raichu-RhoA, усредненные по четырем областям интереса, показанным на (A).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g004

Из-за относительно стабильной активности RhoA в хвосте мигрирующих клеток при стимуляции EGF ожидалось, что глобальная активность RhoA в мигрирующих клетках будет снижаться медленнее. чем у стационарных ячеек.Следовательно, мы количественно оценили глобальную активность биосенсора RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках, взяв среднее значение активности RhoA во всех четырех областях интереса и нормализовав в соответствии с их отношениями до EGF. Результаты подтвердили, что активность RhoA снижалась как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках после EGF, с более медленной скоростью в мигрирующих клетках, чем в неподвижных клетках (фиг. 5). Разница между нормализованными соотношениями биосенсора RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках стала статистически значимой через 13–26 минут после стимуляции EGF (рис. 5), что соответствует времени, когда активность RhoA в хвосте мигрирующих клеток начала показывать разницу. из других субклеточных регионов (~ 25 минут после EGF на рисунке 3B).Эта разница между мигрирующими и неподвижными клетками продолжала увеличиваться во времени после стимуляции EGF (рис. 5). Эти результаты показывают, что активность RhoA в мигрирующих клетках при стимуляции EGF регулируется по-разному, по сравнению с активностью в неподвижных клетках, возможно, из-за относительно высокой активности RhoA в задней части мигрирующих клеток после стимуляции EGF.

Рисунок 5. Глобальная активность RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках HeLa в разные моменты времени до и после стимуляции EGF.

Активность RhoA, усредненная по четырем областям интереса, охватывающим все тело клетки, была использована для представления глобальной активности RhoA. Планки погрешностей представляют стандартную ошибку, а звездочками отмечены моменты времени, когда средние активности RhoA значительно различались (t-тест, p <0,05) между мигрирующими и неподвижными клетками.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g005

Кластерный анализ

Мы дополнительно изучили геометрические особенности субклеточных областей с относительно высокой активностью RhoA после стимуляции EGF.Внутриклеточные пиксели изображения FRET были разделены на шесть кластеров в соответствии с их значениями отношения FRET. Как показано на рисунке 6A, пиксели изображения были закодированы по цвету в зависимости от кластера, которому они принадлежат, в порядке от синего к красному в соответствии со средним соотношением RhoA FRET в каждом кластере в диапазоне от низкого до высокого. Были отобраны три верхних кластера с наивысшим соотношением FRET и проведен мониторинг для изучения распределения высокой активности RhoA и их влияния на поведение клеток, например миграция (рисунки 6 и ролик S3).Программа MATLAB была разработана для автоматического выбора и количественной оценки площади этих регионов (рис. 6). Результаты показали, что размер области этих выбранных областей увеличивался со временем после стимуляции EGF, особенно в задней части мигрирующих клеток (рис. 6C). Чтобы количественно проанализировать размер этих областей с высокой активностью RhoA, была установлена полярная система координат с центром в центроиде каждой клетки. Затем ячейка была разделена на 18 угловых клиньев с шагом 20 ° (рис. 6В).Было вычислено количество пикселей во всем секторе,, а также количество пикселей в трех кластерах с высоким RhoA в секторе. Нормализованное количество пикселей в каждом сегменте вычислялось как отношение. Нормализованное количество пикселей в каждом клине наносили на график в зависимости от угла клина, чтобы представить полярность активности RhoA. Как показано на фиг. 6D, эта кривая полярности репрезентативной мигрирующей клетки HeLa в разные моменты времени ясно демонстрирует повышенную пространственную полярность RhoA, инициированную стимуляцией EGF.Пиксели с относительно высокой активностью RhoA, по-видимому, накапливались в области, противоположной направлению миграции, примерно под 220 ° в координатах на Фигуре 6B.

Рисунок 6. Кластерный анализ активности RhoA в репрезентативной мигрирующей клетке.

