Инжектор 2107 лада: Доступ с вашего IP-адреса временно ограничен — Авито

Отзывы владельцев об автомобилях LADA (ВАЗ) 2107 (Лада 2107) на Авто.ру

58 Стоимость обслуживания

48 Надежность

22 Проходимость

11 Дизайн

10 Обзорность

Минусы

108 минусов

34 Качество сборки

33 Комфорт

23 Безопасность

18 Шумоизоляция

Все плюсы и минусы

Пуля

LADA (ВАЗ) 2107 1.6 MT (73 л.с.)

Покупалась машина в июле 2016 года как авто для набора опыта и езды по сельским поселениям. Брал я ее за 55 т.р. в хорошем состоянии, но были свои нюансы типо жуков на кузове, подтеков масла через про

Bebiмагнит

LADA (ВАЗ) 2107 1.6 MT (75 л.с.)

Покупалась эта машинка новой в далёком 2005г. за 130000р. примерно. После 21063 (там мотор 1,3) показалась атомной), да вообще радовала, всё-таки новая машина, всё работало открывалось и закрывалось к

Разбор Авто.ру

10 главных проблем подержанных «Жигулей»

Ездить можно

LADA (ВАЗ) 2107 1.6 MT (75 л.с.)

Взял 2107 карбюраторную 1996 года в 2018 году.

По машине были проблемы — грохотала передняя подвеска, засорен карб (без подсоса не выдает всю мощность), проржавел выпускной коллектор. Ремонт обошелся:

Первая машина

LADA (ВАЗ) 2107 1.6 MT (75 л.с.)

Доброго времени суток уважаемые авторушники! меня зовут Слава,1988 года выпуска…по достижению 18 лет сходил поучится на права, но так ничему там и не научился за исключением теории,затем пошёл в авт

На драге её прозвали «Дикая семёра»!

LADA (ВАЗ) 2107 1.5 MT (72 л.с.)

Автомобиль ВАЗ 2107, 1,5л, карб, 2001 г.в., покупалась моим отцом с нуля, он хотел 2106, но там была подпрыгнутая на автовозе с мятой крышей, а когда увидели, что на семёрках потолок стал шестёрочный

Тест драйв водителя в Жигулях

LADA (ВАЗ) 2107 1.5 MT (72 л.с.)

Тест драйв водителя в Жигулях. Всем добрый день! Семь лет пользую «семерку», и вот мои пять копеек о ней. Досталась она шестилетней с пробегом 60 тыс. км, восстановленной после аварии в морд

ChiMaxVI

Обновлён

31 марта 2015

Первая ласточка

LADA (ВАЗ) 2107 1. 6 MT (75 л.с.)

Произошло всё именно так, летом 2007 года, а именно в августе после получения прав отец решил мне подарить машину и рассчитывать на что-то кроме отечественного автопрома и не приходилось и именно это

Новая машина называется

LADA (ВАЗ) 2107 1.6 MT (75 л.с.)

Пробег 35000км Всем привет! Очень хочется поделиться опытом владения новой отечественной машиной. Раньше у меня были старые иномарки (Опель Омега А Караван, и две Ауди 80). С последней чего-то не п

Великолепная семёрка жигулей!

LADA (ВАЗ) 2107 1.5 MT (72 л.с.)

Автомобиль в нашей семье всегда был общим, потому что иначе на всех просто места для парковки не хватит. На нём езжу я, моя сестра, недавно получившая права, и изредка отец, у него своя рабочая машина

Честный отзыв о ВАЗ 21074 за 3 года.

LADA (ВАЗ) 2107 1.6 MT (74 л.с.)

Так и так всем привет ) Решил и я написать отзыв о своей машине, постараюсь всё вам рассказать, коротко не получится. Отзыв будет состоять из двух частей, первая это как часто ломалась, что ломалось и

Всё о LADA (ВАЗ) 2107

Рейтинг модели — 3. 2 / 5

OZON.ru

Москва

• Покупайте как юрлицо
• Мобильное приложение
• Реферальная программа
• Зарабатывай с Ozon
• Подарочные сертификаты
• Пункты выдачи
• Постаматы
• Помощь
• Бесплатная доставка

Каталог

ЭлектроникаОдеждаОбувьДом и садДетские товарыКрасота и здоровьеБытовая техникаСпорт и отдыхСтроительство и ремонтПродукты питанияАптекаТовары для животныхКнигиТуризм, рыбалка, охотаАвтотоварыМебельХобби и творчествоЮвелирные украшенияАксессуарыВсё для игрКанцелярские товарыТовары для взрослыхАнтиквариат и коллекционированиеЦифровые товарыБытовая химияOzon ExpressМузыка и видеоАвтомобили и мототехникаOzon УслугиЭлектронные сигареты и товары для куренияOzon PremiumOzon GlobalТовары в РассрочкуУцененные товарыOzon CardСтрахование ОСАГОРеферальная программаOzon TravelРегулярная доставкаOzon HealthyДля меняOzon DисконтOzon MerchOzon Бизнес для юрлицOzon КлубOzon LiveMom’s club Везде 0Войти 0Заказы 0Избранное0Корзина

• TOP Fashion
• Premium
• Ozon Express
• Ozon Card
• LIVE
• Акции
• Бренды
• Магазины
• Электроника
• Одежда и обувь
• Детские товары
• Дом и сад
• Услуги
• Ozon Travel
• Dисконт

Такой страницы не существует

Вернуться на главную Зарабатывайте с OzonВаши товары на OzonРеферальная программаУстановите постамат Ozon BoxОткройте пункт выдачи OzonСтать Поставщиком OzonЧто продавать на OzonEcommerce Online SchoolSelling on OzonО компанииОб Ozon / About OzonВакансииКонтакты для прессыРеквизитыАрт-проект Ozon BallonБренд OzonГорячая линия комплаенсПомощьКак сделать заказДоставкаОплатаКонтактыБезопасностьЮридическим лицамДобавить компанию в Ozon БизнесМои компанииКэшбэк 5% с Ozon. СчётПодарочные сертификаты © 1998 – 2021 ООО «Интернет Решения». Все права защищены. OzonИнтернет-магазинOzon ВакансииРабота в OzonOZON TravelАвиабилетыOzon EducationОбразовательные проектыLITRES.ruЭлектронные книги

Какой аккумулятор устанавливается на ВАЗ 2107

Бортовая электросеть «Семерки» питается от аккумуляторной батареи и генератора. Включение автомобиля выполняет аккумулятор на ВАЗ 2107, он также питает других потребителей электричества, когда двигатель заглушен. Генератор обеспечивает электропитание после включения двигателя. Он может работать десятки лет. Срок службы энергонакопителя ограниченный.

Аккумулятор питает электричеством стартер, чтобы он раскрутил коленчатый вал, и подает напряжения на систему зажигания для включения двигателя. Дополнительными потребителями электричества являются аудиосистема, освещение, система отопления. Энергонакопитель помогает питать электричеством автомобиль в случае повышенной нагрузки на бортовую электросеть, когда генератор не справляется со своей функцией.

