I boost zeigen: ZEIGEN i-Boost Lada. ZEIGEN i-Boost Lada

Этот контент создается и поддерживается третьей стороной и импортируется на эту страницу, чтобы помочь пользователям указать свои адреса электронной почты. Вы можете найти больше информации об этом и подобном контенте на сайте piano.io.

Реклама — продолжить чтение ниже

Риск при сидении: насколько вредно сидеть слишком долго?

Когда вы сидите, вы расходуете меньше энергии, чем когда стоите или двигаетесь.Исследования связывают длительное сидение с рядом проблем со здоровьем. К ним относятся ожирение и ряд состояний — повышенное кровяное давление, высокий уровень сахара в крови, избыток жира в области талии и аномальный уровень холестерина — которые составляют метаболический синдром. Слишком частое сидение в целом и продолжительные периоды сидения также увеличивают риск смерти от сердечно-сосудистых заболеваний и рака.

Любое длительное сидение — например, за столом, за рулем или перед экраном — может быть вредным.Анализ 13 исследований времени сидения и уровней активности показал, что те, кто сидел более восьми часов в день без физической активности, имели риск смерти, аналогичный риску смерти, связанному с ожирением и курением. Однако, в отличие от некоторых других исследований, этот анализ данных более чем 1 миллиона человек показал, что от 60 до 75 минут умеренно интенсивной физической активности в день нейтрализовали последствия чрезмерного сидения. Другое исследование показало, что время сидения мало влияет на смертность наиболее активных людей.

Необходимы дополнительные исследования влияния сидения и физической активности на здоровье. Однако кажется очевидным, что меньше сидения и больше движений в целом способствуют лучшему здоровью. Вы можете начать с того, что просто встанете, а не сидите, когда у вас есть возможность или найти способы ходить во время работы. Например:

• Делайте перерыв каждые 30 минут.
• Встаньте во время разговора по телефону или просмотра телевизора.
• Если вы работаете за столом, попробуйте стоячий стол или импровизируйте с высоким столом или стойкой.
• Гуляйте с коллегами по встречам, а не сидите в конференц-зале.
• Расположите рабочую поверхность над беговой дорожкой — с экраном компьютера и клавиатурой на подставке или на специализированном вертикальном столе, готовом для беговой дорожки, — чтобы вы могли двигаться в течение всего дня.

Влияние движения — даже неторопливого движения — может быть значительным. Во-первых, вы сожжете больше калорий. Это может привести к потере веса и увеличению энергии. Кроме того, физическая активность помогает поддерживать мышечный тонус, вашу способность двигаться и ваше психическое благополучие, особенно с возрастом.

1. Lakerveld J, et al. Сидеть слишком много: иерархия социально-демографических коррелятов. Профилактическая медицина. 2017; 101: 77.
2. Saeidifard F, et al. Различия в расходе энергии сидя и стоя: систематический обзор и метаанализ. Европейский журнал профилактической кардиологии. 2018; 25: 522.
3. Продолжительное сидение связано с серьезным риском для здоровья, смертью. Американская академия семейных врачей. https: // www.aafp.org/news/health-of-the-public/20150127sitting.html. По состоянию на 10 апреля 2018 г.
4. Diaz KM, et al. Модели малоподвижного поведения и смертности у людей среднего и пожилого возраста в США: национальное когортное исследование. Анналы внутренней медицины. 2017; 167: 465.
5. Biddle SJH, et al. Слишком частое сидение и общая смертность: есть ли причинно-следственная связь? BMC Public Health. 2016; 16: 635.
6. Экелунд У. Инфографика: Физическая активность, время сидения и смертность. Британский журнал спортивной медицины.Под давлением. По состоянию на 10 апреля 2018 г.

.

«Удар Кавано» увеличивает число кандидатов Республиканской партии в Сенат, но влияние на Трампа неясно

Президент Дональд Трамп представляет окружного судью США Бретта М. Кавано в качестве своего кандидата в Верховный суд США во время мероприятия в Восточном зале Белого дома июль 9 августа 2018 года в Вашингтоне.

Чип Сомодевилла | Getty Images

Рейтинги одобрения президента Дональда Трампа несколько повысились в последние недели, так как страна сосредоточила внимание на битве за утверждение судьи Верховного суда Бретта Кавано, обвиненного в сексуальном насилии в сентябре.

Но для кандидатов в Сенат от республиканцев решение Трампа представить борьбу с Кавано как нападение демократов на всех мужчин, а не только на Кавано, помогло их кампаниям получить серьезный импульс.

Влияние дебатов Кавано на Трампа

По данным опроса Real Clear Politics, за последние две недели рейтинги одобрения президента выросли примерно до 43 процентов. По данным RCP, это на 2 пункта выше, чем в середине сентября, когда рейтинг одобрения Трампа упал до 41 процента — самого низкого среднего показателя, который Трамп видел с марта.

Однако большую часть лета рейтинг одобрения Трампа в опросах RCP составлял около 43%. Статистический сайт FiveThirtyEight.com оценил одобрение президента в среднем около 42 процентов за тот же период, с середины июня по сентябрь, когда они ненадолго упали ниже 40 процентов.

Однако среди экспертов единственное мнение о том, насколько Кавано помог данным опроса Трампа, заключается в том, что это неясно.

И, несмотря на появление повествования, приписывающего небольшое повышение Трампа так называемому удару Кавано, трудно определить, насколько выздоровление Трампа на самом деле является отражением борьбы за подтверждение Кавано.

Это связано с тем, что на мнение избирателей о президенте могло повлиять множество других вопросов, от сильной экономики до разрастающейся торговой войны с Китаем.