(A) Шесть субклеточных областей с различной активностью RhoA были вычислены с использованием кластерного анализа K-средних. Эти области имеют цветовую кодировку в соответствии с их активностями RhoA, причем холодные и горячие цвета указывают на низкий и высокий уровни активности RhoA соответственно.Направление миграции указано белой стрелкой. (B) Выбраны и продемонстрированы три области с самыми высокими отношениями RhoA FRET из панели (A). Белые пунктирные линии очерчивают клин в ячейке. Система координат, используемая для полярного анализа, показана в правом нижнем углу. (C) Покадровые изображения, показывающие три кластера с высоким соотношением FRET до и после стимуляции EGF. На вставке выделено положение кластера с самым высоким соотношением FRET, который обычно находится на самом краю ячейки.(D) Ячейка была разделена на 18 клиньев, как показано на панели (B). Количество пикселей в трех кластерах с наивысшим соотношением FRET в каждом секторе было нормализовано путем деления общего количества пикселей сектора. Это нормализованное количество пикселей с высоким FRET на клин отображается в зависимости от угла клина. Динамическое поведение автоматически обнаруженных кластеров также показано в Movie S3.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g006

Аналогичный кластерный анализ был проведен на стационарных ячейках.Репрезентативная стационарная сота с шестью кластерами имеет цветовую кодировку в соответствии с соотношением FRET и изображена на рисунке 7A, причем три самых высоких кластера и их покадровые изображения показаны на рисунках 7B и 7C соответственно. Нормализованное количество пикселей клина под разными углами было определено количественно и нанесено на график в зависимости от угла на рисунке 7D. Результат указывает на отсутствие значительного процесса поляризации при стимуляции EGF в неподвижных клетках.

Усредненные результаты полярности для нескольких мигрирующих клеток были рассчитаны путем выравнивания их направления движения в сторону одного и того же угла.Через 52 минуты после EGF нормализованное количество пикселей с высокой активностью RhoA в каждом угловом клине четко отображало поляризованный узор, при этом большее количество пикселей накапливалось в задней части мигрирующих клеток (рис. 8A). Напротив, распределение областей с более высокой активностью RhoA оказалось более случайным в стационарных клетках (фиг. 8B). Все эти результаты предполагают, что поляризация активности RhoA в клетках HeLa играет важную роль в регулировании миграции клеток и ее направлений.

Рисунок 8.Сравнение субклеточного распределения активности RhoA между неподвижными и мигрирующими клетками после стимуляции EGF.

Нормализованное количество пикселей с высоким FRET в каждом клине нанесено на график в зависимости от угла клина для множественных (A) мигрирующих и (B) неподвижных клеток через 52 минуты после стимуляции EGF. Планки погрешностей представляют собой значения стандартной ошибки. Мигрирующие клетки вращали и выравнивали так, чтобы они имели одинаковое направление миграции. Передняя и задняя стороны направления миграции определялись относительным расположением клиньев по отношению к их соответствующим центроидам.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g008

Обсуждение

Недавнее развитие технологий визуализации живых клеток предоставило множество мощных инструментов и позволило собрать огромное количество данных изображения / фильмов, что требует значительного времени и усилий для анализа и количественной оценки изображений. Однако отсутствуют удобные для пользователя и автоматизированные инструменты анализа изображений с высокой пропускной способностью. Мы разработали алгоритмы и методы анализа изображений, основанные на регистрации изображений, для отслеживания сложного движения мигрирующих клеток.Эти методы применялись для автоматического отслеживания и количественной оценки замедленного соотношения FRET биосенсора Raichu-RhoA в субклеточных областях в живых клетках HeLa, а также для анализа полярности внутриклеточных областей с высокой активностью RhoA. Результаты предполагают, что субклеточное распределение высокой активности RhoA по-разному регулируется в мигрирующих и неподвижных клетках. Эти методы также могут применяться для анализа общих флуоресцентных изображений сигнальной трансдукции в живых клетках и обеспечения автоматизированной, эффективной и объективной количественной оценки большого количества данных визуализации.