Особенности аккумулятора для разных моделей «Семерки»

ВАЗ 2107 – седан с четырьмя дверями. Его начали выпускать с 1982 года на основании Лады 2105 на заводе АвтоВАЗ. Основные узлы и внутренняя конструкция ВАЗ 2107 не поменялись. Отличается «Семерка» от ВАЗ 2105 отделкой салона, пластмассовыми бамперами, хромированной решеткой радиатора, установкой указателя давления масла, тахометра, изменением показателей спидометра до 180 км/ч, формой капота. В 2001 году появилась новая модель ВАЗ 2107 – 21074 с 1,7 литровым двигателем мощностью 77 л. с.

Емкость аккумулятора зависит от типа и объема двигателя. Начиная с 1982 года, «Семерка» обновлялась новыми типами двигателей.

Модель	Двигатель	Объем мотора, куб. см	Мощность, л. с.	Механическая коробка передач
21072	бензиновый	1294	64	4-ступенчатая
21079	бензиновый	1308	135	4-ступенчатая
2107	бензиновый	1451	68	4-ступенчатая
2107	бензиновый	1451	72	4-ступенчатая
21073	бензиновый	1450	71	5-ступенчатая
2107	бензиновый	1568	73	5-ступенчатая
21074	бензиновый	1568	75	5-ступенчатая
21073	бензиновый	1690	80	5-ступенчатая

На автомобиль «Семерку» устанавливается батарея 6СТ-55 согласно государственному стандарту.

Она размещается возле двигателя, спереди автомобиля справа. Энергонакопитель отличается такими особенностями:

• номинальное напряжение энергонакопителя, 12 В;
• номинальная емкость, когда режим разряда продолжается 20 часов и температура электролита составляет +25 ⁰С вначале разряда, 55Аh;
• сила тока заряда, 5,5А.

Энергонакопитель – это 6 батарей с напряжением 2 В, которые последовательно соединены. Батареи размещаются в изолированных частях энергонакопителя, заполненных электролитом. Отсеки энергонакопителя оснащены отверстиями и закрываются крышками. На краях корпуса размещены положительный и отрицательный выводы, чтобы подсоединить электропроводку «семерки».

Как выбрать энергонакопитель

Современный рынок наполнен продукцией, обеспечивающей снабжение автомашины энергией. Чтобы сориентироваться какой аккумулятор на ВАЗ 2107

подобрать, учитывайте следующие характеристики:

• емкость батареи;
• тип полярности;
• максимальный ток для включения стартера;
• характеристики напряжения и тока холодной прокрутки;
• размеры батареи;
• токовые выводы;
• особенности обслуживания энергонакопителя.

Батареи бывают обслуживаемые. Они применяются нечасто. Их эксплуатация предусматривает регулярное пополнение электролита. Большая часть «семерок» комплектуются необслуживаемыми батареями, их корпус полностью герметизирован. Дополнительного обслуживания они не требуют, что облегчает жизнь автовладельцев.

Емкость батареи показывает номинальный уровень тока за час. Отдельной характеристикою является максимальный ток, который способна выдать батарея. Максимальный ток влияет на способность батареи включать двигатель, когда минусовая температура воздуха.

Для ВАЗ 2107 рекомендуется батарея емкостью в 55 Ач. Энергонакопителя емкостью 50 Аh или 60 Аh на «Семерке» также отлично работает.

Автомобили «Семерки» производились с двигателями на разных системах питания – карбюраторной и инжекторной. Интересно, что аккумулятор на ВАЗ 2107 карбюратор требует большей емкости энергонакопителя, чем инжектор. Объяснение этому простое – аккумулятор на ВАЗ 2107 инжектор более легко включает двигатель, так как стартер использует меньше электроэнергии. Для питания инжекторного двигателя подходят батареи емкостью 50-55 Ач, для карбюраторной – 60 Ач.

Аккумуляторы для автомобилей ВАЗ 2107 имеют прямую полярность. Стандартные габариты энергонакопителя автомобиля «Семерки»: длина 242 мм, ширина 175 мм, высота 190 мм.

Быстрая разрядка аккумуляторной батареи

Одной из проблем «Семерки» является разряд аккумулятора до такого уровня, что он не заводит стартер. Этому способствует недостаточно заряженная аккумуляторная батарея или большая потеря тока. Это может говорить о плохом контакте на регуляторе реле.

Когда на приборе горит аккумулятор на ВАЗ 2107, значит батарея не заряжена. Индикатор, показывающий заряд батареи, должен гаснуть при включении двигателя. Если горит лампочка аккумулятора на ВАЗ 2107, и батарея при этом разряжается, то причины могут быть следующие:

• неисправности на регуляторе реле;
• изношенность или зависание щеток в щеткодержателе;
• не работает один из диодов в генераторе.

Хороший аккумулятор на машину ВАЗ 2107 служит от 5 до 7 лет. Так как аккумуляторы большинства «Семерок» быстро выходят из рабочего состояния, вашего внимания заслуживает модель аккумуляторной батареи – Autopower. Она считается лучшей по качеству, кроме того гарантийный период 3 года обеспечивает чешский Производитель AUTOPOWER.

Характеристики	Батарея для автомобиля Autopower A60-L2X 12В 60Ач 540А	Батарея для автомобиля Berga BB-H5R 60 12В 60Ач 540А	Батарея для автомобиля АКОМ 6СТ-55.1 пп 12В 55Ач 460А
Производитель	AUTOPOWER	Berga	АКОМ
Государство	Чехия	Германия	Россия
Гарантийный период от фирмы-производителя	3 года до 100 Ач / 1 год свыше 100 Ач	4 года до 100 Ач / 1 год свыше 100 Ач	3 года до 100 Ач / 1 год свыше 100 Ач
Обслуживание	-	не обслуживается	не обслуживается
Емкость	60 Аh	60 Аh	55 Аh
Тип полярности	Прямая	Прямая	Прямая
Ток холодной прокрутки ( -18):	540 А	540 А	460 А
Длина, ширина, высота:	242мм*175мм*190мм	242мм*175мм*190мм	242мм*175мм*190мм
Токовый вывод	На клеммы	На клеммы	Клеммы

Период службы батареи Berga увеличен производителем до 10 лет, гарантийный срок продолжается 48 месяцев. При заказе модели Berga и обмена старого устройства в подарок вы получаете бесплатный монтаж аккумулятора на автомобиль. Наш интернет-магазин рекомендует оснащать автомобили ваз 2107 аккумуляторами Berga или Autopower. Они являются достойной альтернативой заводской батареи.

Наш интернет-магазин предлагает бюджетные варианты батарей на ВАЗ 2107.