Представленные в статье методы анализа изображений полностью автоматизированы. Поскольку ROI автоматически отслеживались в движущихся ячейках, пользователям нужно только определить начальные интересующие области на первом изображении ячейки. Для каждого кадра с четырьмя областями интереса требуется несколько секунд для количественной оценки отношения FRET с помощью персонального компьютера. Автоматизация этого вида анализа имеет решающее значение, потому что на текущем этапе большая часть анализа данных для визуализации FRET в живых клетках выполнялась вручную с контурами ROI, перемещаемыми биологом, если клетка перемещается или меняет форму.Это ручное отслеживание ROI для живых клеток может привести к низкой эффективности, утомительности и неточности. При использовании нашего метода анализа отслеживание в целом очень надежно, если области интереса были выбраны внутри тела ячейки и вдали от края ячейки. Поскольку выпуклая оболочка или контур ячейки, но не фактический край ячейки, были сопоставлены с единичным диском, этот метод стал бы менее точным, если бы область интереса была близка к некоторым краям ячейки, которые меняют свою форму с вогнутой на выпуклую. Дальнейшее совершенствование метода автоматического отслеживания потребует разработки и реализации более сложного алгоритма регистрации изображений.Тем не менее преобразование различных ячеек в единую схему, такую как единичный диск, должно быть полезным и важным для стандартизации и сравнения сигналов от каждой отдельной ячейки.

Применение нового метода кластерного анализа полезно для анализа и количественной оценки субклеточного распределения и полярности активности RhoA. Абсолютное значение активности RhoA не представляло очевидной картины полярности. Однако наблюдалось значительное увеличение количества пикселей с относительно более высокой активностью RhoA в хвосте мигрирующих клеток после стимуляции EGF, о чем свидетельствует количественная оценка с использованием автоматического кластерного анализа (фиг. 6D).Это высококоординированное распределение активности RhoA в космосе, вероятно, может вносить вклад и контролировать направление миграции клеток. Концентрированное накопление высокой активности RhoA в задней части клетки может помочь отделению клеточного хвоста от субстрата во время миграции [41], возможно, за счет активации нижестоящей молекулы ROCK, которая контролирует фосфорилирование киназы легкой цепи миозина (MLCK) и фосфатазы ( MLCP) для регуляции сократимости актомиозина [5]. Ингибированная активность RhoA в направлении миграции клеток может приводить к активации Rac1 [42], небольшой GTPase, контролирующей выпячивание клеток и образование ламеллиподий [43].Таким образом, клетки могут скоординированно перемещаться в направлении, противоположном полярности RhoA.

Сравнение результатов для мигрирующих и неподвижных клеток выявило различные пространственные паттерны активности RhoA в этих двух типах клеток. В отличие от поляризованной активности RhoA в мигрирующих клетках, глобальное подавление активности RhoA в неподвижных клетках при стимуляции EGF может способствовать выпячиванию во всех направлениях без дискриминации, что предотвращает постоянную и направленную миграцию.Глобальное изменение активности RhoA при стимуляции EGF в мигрирующих клетках оказалось менее значительным по сравнению с таковым в стационарных клетках. Это в значительной степени связано с постоянным поддержанием высокой активности RhoA на заднем крае мигрирующих клеток, но не в стационарных клетках. Дальнейшие исследования необходимы для выяснения детального молекулярного механизма, управляющего дифференциальными ответами RhoA стационарных и мигрирующих клеток.

Таким образом, наш метод анализа изображений может позволить использовать высокопроизводительные и автоматизированные средства для количественной оценки и анализа пространственно-временных молекулярных сигналов в живых клетках.Это особенно эффективно при анализе большого количества сигналов от ячеек с изменяющейся формой, например мигрирующие клетки. Мы также продемонстрировали важность этого метода, применив его для количественной оценки динамической активности RhoA на субклеточных уровнях в мигрирующих и неподвижных клетках HeLa. Результаты показали, что EGF индуцирует подавление RhoA как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках HeLa. Однако поляризованное распределение активности RhoA может постоянно наблюдаться только в мигрирующих, но не в неподвижных клетках.