Характеристики	Аккумулятор для автомобиля Тюмень Standard 6СТ-60 L+ 12В 60Ач 520А	Батарея для автомобиля SMART ELEMENT 6СТ-60.1 VL3 12В 60Ач 480А
Производитель	Тюмень	SMART ELEMENT
Государство	Российская федерация	Российская федерация
Гарантийный период от фирмы-производителя	24 месяца до 100 Ач / 12 месяцев свыше 100 Ач	6 месяцев
Возможность обслуживания	-	не обслуживается
Емкость	60 Аh	60 Аh
Тип полярности	Прямая	Прямая
Ток холодной прокрутки (при -18):	520А	480А
Длина, ширина,высота:	242мм*175мм*190мм	242мм*175мм*190мм
Токовый вывод	На клеммы	На клеммы

Из двух представленных моделей аккумуляторных батарей лучшей является Smart Element так, как он потребляет меньше электроэнергии, чтобы завести стартер автомобиля. Срок службы аккумулятора выше в среднем на 2-3 года.

На сайте нашей компании предложена на аккумулятор на ВАЗ 2107 цена доступная для любого автовладельца, а также высокие стандарты качества продукции. На все модели есть официальные гарантии, и на каждом указаны необходимые реквизиты фирмы-производителя.

На стоимость батареи влияет ее качество, емкость и другие характеристики. Приобретайте более дорогую модель аккумуляторной батареи и будете уверены, что ближайшие 7-10 лет проблем с включением автомобиля не будет. Возможно сэкономить и купить аккумулятор на ВАЗ 2107 дешевле. Он также будет качественный и с гарантией от производителя.

Видео установки аккумулятора на ВАЗ 2107

 

Сохраните эту статью в популярных соц. сетях:

 

лучшее масло, какой ресурс, количество клапанов, мощность, объем, вес

Двигатель 3GR-FE от Toyota — это 6-цилиндровый мотор рабочим объемом 3,0 л (2994 куб. см). Был разработан на замену серии 2JZ и выпускается в Китае с 2003 года. Оснащается системой изменения фаз газораспределения Dual VVT-i. Диаметр цилиндра составляет 87,5 мм, а ход поршня аналогичен двигателю 2GR и равен 83 мм. Степень сжатия составляет 10:1. Мощность двигателя составляет 228 л.с. при 6400 оборотов в минуту, а крутящий момент 300 Нм.

Технические характеристики

Производство	Kamigo Plant
Марка двигателя	3GR
Годы выпуска	2003-н.в.
Материал блока цилиндров	алюминий
Система питания	инжектор
Тип	V-образный
Количество цилиндров	6
Клапанов на цилиндр	4
Ход поршня, мм	83
Диаметр цилиндра, мм	87.5
Степень сжатия	10.5 (3GR-FE) 11.5 (3GR-FSE)
Объем двигателя, куб. см	2994
Мощность двигателя, л.с./об.мин	228/6400 256/6200
Крутящий момент, Нм/об.мин	300/4800 314/3600
Топливо	95
Экологические нормы	Евро 4-5
Вес двигателя, кг	—
Расход топлива, л/100 км (для Lexus GS300) — город — трасса — смешан.	14.0 7.0 9.5
Расход масла, гр./1000 км	до 1000
Масло в двигатель	5W-20 / 5W-30 / 5W-40 / 10W-30
Сколько масла в двигателе, л	6.3
Замена масла проводится, км	7000-10000
Рабочая температура двигателя, град.	—
Ресурс двигателя, тыс. км — по данным завода — на практике	— 300+
КПП, -6АКПП -6АКПП	Toyota A760H Toyota A960E

Распространенные неисправности и эксплуатация

1. Маслоутечка. Причина – несовершенство конструкции металло-резинового патрубка смазочной системы в VVTi. Устранить недостаток можно, только заменив его на более современную модель из цельного металла выпуска не ранее 2010 года.
2. Трескотня при старте мотора. Виноваты муфты VVTi. На ресурс это не влияет, но, если звук мешает, их нужно просто заменить.
3. Понижение числа оборотов на холостом ходу. Нужно почистить дроссель-задвижку. Лучше делать это каждые 50 тыс. км пройденного пути.

Еще одна особенность мотора – протечка помпы. Ее нужно менять каждые 70 тыс. км пробега. Также часто портятся катушки системы зажигания. После 200 тыс. км пути нужно менять ГРМ-цепь. Спецификой также является образование зацепов в 5 цилиндре из-за изначально плохой системы охлаждения и частого перегрева агрегата. Одним из симптомов этого является повышение расхода масла.

В общем двигатель Toyota 3GR имеет хороший ресурс и при должном обращении способен проработать более трехсот тысяч километров пробега. Регулярное техобслуживание и качественные ГСМ этому способствуют.

Видео по двигателю 3GR

Процессор модуля управления приводом дроссельной заслонки

P2107 определение кода

Процессор модуля управления приводом дроссельной заслонки

Что означает код P2107

P2107 — это общий код неисправности OBD2, указывающий на неисправность в процессоре модуля управления дроссельной заслонкой; электродвигатель привода дроссельной заслонки не работает, и это определяется блоком управления двигателем (ЭБУ). Как только неисправность обнаружена, ЭБУ включает контрольную лампу двигателя, которая отображается на приборной панели. ЭБУ также установит отказоустойчивый режим для защиты автомобиля. Индикатор проверки двигателя и отказоустойчивый режим будут оставаться до тех пор, пока код не будет исправлен или очищен. Это можно увидеть с другими кодами корпуса дроссельной заслонки.

Что вызывает код P2107?

Наиболее вероятные причины кода P2107:

• Жгут дроссельной заслонки имеет обрыв или короткое замыкание в проводке
• Неисправен датчик положения дроссельной заслонки
• Плохое электрическое соединение
• Корпус дроссельной заслонки вышел из строя

Каковы симптомы кода P2107?

Симптомы могут сильно различаться в зависимости от кода P2107.В редких случаях единственным признаком может быть индикатор Check Engine. В других случаях автомобиль может плохо двигаться, глохнуть во время движения, не иметь или не иметь мощности двигателя, а автомобиль может вообще не заводиться.

Как механик диагностирует ошибку P2107?

1. Подключает диагностический прибор к порту разъема канала передачи данных автомобиля (DLC)
2. Записывает любые коды, хранящиеся в ЭБУ автомобиля, включая историю и ожидающие коды
3. Просматривает данные стоп-кадра для каждого кода и отмечает условия, найденные в
4. Удаляет все коды с чистого листа
5. Проводит тест-драйв автомобиля в условиях, аналогичных приведенным в таблице данных стоп-кадра (при условии, что управление автомобилем безопасно).
6. Выполняет визуальный осмотр после возвращения с тест-драйва (ищет любую поврежденную или изношенную проводку или явно поврежденные компоненты).
7. С помощью диагностического прибора проверяет положение дроссельной заслонки и проверяет, изменяется ли оно при нажатии педали газа.
8. Использует мультиметр для проверки надлежащего напряжения на приводе дроссельной заслонки
9. Снимает трубку всасываемого воздуха и проверяет пластину корпуса дроссельной заслонки, чтобы убедиться, что она свободно перемещается

Распространенные ошибки при диагностировании кода P2107

Обычно ошибки могут быть сделаны даже лучшими техниками, если они не соблюдают пошаговый процесс диагностики или полностью пропускают шаги. Часто совершаемой ошибкой является замена корпуса дроссельной заслонки при выходе из строя датчика положения дроссельной заслонки.Несоблюдение этих шагов может привести к замене исправных компонентов и потере времени и денег.