Вспомогательная информация

Фильм S1.

Образы FRET были сопоставлены с диском. Пространственно-временная динамика отношения FRET, представляющего активность RhoA при стимуляции EGF, показана в типичной мигрирующей клетке (слева) и эталонных изображениях, нанесенных на диск (справа). Красный и синий цвета указывают на высокую и низкую активность RhoA соответственно. Было показано, что ячейка перемещается в поле обзора, особенно во время более поздней части видео (слева), в то время как эталонные изображения ячейки оставались в пределах статического единичного диска (справа).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.s001

(9,81 МБ MOV)

Фильм S3.

Геометрические особенности шести кластеров (справа) и трех верхних кластеров (слева) в мигрирующей ячейке показаны во времени. Эти регионы имеют цветовую кодировку в соответствии с их активностями RhoA, причем холодные и горячие цвета представляют регионы с низким и высоким уровнями активности RhoA соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.s003

(10,26 МБ MOV)

Благодарности

Мы благодарим Dr.Мичиюки Мацуда за драгоценные реактивы и конструкции.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JPE SL YW. Проведены эксперименты: JX. Проанализированы данные: JPE SL YW. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: JPE SL. Написал статью: JPE SL YW.

Список литературы

1. Ридли А.Дж., Шварц М.А., Берридж К., Фиртель Р.А., Гинзберг М.Х. и др. (2003) Миграция клеток: интеграция сигналов спереди назад. Science 302: 1704–1709.
2. Jaffe AB, Hall A (2005) Rho GTPases: биохимия и биология. Annu Rev Cell Dev Biol 21: 247–269.
3. Raftopoulou M, Hall A (2004) Миграция клеток: лидируют Rho GTPases. Дев Биол 265: 23–32.
4. Уилер А.П., Ридли А.Дж. (2004) Почему три белка Rho? RhoA, RhoB, RhoC и подвижность клеток. Exp Cell Res 301: 43–49.
5. Риенто К., Ридли А.Дж. (2003) Камни: многофункциональные киназы в поведении клеток.Nat Rev Mol Cell Biol 4: 446–456.
6. Чжан Дж., Кэмпбелл Р. Э., Тинг А. Ю., Цзян Р. Ю. (2002) Создание новых флуоресцентных зондов для клеточной биологии. Nat Rev Mol Cell Biol 3: 906–918.
7. Pertz O, Hodgson L, Klemke RL, Hahn KM (2006) Пространственно-временная динамика активности RhoA в мигрирующих клетках. Nature 440: 1069–1072.
8. Курокава К., Мацуда М. (2005) Локальная активация RhoA как требование для индукции взъерошивания мембраны. Mol Biol Cell 16: 4294–4303.
9. Цзянь Р.Ю. (1998) Зеленый флуоресцентный белок. Анну Рев Биохим 67: 509–544.
10. Ван И, Шайи Джи-Дж, Чиен С. (2008) Флуоресцентные белки, визуализация живых клеток и механобиология: видеть — значит верить. Annu Rev Biomed Eng 10: In Press.
11. Palmer AE, Jin C, Reed JC, Tsien RY (2004) Bcl-2-опосредованные изменения в Ca2 + эндоплазматического ретикулума проанализированы с помощью улучшенного генетически кодируемого флуоресцентного сенсора. Proc Natl Acad Sci U S A 101: 17404–17409.
12. Йошизаки Х, Охба Й, Курокава К., Ито Р. Э., Накамура Т. и др. (2003) Активность ГТФаз семейства Rho во время деления клеток, визуализированная с помощью зондов на основе FRET. J Cell Biol 162: 223–232.
13. Йошизаки Х., Охба Й., Паррини М.К., Дульянинова Н.Г., Бресник А.Р. и др. (2004) Тип-специфическая регуляция активности RhoA во время цитокинеза. J Biol Chem 279: 44756–44762.
14. Nakamura T, Aoki K, Matsuda M (2005) Визуализация FRET в конусах роста нервов выявляет высокий уровень активности RhoA в периферическом домене.Brain Res. Mol. Brain Res. 139: 277–287.
15. Ямана Н., Аракава Ю., Нишино Т., Курокава К., Танджи М. и др. (2006) Путь Rho-mDia1 регулирует клеточную полярность и оборот фокальной адгезии в мигрирующих клетках посредством мобилизации Apc и c-Src. Mol Cell Biol 26: 6844–6858.
16. Эль-Сибай М., Перц О, Панг Х., Ип С.К., Лоренц М. и др. (2008) Опосредованное RhoA / ROCK переключение между Cdc42- и Rac1-зависимым выпячиванием в клетках карциномы MTLn3. Exp Cell Res 314: 1540–1552.
17. Wong K, Pertz O, Hahn K, Bourne H (2006) Поляризация нейтрофилов: пространственно-временная динамика активности RhoA поддерживает механизм самоорганизации. Proc Natl Acad Sci U S A 103: 3639–3644.
18. Ван И, Шайи Джи-Дж, Чиен С. (2008) Флуоресцентные белки, визуализация живых клеток и механобиология: видеть — значит верить. Ежегодный обзор биомедицинской инженерии 10: 1–38.
19. Зитова Б., Флюссер Дж. (2003) Методы регистрации изображений: обзор.Image and Vision Computing 21: 977–1000.
20. Jagalur M, Pal C, Learned-Miller E, Zoeller RT, Kulp D (2007) Анализ экспрессии генов in situ в мозге мыши с регистрацией изображений, выделением признаков и кластеризацией блоков. BMC Bioinformatics 8: Дополнение 10S5.
21. Чемберлен CE, Крайнов В.С., Хан К.М. (2000) Визуализация пространственно-временной динамики активации Rac in vivo с помощью FLAIR. Методы Enzymol 325: 389–400.
22. Ходжсон Л., Налбант П., Шен Ф., Хан К. (2006) Визуализация и коррекция фотообесцвечивания Mero-CBD, датчика эндогенной активации Cdc42.Методы Enzymol 406: 140–156.
23. Шен Ф., Ходжсон Л., Рабинович А., Перц О, Хан К. и др. (2006) Функциональная протеометрия миграции клеток. Цитометрия A 69: 563–572.
24. Rieger B, Molenaar C, Dirks RW, Van Vliet LJ (2004) Выравнивание ядра клетки от меченых белков только для 4D визуализации in vivo. Microsc Res Tech 64: 142–150.
25. Матула П., Матула П., Козубек М., Дворжак В. (2006) Быстрое точечное трехмерное выравнивание живых клеток.IEEE Trans Image Process 15: 2388–2396.
26. Dormann D, Libotte T, Weijer CJ, Bretschneider T (2002) Одновременная количественная оценка подвижности клеток и ассоциации белка с мембраной с использованием активных контуров. Цитоскелет клеточного мотила 52: 221–230.
27. Dubin-Thaler BJ, Giannone G, Dobereiner HG, Sheetz MP (2004) Нанометрический анализ распространения клеток на покрытых матриксом поверхностях выявляет два различных состояния клеток и ШАГИ. Biophys J 86: 1794–1806.
28.Mott RE, Helmke BP (2007) Картирование динамики структурных изменений эндотелиальных клеток, вызванных напряжением сдвига. Am J Physiol Cell Physiol 293: C1616–1626.
29. Shi LZ, Nascimento JM, Berns MW, Botvinick EL (2006) Компьютерное отслеживание одной спермы. Дж. Биомед Опт 11: 054009.
30. Shi LZ, Nascimento JM, Chandsawangbhuwana C, Botvinick EL, Berns MW (2008) Автоматическая система для изучения подвижности и энергетики сперматозоидов. Биомедицинские микроустройства 10: 573–583.
31. Wischgoll T, Choy JS, Ritman EL, Kassab GS (2008) Валидация метода на основе изображений для извлечения коронарной морфометрии. Энн Биомед Энг 36: 356–368.
32. Гоштасби А. (1986) Кусочно-линейные функции отображения для совмещения изображений. Распознавание образов 19: 459–466.
33. Оцу Н. (1979) Метод выбора порога по гистограммам уровней серого. IEEE Transactions по системам, человеку и кибернетике 9: 62–66.
34.Barber CB, Dobkin DP, Huhdanpaa H (1996) Алгоритм quickhull для выпуклых оболочек. Транзакции ACM на математическом программном обеспечении 22: 469–483.
35. Джордж П.Л. (1991) Автоматическое создание сетки: применение к методам конечных элементов. Нью-Йорк: Вили.
36. Ли Дж., Исихара А., Териот Дж., Джейкобсон К. (1993) Принципы передвижения для клеток простой формы. Природа 362: 167–171.
37. Спат Х. (1985) Рассмотрение и анализ кластеров: теория, программы FORTRAN, примеры.Гольдшмидт Дж., Переводчик, редактор. Нью-Йорк: Halsted Press ..
38. Seber GAF (1984) Многомерные наблюдения. Барнетт В., Брэдли Р.А., Хантер Дж. С., Кендалл Д. Г., Миллер Р. Дж. Мл. И др., Редакторы. Нью-Йорк: Wiley ..
39. Vielkind S, Gallagher-Gambarelli M, Gomez M, Hinton HJ, Cantrell DA (2005) Регулирование интегрина с помощью RhoA в тимоцитах. J Immunol 175: 350–357.
40. Salmon WC, Adams MC, Waterman-Storer CM (2002) Двухволновая флуоресцентная спекл-микроскопия выявляет связь микротрубочек и движений актина в мигрирующих клетках.J Cell Biol 158: 31–37.
41. Лауффенбургер Д.А., Хорвиц А.Ф. (1996) Миграция клеток: физически интегрированный молекулярный процесс. Ячейка 84: 359–369.
42. Родригес О.К., Шефер А.В., Mandato CA, Forscher P, Bement WM и др. (2003) Консервативные взаимодействия микротрубочек с актином в движении и морфогенезе клеток. Nat Cell Biol 5: 599–609.
43. Холл A (2005) Rho GTPases и контроль клеточного поведения. Biochem Soc Trans 33: 891–895.