Насколько серьезен код P2107?

Код P2107 может иметь некоторые симптомы, которые не позволяют ему управлять автомобилем или работать. В некоторых случаях автомобиль может испытывать только плохую работу двигателя и наличие индикатора проверки двигателя.

Какой ремонт может исправить ошибку P2107?

Для диагностики кода P2017 потребуется сканер расширенного уровня. Эти инструменты сканирования позволяют нам получать доступ к потоку данных в реальном времени ЭБУ.Это сообщает техническим специалистам текущие данные, такие как напряжение, данные датчиков, сопротивление и различные показания. Кроме того, эту информацию можно отслеживать на предмет изменений с течением времени.

Нужна помощь с кодом P2107?

YourMechanic предлагает сертифицированных мобильных механиков, которые придут к вам домой или в офис для диагностики и ремонта вашего автомобиля. Получите расценки и запишитесь на прием онлайн или поговорите со консультантом по обслуживанию по телефону 1-800-701-6230.

Проверьте свет двигателя

коды неисправностей

P2107

Развитие процесса гидрогазификации угля.

Том I. Угольные исследования. Второй годовой отчет о техническом прогрессе, 1980 финансовый год правительства (технический отчет)

Комбс, Л. П., Убхаякар, С. К., Бриз, Л. С., Кан, Д. Р., и Ли, В. Т. Развитие процесса гидрогазификации угля. Том I. Угольные исследования. Второй годовой отчет о техническом прогрессе, правительственный финансовый год 1980 . США: Н. П., 1980. Интернет. DOI: 10,2172 / 7021532.

Комбс, Л.П., Убхаякар, С. К., Бриз, Л. С., Кан, Д. Р., и Ли, В. Т. Развитие процесса гидрогазификации угля. Том I. Угольные исследования. Второй годовой отчет о техническом прогрессе, правительственный финансовый год 1980 . Соединенные Штаты. https://doi.org/10.2172/7021532

Комбс, Л. П., Убхаякар, С. К., Бриз, Л. С., Кан, Д. Р., и Ли, В. Т. Мон. «Развитие процесса гидрогазификации угля.Том I. Угольные исследования. Второй ежегодный отчет о техническом прогрессе, 1980 финансовый год правительства ". США. Https://doi.org/10.2172/7021532. Https://www.osti.gov/servlets/purl/7021532.

@article {osti_7021532,
title = {Развитие процесса гидрогазификации угля. Том I. Угольные исследования. Второй годовой отчет о техническом прогрессе, 1980 финансовый год правительства},
author = {Комбс, Л.П. и Убхаякар, С. К. и Бриз, Л. С., Кан, Д. Р. и Ли, В. Т.},
abstractNote = {Этот второй годовой отчет о техническом прогрессе представляет собой подробный отчет о работе, проделанной в течение 1980 финансового года по правительству, по развитию процесса гидрогазификации угля. Несколько программных задач структурированы так, чтобы поддерживать логический прогресс в направлении разработки процесса и, в конечном итоге, коммерциализации. В течение этого периода испытания были завершены на краткосрочном испытательном стенде инженерной гидрогазификации.Результаты тестирования помогли создать адекватную базу данных для уверенного выполнения других задач программы. Корреляция данных с использованием методов нелинейной множественной регрессии с набором феноменологических реакций гидропиролиза приводит к созданию мощного аналитического инструмента прогнозирования. Завершено проектирование и начато строительство комплексной технологической установки 3/4-TPH, способной работать в непрерывном режиме до 30 дней. Чтобы поддержать амбициозный график строительства объекта субподрядчиками, большая часть необходимого оборудования была заказана путем заблаговременных закупок.Монтаж металлоконструкций продолжается. Прочие субподрядные строительные работы были отложены по бюджетным причинам.},
doi = {10.2172 / 7021532},
url = {https://www.osti.gov/biblio/7021532}, journal = {},
number =,
объем =,
place = {United States},
год = {1980},
месяц = ​​{10}
}

Автоматизация прямого клеточного анализа взаимодействия целевого соединения для гистон-метилтрансферазы G9a и белков бромодомена

Связанный образец файла Gen5: DiscoveRx InCELL Hunter Epigenetics Assay считывает параметры считывания и расчеты кратной индукции для Z ’и EC ₅₀ значение

Авторы : Брэд Ларсон и Питер Бэнкс, BioTek Instruments, Inc. , Winooski, VT; Сунита Гопалан, Маниша Пратап и Дана Хейли-Висенте, Eurofins DiscoverX, Фремонт, Калифорния

Введение

Модификации гистонов необходимы для экспрессии и регуляции эукариотических генов и управляются белками, записывающими, стирающими и считывающими гистоны. Эти изменения гистонового хвоста являются динамическими и являются нормальной частью эмбриональной дифференцировки клетки от ее первоначального тотипотентного состояния. Однако аберрантные модификации гистонов связаны с многочисленными болезненными состояниями ¹ , включая многие виды рака у человека.Например, лизин-специфичный домен SET, содержащий записывающий белок G9a-метилтрансферазы, сверхэкспрессируется при различных раковых заболеваниях. Он также имеет дефицит CD4 + Т-хелперных клеток, что приводит к увеличению частоты кишечных инфекций. ² В другом примере белок Brd4, считывающий бромодомен BET, участвует в карциноме средней линии NUT (NMC) посредством слияния белка и NUT. ³ Благодаря этим и другим открытиям, метилтрансфераза и белки бромодомена являются мишенями для многочисленных проектов по открытию лекарств.

Современные технологии биохимических анализов исследуют ферментативную активность метилтрансферазы и ингибирование белка бромодомена. В этих анализах отсутствует мониторинг взаимодействия соединения-мишени в клеточной среде, что важно для проверки фармакологии кандидатов в лекарственные препараты. Кроме того, клеточные анализы для анализа ингибиторов эпигенетических белков ранее ограничивались обнаружением специфических модификаций гистонов с использованием антител. Когда антитела недоступны, необходим другой метод.Следовательно, существует потребность в надежном, высокопроизводительном клеточном анализе, который может идентифицировать связывание соединения с каталитическим доменом белка без зависимости от антител. В этом исследовании мы описываем не содержащую антител платформу для клеточного анализа InCELL Hunter ™, которая позволяет определять специфичность связывания и прямое взаимодействие с белками потенциальных низкомолекулярных ингибиторов метилтрансферазы G9a и множественных бромодоменных белков.