«Лады и шнуры» Черно-белая гитара Натюрморт Фотография Картина на стене без рамы — Современная — Принты и плакаты — Автор: PI Photography Wall Art & Fine Art

Лады и шнуры, Черно-белый натюрморт Фотография Wall Art Prints

About this Black и Белая фотография натюрморта: лады и шнуры — это черно-белый натюрморт с изображением грифа электрогитары, чтобы выделить лады и шнуры.

Название: Лады и шнуры
Фотограф: Мелисса Фаг
Жанр: Абстрактная фотография
Идентификационный номер предмета: ABS-6010

Этот черно-белый настенный натюрморт будет работать с различными темами на протяжении всей вашей жизни. дом, общежитие или офисное помещение.Цвета этого черно-белого натюрморта: черный, белый и серый.
О материале для печати: Наши традиционные фотоотпечатки печатаются на высококачественной фотобумаге с использованием чернил высочайшего качества и покрываются мягким УФ-глянцевым покрытием. Эти типы отпечатков (в зависимости от ухода) имеют продолжительность жизни около 50 лет. Эти настенные принты станут идеальным акцентом на ваших гостиных, спальнях, столовых или офисах, не нарушая при этом денег. Картины на стенах поставляются без рамы и отправляются вам свернутыми в прочную транспортировочную тубу, чтобы снизить риск изгибов и складок.Доступные размеры фотопечати на стене:

11 дюймов x 14 дюймов
16 дюймов x 20 дюймов
20 дюймов x 24 дюйма
20 дюймов x 30 дюймов
24 дюйма x 36 дюймов

Лучшее изображение в рамке
Только сухая тряпка для очистки от пыли
Беречь от прямых солнечных лучей для долговечности

Политика доставки: Наши репродукции на стенах и репродукции изобразительного искусства изготавливаются на заказ. Наши репродукции для украшения стен печатаются и отправляются вам напрямую от нашего партнера по печати. Время обработки этих оттисков составляет 3-4 рабочих дня и отправляется из США.Эти фотопечати отправляются вам завернутыми в прочную транспортировочную тубу, устойчивую к раздавливанию.

Возврат: Супер просто! Никаких хлопот по возврату или обмену. Вы получите 100% возврат денег, если вас что-то не устроит … просто напишите нам.

О художнике: Мелисса Фейг (Melissa Fague) — профессиональный пейзажный и природный фотограф из Беар, штат Делавэр, США. Она любит природу и проводит много времени на открытом воздухе, любуясь и документируя элементы мира. Некоторые из ее любимых предметов для создания своих работ: цветы, берег и сельские пейзажи.Всего за несколько лет ее работы были опубликованы более 4 дюжин раз в различных журналах по пейзажной фотографии, и она выиграла несколько национальных и международных наград за свои фотографии. Недавно работы Мелиссы также были показаны в фильмах «Марта Стюарт», «Люди» и «Лучшие дома и сад».

Прочитать полный рассказ Мелиссы о том, как она стала фотографом природы и пейзажей; а также получить полезные советы по фотографии, чтобы улучшить свои собственные фотографические навыки, посетите наш блог.

У вас еще есть вопросы о работе Мелиссы? Нужен нестандартный размер или материал для печати для вашего проекта украшения? Pi Photography and Fine Art имел удовольствие работать с различными галереями, декораторами, дизайнерами интерьеров, крупными корпорациями, розничными торговцами, гостиницами и домовладельцами с их потребностями в искусстве или отделке стен. Мы хотели бы поработать с вами и над вашим. Если у вас есть вопросы, свяжитесь с нами в любое время, отправив сообщение прямо здесь, на Houzz.

Что нужно знать о ладах Jumbo

Это должно быть очевидно, правда? Чем больше лады, тем больше тон, и это звучит так, как будто мы все хотим от наших гитар.

Однако, как и во многих других случаях с гитарой, правда не всегда так проста. Размер и форма ладов могут повлиять на многие аспекты звучания и ощущений вашей гитары, поэтому стоит взглянуть на картину в целом, прежде чем делать какие-либо быстрые выводы.

В уравнении «толще провод = толще тон» нет ничего нового. С тех пор, как стали доступны гигантские лады, многие великие музыканты — Рори Галлахер, Стиви Рэй Воган, Кенни Уэйн Шеперд — были известны тем, что повторно ласкали свои Fender Stratocasters, в частности, с помощью гигантской проволоки (винтажные Strats, возможно, обеспечивали более драматичный вид и раньше, и после изображения, чем некоторые другие гитары, так как они родились с узкими ладами).

Больше металла в любом фиксированном компоненте обычно означает большую вибрационную связь между струной и деревом, так что, по-видимому, в этой теории что-то есть. Но что еще меняется с размером лада?

Размер и форма ладов могут повлиять на многие аспекты звучания и ощущений вашей гитары, поэтому стоит взглянуть на картину в целом, прежде чем делать какие-либо быстрые выводы.

Хотя большие лады, кажется, дают более округлый тон, возможно с увеличенным сустейном они также дают несколько менее точную ноту, чем более узкие лады — по крайней мере, при рассмотрении «под микроскопом».