В дополнение к этому исследованию, узнайте, как эта платформа была использована для разработки высокопроизводительных клеточных анализов для дополнительных ингибиторов Brd4, а также ингибитора аргининметилтрансферазы 3 (PRMT3), как указано в разделе «Дополнительные данные».

Принцип клеточного анализа InCELL Hunter ™

Анализы

InCELL Hunter ™ от Eurofins DiscoverX — это целенаправленные анализы, используемые для исследования взаимодействия соединения с мишенью в клетках путем обнаружения изменений в стабильности белка (см. Рисунок 1). Такие изменения в стабильности белка измеряются с помощью хемилюминесцентного сигнала, вызванного использованием одобренной промышленностью технологии комплементации ферментных фрагментов (EFC, discoverx.com / efc). Эта технология обеспечивает количественный, однородный формат анализа, который является быстрым, надежным и масштабируемым без использования антител, масс-спектрометрии или визуализации.Целевой белок сливается с небольшим неактивным фрагментом фермента β-галактозидазы (β-gal), называемым ProLabel® (ePL), и экспрессируется на выбранном клеточном фоне. В отсутствие связывающего соединения слияние мишень-ePL достигает устойчивого состояния, увеличиваясь только тогда, когда соединение связывает мишень. Добавление комплементарного большего фрагмента β-gal, акцептора фермента (EA), способствует комплементации ePL и EA, в результате чего образуется активный фермент β-gal. Гидролиз добавленного субстрата ферментом β-gal генерирует хемилюминесцентный сигнал, который указывает на измененную стабильность меченного ePL белка.Анализы InCELL Hunter, особенно полезные для белков с относительно высокой скоростью оборота, успешно применялись для определения клеточной проницаемости и активности соединения.

Рис. 1. Принцип анализа InCELL Hunter, основанный на технологии Eurofins DiscoverX EFC. Внутриклеточный целевой белок в этих анализах сливается с небольшим донорным фрагментом фермента, ePL, фермента β-gal. При добавлении соединения, связывающего мишень, уровни белка в клетке стабилизируются или изменяются, и это изменение можно отслеживать, измеряя обилие целевого белка с помощью хемилюминесцентного обнаружения. Реагенты для обнаружения включают хемилюминесцентный субстрат с добавлением большого фрагмента акцептора фермента (EA), который естественным образом дополняет тег ePL на целевом белке для создания активного фермента β-gal. Образующийся активный фермент гидролизует субстрат с генерацией хемилюминесцентного сигнала. Чем больше сигнал, тем сильнее взаимодействие соединения-мишени в клетке.

Материалы и методы

Материалы

Компоненты анализа

Анализ бромодомена InCELL Hunter eXpress Brd2 (1) (кат.№ 96-0004E1CP0S), наборы InCELL Hunter eXpress Brd4 (1) Bromodomain Assay (Кат. № 96-0005E1CP0S) и InCELL Hunter eXpress G9a Methyltransferase Assay (Кат. № 96-0003E15CP7S), содержащие готовый для анализа InCELL Hunter клетки, экспрессирующие соответствующий эпигенетический белок-мишень, реагент для посева клеток (CP) и реагент для обнаружения, все использовали от Eurofins DiscoverX. Клетки InCELL Hunter HEK 293 Brd2 (1) и HEK 293 Brd4 (1) были включены в анализы бромодомена, в то время как клетки InCELL Hunter A549 G9a были включены в анализ метилтрансферазы G9a.

Соединения

Библиотека эпигенетики Screen-Well® из 43 компонентов, версия 1.0 (каталожный номер BML-2836-0500) была щедро пожертвована Enzo Life Sciences (Plymouth Meeting, PA). Известный ингибитор бромодомена (+) — JQ1 (каталожный номер 92-1149) был получен от Eurofins DiscoverX. Синефунгин (кат. № S8559) и моногидрат 2,4-пиридиндикарбоновой кислоты (2,4-PDCA) (кат. № P63395) были приобретены у Sigma-Aldrich Co. (Сент-Луис, Миссури). UNC 0646 (Кат. № 4342) и UNC 0638 (Кат.№ 4343) были приобретены у R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота).

Приборы

Система дозирования для микропланшетов

Система дозирования для микропланшетов Precision ™ сочетает в себе 8-канальную дозирующую головку и 8-канальный дозатор реагентов в одном приборе. Прецизионность была использована для разбавления библиотеки Epigenetics и переноса конечных 5-кратных концентраций на 384-луночные аналитические планшеты.

Диспенсер для микропланшетов

Диспенсер для микропланшетов MultiFlo ™ обеспечивает быстрое и точное дозирование планшетов с помощью двух перистальтических и двух шприцевых насосов с объемом от 0. 5-3000 мкл. MultiFlo использовался для распределения всех компонентов анализа, включая клетки и подготовленный реагент обнаружения в 384-луночном формате.

Многорежимный считыватель микропланшетов

Многорежимный считыватель микропланшетов

Synergy ™ Neo HTS (BioTek Instruments, Inc.) с запатентованной Hybrid Technology ™ объединяет системы обнаружения на основе фильтров и монохроматоров в одном устройстве. Специальная высокопроизводительная система детектирования люминесценции использовалась для количественной оценки люминесцентного сигнала из каждой аналитической лунки с использованием времени интегрирования 0.2 секунды и прирост 120.

Методы

Автоматические процедуры анализа были выполнены в 384-луночном формате с использованием высокопроизводительного оборудования для обработки жидкостей и детектирования. Первоначальные эксперименты включали оптимизацию количества клеток и оптимизацию времени инкубации соединения после посева. Это было сделано для максимального увеличения отношения сигнала к фону между лунками, содержащими связанные с соединением клетки-мишени, и лунками только с клетками-мишенями, а также для проверки Z’-фактора4. Затем небольшую целевую библиотеку низкомолекулярных соединений эпигенетических ингибиторов подвергали скринингу с каждым целевым анализом.Наконец, был завершен тест доза-ответ с использованием результатов скрининга соединений и известных ингибиторов положительных контрольных соединений. Экспериментальные результаты подтверждают способность автоматизированного клеточного анализа точно обнаруживать целенаправленное взаимодействие тестируемых соединений с низким уровнем ложноположительных результатов простым, но надежным способом для этих важных эпигенетических целей.

Подготовка клеток

500 мкл соответствующего реагента CP добавляли к 100 мкл готовых к анализу клеток InCELL Hunter в концентрации 12 x 106 клеток / мл, чтобы получить 600 мкл 2.0 х 106 клеток / мл. Клетки дополнительно разбавляли до подходящей концентрации для каждого эксперимента путем переноса аликвоты клеток в дополнительный реагент CP. Концентрация клеток и оптимизация времени реакции Клетки InCELL Hunter HEK 293 Brd2 (1) помещали в два отдельных 384-луночных микропланшета в концентрациях от 16000 до 0 клеток / лунку. Планшеты инкубировали при 37 ° C и 5% CO2 в течение 24 или 48 часов. После инкубации 10 мкМ ингибитора бромодомена (+) — JQ1 (1x) добавляли в половину лунок при каждой концентрации клеток, а среду для посева добавляли в другую половину.Планшеты инкубировали при 37 ° C и 5% CO2 в течение 6 часов. Затем в каждую лунку добавляли реагент для обнаружения и планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем люминесцентный сигнал количественно оценивали с использованием Synergy Neo и вышеупомянутых настроек люминесценции.

Рабочий процесс автоматизированного анализа InCELL Hunter

20 мкл клеток InCELL Hunter в концентрации 5 x 104 клеток / мл помещали в каждую лунку 384-луночного планшета, затем планшет инкубировали при 37 ° C и 5% CO2 в течение 48 часов. После инкубации в каждую лунку добавляли 5 мкл титрованного соединения, и планшет инкубировали при 37 ° C и 5% CO2 в течение 6 часов. Затем в каждую лунку вносили 30 мкл реагента для обнаружения, и планшет инкубировали последний раз при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем люминесцентный сигнал количественно оценивали с использованием Synergy Neo и вышеупомянутых настроек люминесценции.

Автоматическая проверка Z’-фактора

Рабочий процесс автоматического анализа был запущен с использованием клеток Brd2 (1) и Brd4 (1) и 10 мкМ и 0 мкМ ингибитора бромодомена (+) — JQ1 в качестве положительного и отрицательного контролей в эксперименте с Z’-фактором для измерения устойчивости анализа. .Рабочий процесс автоматического анализа также был запущен с использованием клеток G9a и концентраций 10 мкМ и 0 мкМ ингибитора метилтрансферазы UNC 0638 в качестве положительного и отрицательного контролей. Для каждого теста было включено 48 повторов каждой концентрации соединения. Концентрация клеток и время инкубации после посева были оптимизированы во время начального эксперимента.

Экран библиотеки соединений

Сорок восемь соединений, включая 43 соединения Screen-Well Epigenetics Library, и ингибиторы синефунгин, 2,4 PDCA, (+) — JQ1, UNC 0646 и UNC 0638, были разбавлены в соответствующем реагенте CP от их исходных 10 мМ. концентрации до конечных 1х концентраций 20 мкМ, 2 мкМ и 200 нМ.Концентрация каждого соединения была протестирована с использованием анализов Brd2 (1), Brd4 (1) и G9A в соответствии с вышеупомянутым автоматизированным рабочим процессом. Тесты «доза-ответ» выполняли с использованием серийных титрований 1: 4 каждого пораженного соединения из скрининга библиотеки соединений, начиная с концентрации 100 мкМ 1x. Каждое пораженное соединение было протестировано с использованием анализов Brd2 (1), Brd4 (1) и G9A в соответствии с вышеупомянутым автоматизированным рабочим процессом.

Расчеты

Оптимизация времени реакции для концентрации клеток на лунку и времени инкубации после посева критически важна для максимизации отношения сигнал / фон (S / B) между лунками, содержащими связанные с соединением клетки-мишени, и лунками, содержащими несвязанные клетки-мишени. Относительные люминесцентные единицы (RLU) были нанесены на график для лунок, содержащих либо 10 мкМ, либо 0 мкМ (+) — JQ1 из клеток, инкубированных в течение 24 часов (рис. 2A) или 48 часов (рис. 2B) после посева. Значения S / B рассчитывались следующим образом:

Рассчитанные значения S / B были затем нанесены на график для всех концентраций клеток (Рисунок 2C) и только для 250-2000 клеток / лунку (Рисунок 2D). Как видно из рисунка 2D, рассчитанное соотношение S / B между лунками, содержащими 10 или 0 мкМ ингибитора, остается стабильным до небольшого увеличения в течение 24-часового и 48-часового времени посева до 2000 клеток / лунку.

Результат

При сравнении результатов для клеток, инкубированных в течение 24 или 48 часов после посева с одинаковыми концентрациями клеток, было обнаружено, что данные S / B для 48-часовых инкубированных клеток постоянно выше, чем для 24-часовых инкубированных клеток, с S / B значения больше 20. Таким образом, концентрация клеток в 1000 клеток / лунка и 48-часовое время инкубации после посева были выбраны для использования в последующих экспериментах и ​​для разных штаммов клеток, чтобы обеспечить высокое соотношение S / B, а также минимизировать использование клеток. .

Рисунок 2 . Концентрация клеток и результаты инкубации после посева. Значения RLU, нанесенные на график для лунок, содержащих либо 10 мкМ (+) — JQ1, либо 0 мкМ (+) — JQ1, из клеток, инкубированных в течение 24 часов (A) или 48 часов (B) после посева. Рассчитанные значения S / B для всех протестированных концентраций клеток (C), а также только для 250-2000 клеток / лунку (D).

Автоматическая проверка Z’-фактора

Значение Z’-фактора учитывает разницу в сигнале между положительным и отрицательным контролем, а также вариацию сигнала между повторами.Использовалась шкала от 0 до 1 со значениями больше или равными 0,5, что свидетельствует об отличном анализе. Значения Z’-фактора, полученные с помощью трех автоматических анализов (рис. 3) 0,82 (Brd2 (1)), 0,79 (Brd4 (1)) и 0,80 (G9a), каждое указывает на превосходный и надежный анализ.

Рисунок 3. Автоматическая проверка Z-фактора анализа. Результаты Z’-фактора для автоматизированных анализов (A) Brd2 (1), (B) Brd4 (1) и (C) G9a.

Экран библиотеки соединений

Библиотека эпигенетики Screen-Well и пять (5) известных ингибиторов были протестированы с использованием проверенных автоматизированных анализов Brd2 (1), Brd4 (1) и G9a для поиска потенциальных ингибиторов целевого белка.Индукцию складывания (данные не показаны) определяли для каждой из трех концентраций соединения с помощью каждого из трех химических методов анализа путем сравнения люминесцентного сигнала от лунок, содержащих соединение, с лунками без соединения. Значение двукратной индукции представляет собой двукратное увеличение значений RLU по сравнению со средним значением для лунок, не содержащих соединения.

Повышенная люминесценция свидетельствует о связывании соединения с белком-мишенью слияния с ePL и об увеличении устойчивого состояния молекулы.Степень люминесценции также может указывать на способность соединения ингибировать активность целевого белка. Снижение кратности индукции наблюдали при самой высокой концентрации, проверенной с помощью определенных соединений, включая BIX-01294, UNC 0646 и UNC 0638. Это снижение, вероятно, было связано с цитотоксическим действием соединения на линию клеток, включенную для конкретного анализа. Соединения, дающие более чем 2-кратное увеличение люминесцентного сигнала, были дополнительно протестированы для выявления их полного ингибирующего потенциала.Для получения библиотеки эпигенетики Screen-Well и результатов скрининга свяжитесь с нами по адресу [email protected].