Если только он не имеет очень точной формы и не часто одет, широкая корона этого гигантского лада может хоть немного «размыть» вашу ноту, что может даже быть частью звуковой привлекательности для некоторых игроков — например, способ tweed Deluxe выглядит немного более размытым или более волосатым при большинстве настроек громкости, чем blackface Deluxe. Однако имейте в виду, что это явление может работать и против некоторых звуковых целей.

Поскольку они представляют собой более тонкую точку излома на конце шейки струнной длины выступающей длины, более узкие лады винтажного калибра, как правило, более точны в их нотной точности.Благодаря этому вы, как правило, получаете более резкий тон, возможно, с повышенной точностью интонации, плюс в некоторых случаях повышенную четкость обертонов, которые можно было бы услышать как немного более «мерцание».

Если вы думаете, что это все характеристики классического звука Fender, вы будете правы — по крайней мере, пока вы не измените эти винтажные лады на jumbo.

Узкие лады не должны быть слишком сложными для сгибания, если только они не сильно изношены, и они также оставляют немного больше места для пальцев на грифе

Но более узкие лады также использовались на Gibson Les Paul до 1959 года. , поэтому их характеристики применимы и к этим гитарам.Звучит ли ’57 goldtop с PAF тонким или слабым из-за узкой лада?

Маловероятно, в основном потому, что на его тон влияет множество других факторов — древесина корпуса, конструкция грифа, длина звукоряда, звукосниматели — а влияние узких ладов не перевешивает ни один из них. Однако это влияет на общее звучание гитар той эпохи, которое всегда является продуктом множества различных ингредиентов.

Калибр лада может иметь большее влияние на ощущение игры, чем на тон для многих гитаристов.Более широким ладам часто приписывают более плавное и маслянистое ощущение игры, что также облегчает сгибание струн.

Легкость изгиба также повышается за счет более высоких ладов, широких или узких. На узких ладах не должно быть слишком сложно гнуть, если только они не сильно изношены, и они также оставляют немного больше места для пальцев на грифе — особенно на высоких позициях — что может больше подойти некоторым музыкантам.

В конечном счете, если вы в основном играете рок, тяжелый блюз или любой клочок или металл, вы можете предпочесть лады jumbo или medium-jumbo.Однако для кантри, рокабилли, серфинга или олдскульного рок-н-ролла 50-х узкие лады могут быть лучшим выбором.

В любом случае, однако, если ваши лады в хорошем состоянии и ваша гитара настроена правильно, размер этой проволоки сам по себе не должен мешать вам отлично звучать на любой игре.

Фотографии » LADA Xray | Лада Х Рей

LADA XRAY Cross – Цены и комплектации, обзор, фото – Первый Лада Центр, Краснодар.

Lada Xray 2020 — модель в новом кузове Cross

рентгеновских снимков цветов

Instrument X-Ray: основы акустической гитары — Shopify

Рентгеновская фотография

Поиск рентгеновских аппаратов

Безопасность прежде всего

Использование правильной техники

Идеальные объекты для рентгеновской фотографии

Рентгеновские фотографии после обработки

Дополнительная литература:

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Дифференциальная динамика RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках, измеренная с помощью FRET и автоматизированного анализа изображений

Abstract

Введение

Материалы и методы

Клеточные линии и культура

Переходная трансфекция и микроскопическая визуализация

Регистрация изображения

Отслеживание областей интереса (ROI)

Кластерный анализ

Результаты

Регистрация изображения

Отслеживание областей интересов

Кластерный анализ

Обсуждение

Вспомогательная информация

Фильм S1.

Фильм S3.

Благодарности

Вклад авторов

Список литературы

«Лады и шнуры» Черно-белая гитара Натюрморт Фотография Картина на стене без рамы — Современная — Принты и плакаты — Автор: PI Photography Wall Art & Fine Art

Что нужно знать о ладах Jumbo

Добавить комментарий Отменить ответ