Те соединения, показавшие более чем 2-кратное увеличение люминесцентного сигнала при скрининге соединений, были перенесены для анализа зависимости реакции от дозы с использованием проверенных автоматизированных анализов Brd2 (1), Brd4 (1) и G9a для исследования селективности по мишеням. Значения кратной индукции были нанесены на график для всех соединений, включенных в тест «доза-ответ», для каждого анализа. Из рассмотрения были исключены точки, в которых наблюдались очевидные цитотоксические эффекты от высокой концентрации соединения. Как показано на рисунке 4, известный ингибитор бромодомена (+) — JQ1 и ингибиторы метилтрансферазы G9a, UNC 0646 и UNC 0638, продемонстрировали ожидаемые профили ингибирования и значения EC ₅₀ ^5,6,7 , таким образом подтверждая скрининг результаты теста доза-реакция. На фиг.4 также показано, что соединение BIX-01294 также демонстрирует сродство связывания с G9a при увеличении концентрации. Это явление было селективным для анализа G9a и подтверждается литературными ссылками, показывающими, что BIX-01294 связывается с субстратной пептидной бороздкой белка. ⁸ Не наблюдалось заметного связывания BIX-01294 с двумя белками бромодомена.

Рисунок 4 . Скрининг-анализ библиотеки соединений «доза-реакция». Результаты теста «доза-ответ», показывающие индукционные кривые и значения EC ₅₀ для известных ингибирующих соединений с анализами (A) Brd2 (1), (B) Brd4 (1) и (C) G9a. Пунктирная линия указывает значение индукции сгиба, равное 1, для справки.

Вывод

Анализы эпигенетической метилтрансферазы G9a, Brd2 (1) и Brd4 (1) InCELL Hunter обеспечивают точный, простой, универсальный клеточный формат для оценки связывания соединения с конкретной интересующей мишенью.Процедура анализа легко автоматизируется для высокопроизводительного анализа в 384-луночном формате с использованием системы пипетирования для микропланшетов Precision и диспенсера для микропланшетов MultiFlo. Кроме того, высокоэффективное обнаружение люминесценции Synergy Neo обеспечивает чувствительное обнаружение хемилюминесцентного сигнала, позволяя использовать концентрации клеток до 1000 клеток на лунку.

Данные скрининга показывают, что усиление люминесцентного сигнала наблюдается только тогда, когда соединения взаимодействуют со специфическим внутриклеточным белком-мишенью, что дает низкий уровень ложноположительных результатов.Наконец, сочетание химии анализа и обработки жидкостей и микропланшетов для обнаружения создает простое, надежное и окончательное решение на клеточной основе для ингибирующей идентификации соединений этих важных эпигенетических мишеней.

Дополнительные данные

Клеточные анализы стабилизации белков для обнаружения взаимодействий между ингибиторами малых молекул и BRD4

Бромодомен-белок 4 или BRD4 является транскрипционным и эпигенетическим регулятором, который, как известно, управляет экспрессией онкогенов при некоторых видах рака.BRD4 связывается с ацетилированными гистоновыми хвостами через два бромодомена, BD1 и BD2.

Обнаружено, что ингибирование связывания гистона BRD4 с помощью низкомолекулярных ингибиторов является полезным средством лечения рака в будущем. В этой статье описываются два ортогональных анализа, в том числе миниатюрный на основе платформы InCELL Hunter, которые использовались для оценки стабилизации BRD4 низкомолекулярными ингибиторами. Прочтите статью ¹¹ здесь.

Сильный, селективный и клеточно-активный аллостерический ингибитор протеина аргининметилтрансферазы 3 (PRMT3)

PRMT3 катализирует моно- и асимметричное деметилирование остатков аргинина. Этот фермент участвует в нескольких заболеваниях, таких как окулофарингеальная мышечная дистрофия, ишемическая болезнь сердца, а также в росте опухоли. В этой статье описывается первый аллостерический ингибитор PRMT3, названный SGC707, и он связывается с PRMT3 с помощью платформы InCELL Hunter. Прочтите статью12 здесь.

Анализы взаимодействия с мишенью InCELL Pulse ™

Формат анализа InCELL Pulse позволяет легко и быстро измерить взаимодействие соединения с мишенью, особенно для термолабильных белков.Типы форматов InCELL Hunter и InCELL Pulse используют одни и те же базовые принципы EFC, но с некоторыми существенными различиями, которые подходят им для разных целей. Узнайте больше о нашей платформе InCELL и получите доступ к доступным клеточным линиям и наборам на сайте discoverx.com/InCELL.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Enzo Life Sciences за щедрое пожертвование библиотеки эпигенетики Screen-Well.

Список литературы

1. Шульце Дж. , Моосмайер Д., Вайске Дж. И др.Анализы стабилизации белков на основе клеток для обнаружения взаимодействий между низкомолекулярными ингибиторами и BRD4. Экран J Biomol. 2015; 20 (2): 180-189. DOI: 10.1177 / 1087057114552398
2. Kaniskan HÜ, Szewczyk MM, Yu Z, et al. Сильный, селективный и клеточно-активный аллостерический ингибитор протеина аргининметилтрансферазы 3 (PRMT3). Angew Chem Int Ed Engl. 2015; 54 (17): 5166-5170. DOI: 10.1002 / anie.201412154
3. Сантос-Роса Х, Калдас С. Ферменты-модификаторы хроматина, гистоновый код и рак.Eur J Cancer. 2005; 41 (16): 2381-2402. DOI: 10.1016 / j.ejca.2005.08.010
4. Ленертц Б., Нортроп Дж. П., Антиньяно Ф. и др. Активирующие и ингибирующие функции гистон-лизинметилтрансферазы G9a в дифференцировке и функционировании Т-хелперных клеток. J Exp Med. 2010; 207 (5): 915-922. DOI: 10.1084 / jem.20100363
5. French CA, Ramirez CL, Kolmakova J, et al. Онкобелки BRD-NUT: семейство тесно связанных ядерных белков, которые блокируют дифференцировку эпителия и поддерживают рост клеток карциномы. Онкоген. 2008; 27 (15): 2237-2242. DOI: 10.1038 / sj.onc.1210852
6. Zhang JH, Chung TD, Ольденбург, КР. Простой статистический параметр для использования при оценке и валидации высокопроизводительных скрининговых анализов. Экран J Biomol. 1999; 4 (2): 67-73. DOI: 10.1177 / 108705719
0206
7. Анализ бромодомена InCELL Hunter ™ eXpress Brd2 (1) (Кат. № 96-0004E1; Номер партии 12h30SG2).
8. Анализ бромодомена InCELL Hunter ™ eXpress Brd4 (1) (№ по каталогу: 96-0005E1; номер партии 12h3202).
9. Анализ метилтрансферазы InCELL Hunter ™ eXpress G9a (№ по каталогу: 96-0003E15; номер партии 12h3107).
10. Чанг И, Чжан Х, Хортон Дж. Р. и др. Структурная основа ингибирования G9a-подобной протеин-лизинметилтрансферазы с помощью BIX-01294. Nat Struct Mol Biol. 2009; 16 (3): 312-317. DOI: 10.1038 / nsmb.1560
11. Шульце Дж., Моосмайер Д., Вайске Дж. И др. Анализы стабилизации белков на основе клеток для обнаружения взаимодействий между низкомолекулярными ингибиторами и BRD4. Экран J Biomol. 2015; 20 (2): 180-189. DOI: 10.1177 / 1087057114552398
12. Kaniskan HÜ, Szewczyk MM, Yu Z, et al. Сильный, селективный и клеточно-активный аллостерический ингибитор протеина аргининметилтрансферазы 3 (PRMT3). Angew Chem Int Ed Engl. 2015; 54 (17): 5166-5170. DOI: 10.1002 / anie.201412154

Только для исследовательских целей. Не для использования в диагностических процедурах

RA44237.5923726852

AN020613_02

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Rocky Mount Toyota — Toyota, Сервисный центр

Мне сказали, что я не был одобрен @ как 3 дилера из-за SANTANDER давным-давно.Первым до меня дошел привет сотруднику AMIR, но AJ был немного представительнее, профессиональнее (самое главное) в помощь мне, т. е. позвонили, ответили по электронной почте, а также предпочтительным способом по ТЕЛЕФОНУ. Спасибо, парни! Но теперь я слышал, что Сантандер проиграл крупный судебный процесс из-за незаконных действий в отношении тех, кто покупает машину здесь, в Северной Каролине, дополнительно в штатах CALI 33. Я счастлив! Я рискнул в NC Rocky Mount Toyota. Мне сказали, что легкое одобрение — это «правда». Замечательные продавцы / продавщицы и пока что это подтвердилось! Мне сказали в эти праздничные выходные, что я одобрен после того, как пара отклонила несколько других из-за SANTANDER, но возвращение во владение составляет 4 года.Старый. Я тоже производил своевременные платежи в течение 1-2 долгих лет. SANTANDER кривые. «Rocky Mount, NC Toyota — нет. (Ну, во всяком случае, не для нас), поэтому мы рады НОВЫМ ГОДУ, завершившему ужасный 2020 год по многим причинам, по многим, услышав, что мы одобрены для нового автомобиля и зная, что я могу легко платить в месяц. , (без ипотеки / без арендной платы на данный момент) и только 1 кредитная карта, я могу позволить себе pymt. с двумя работами, хорошо копит, чистка кредита — это ОСНОВНОЙ фокус 2021 года. И машина поможет мне, как 1 кредитная карта, которая у меня есть.Я буду улыбаться, заходя в RMT СРЕДНЕЕ ЯНВАРЯ. До конца января. Я снова НЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО УТВЕРЖДЕН, парень, помогающий мне, написал электронное письмо: «Я одобрен». Он пытался за меня от 4 до 6 дней. — Я рад, что он попробовал. Теперь меня одобрили, и я узнал, что это годится как минимум ТРИДЦАТЬ ДНЯ. Я покупаю его, иду к дилеру за своей машиной в середине ЯНВАРЯ нового года, около 13 числа. Всем удачи. У меня здесь тоже было 2 товарища, купивших их. пока все хорошо для них от 1 до 3 лет или около того, все довольны этим дилером, и я рад, что ROCKY MOUNT TOYOTA мне поможет, улыбнитесь в конце дня, просыпаться, идя на работу, иногда в дорожные поездки, чтобы иметь возможность улыбнуться, зная, что они были и готовы дать мне РЕАЛЬНЫЙ шанс заплатить за новую машину, и вернуться в нормальное русло с восстановлением mi кредита, с моя новенькая машина! Не беспокойтесь о поломке и т. Д., машина просто новая, НОВОГО года. НОВАЯ ЖИЗНЬ, ЗДОРОВЫЙ СЧАСТЛИВЫЙ ФОКУС хорошая жизнь и восстановление моей кредитной истории из месяца в месяц помогут в этом, следующие 3 долгих месяца ЗИМЫ и далее. Спасибо R.M.T. прощай. ‘

Читать далее

% PDF-1. 6 % 1992 0 объект > эндобдж xref 1992 97 0000000016 00000 н. 0000004329 00000 н. 0000004552 00000 н. 0000004682 00000 н. 0000004743 00000 н. 0000005329 00000 н. 0000005484 00000 н. 0000005638 00000 п. 0000005792 00000 н. 0000005947 00000 н. 0000006100 00000 н. 0000006256 00000 н. 0000006413 00000 н. 0000006570 00000 н. 0000006727 00000 н. 0000006884 00000 н. 0000007041 00000 н. 0000007198 00000 н. 0000007355 00000 н. 0000007511 00000 н. 0000007668 00000 н. 0000007825 00000 н. 0000008312 00000 н. 0000008518 00000 н. 0000009076 00000 н. 0000009806 00000 н. 0000010200 00000 н. 0000010913 00000 п. 0000011583 00000 п. 0000011854 00000 п. 0000012124 00000 п. 0000012352 00000 п. 0000013396 00000 п. 0000013452 00000 п. 0000014056 00000 п. 0000014141 00000 п. 0000014411 00000 п. 0000015098 00000 п. 0000015192 00000 п. 0000015464 00000 п. 0000015822 00000 п. 0000015895 00000 п. 0000015949 00000 п. 0000016206 00000 п. 0000018563 00000 п. 0000018950 00000 п. 0000019328 00000 п. 0000019586 00000 п. 0000021260 00000 п. 0000023093 00000 п. 0000023366 00000 п. 0000023855 00000 п. 0000024529 00000 п. 0000025033 00000 п. 0000025458 00000 п. 0000025713 00000 п. 0000025798 00000 п. 0000026400 00000 н. 0000028194 00000 п. 0000028556 00000 п. 0000028945 00000 п. 0000029225 00000 п. 0000030773 00000 п. 0000030820 00000 п. 0000030866 00000 п. 0000032400 00000 п. 0000033819 00000 п. 0000034692 00000 п. 0000042338 00000 п. 0000042407 00000 п. 0000048905 00000 н. 0000048974 00000 п. 0000050326 00000 п. 0000050395 00000 п. 0000058125 00000 п. 0000058194 00000 п. 0000064369 00000 п. 0000064438 00000 п. 0000064595 00000 п. 0000096588 00000 п. 0000098488 00000 п. 0000098556 00000 п. 0000098624 00000 п. 0000098725 00000 п. 0000102783 00000 н. 0000102852 00000 п. 0000102920 00000 н. 0000102989 00000 н. 0000105117 00000 н. 0000105186 00000 п. 0000105255 00000 н. 0000106988 00000 н. 0000107057 00000 п. 0000107126 00000 н.