Как писал ветеран опроса Нейт Сильвер из FiveThirtyEight.com 4 октября:

Рейтинги одобрения Трампа в основном следовали той же траектории, что и обычные бюллетени, упав с начала-середины сентября и с тех пор немного восстановившись. Однако неясно, насколько это связано с Кавано, поскольку в августе и начале сентября президент имел дело с множеством других новостей, таких как признание вины Пола Манафорта и Майкла Коэна.Простое избегание заголовков, в то время как Кавано был ведущим, возможно, помогло цифрам Трампа вернуться к среднему значению.

Но хотя по-прежнему сложно оценить влияние, которое Кавано оказал на результаты опросов Трампа, кажется очевидным, что то, как Трамп обработал подтверждение Кавано, оказало реальное влияние на избирателей-республиканцев.

Влияние Трампа на дебаты о Кавано

С тех пор, как калифорнийский профессор Кристин Блейси Форд впервые публично обнародовала свое утверждение о том, что Кавано изнасиловал ее, в сентябре.16 января Трамп и республиканцы в Сенате утверждали, что настоящей жертвой является Кавано, а не Форд.

Возглавляемые Трампом республиканцы открыто апеллируют к белым мужчинам, утверждая, что если опытного профессионала, такого как Кавано, можно обвинить в сексуальном насилии через 36 лет после предполагаемого нападения, то ни один мужчина не может быть в безопасности.

«Это очень страшное время для молодых людей в Америке, когда вы можете быть виноваты в чем-то, в чем вы не виноваты», — сказал Трамп в начале октября, всего за несколько дней до окончательного утверждения Кавано.

Эту тему президент повторял на митингах, в том числе в Миссисипи, где он высмеивал воспоминания Форда о ее предполагаемом нападении. Вместо того чтобы думать о Форде, он сказал: «Подумайте о своем сыне. Подумайте о своем муже».

Риторика Трампа, похоже, высвободила одно из его самых мощных политических орудий — чувство недовольства среди белых консервативных избирателей мужского пола.

Этот аргумент был поддержан высшими республиканцами Сената, включая лидера большинства в Сенате Митча МакКоннелла, который назвал обвинения против Кавано «позорной клеветнической кампанией», посредством которой «демократы в Сенате пытаются разрушить личную и профессиональную жизнь человека.»

Но эта аргументация не изменила мнение избирателей о Кавано или об обвинениях против него. Напротив, опросы в сентябре и октябре показали, что со временем мнения избирателей о Кавано только стали более поляризованными.

Вместо этого они, кажется, просто разозлили республиканцев. А рассерженные избиратели, как правило, с большим энтузиазмом относятся к голосованию, чем те, кто этого не делает.

«Республиканская база пробудилась»

«Результат слушаний [Кавано], — по крайней мере, в краткосрочной перспективе республиканская база пробудится », — сказал Ли Майрингофф, директор Института общественного мнения Маристского колледжа, выступая на NPR.

Согласно опросу, проведенному на этой неделе NPR и Marist, с июля по октябрь энтузиазм избирателей-республиканцев подскочил на 8 пунктов. Несколько других опросов показали аналогичный рост числа избирателей Республиканской партии, которые считают ноябрьские выборы «очень важными».

Энтузиазм избирателей почти напрямую выражается в явке избирателей. И трудно переоценить, насколько важна явка для республиканцев в этом году.

Большую часть лета и осени стратеги Республиканской партии были обеспокоены тем, что решающая группа сторонников Трампа останется дома в день выборов, убаюкиваемая сильной экономикой и частыми предсказаниями президента о том, что будет «красная волна». »побед республиканцев в ноябре.

На самом деле, исторические тенденции и доступные опросы показывают, что верно обратное, и что будет «голубая волна» побед демократов, подпитываемая сильным энтузиазмом избирателей и глубокой неприязнью к Трампу, которая будет стоить республиканцам Домашнее большинство.

Но бой с Кавано, возможно, помог республиканцам преодолеть этот так называемый разрыв энтузиазма.

В красных штатах с близкими гонками в Сенате удар Кавано, кажется, уже оказывает влияние. Опросы избирателей на этой неделе в Северной Дакоте, Теннесси и Техасе показали, что кандидаты в Сенат-республиканцы добились значительных успехов.

Это явно не было упущено из-за Трампа, который сказал участникам митинга в пятницу вечером в Огайо, что демократы пытались «уничтожить» Кавано.

В результате борьбы в Верховном суде «Мы выигрываем [места в Сенате] в штатах, в которых даже не собирались участвовать. Мы бьем людей, которых даже не собирались оспаривать», — сказал Трамп.

На самом деле нет ни одного места в Сенате, за которое республиканцы (или демократы, если на то пошло) не планировали бороться. Тем не менее, Трамп явно имел в виду такие гонки, как в Северной Дакоте и Теннесси, которые развернулись сразу после битвы с Кавано.

«Люди понимают, насколько важен Верховный суд», — сказал Трамп.

Berühmtheiten, die Griechenland lieben und zeigen es aus

Греция — одно из самых космополитических направлений для путешествий, так как многие известные люди из Греции и из-за рубежа выбирают ее для своих летних каникул. Эти визиты знаменитостей дали большой туристический импульс стране после того, как они привлекли внимание средств массовой информации. В более ранней записи блога «Знаменитости, которые любят Грецию — часть 1» мы рассказали о некоторых из этих узнаваемых лиц.Мировой элиты мира предпочитают проводить отпуск и наслаждаться красотами Греции, давайте посмотрим на остальных…

Голди Хоун — Курт Рассел — Кейт Хадсон

Дэвид и Виктория Бекхэм

Знаменитая пара часто выбирает Грецию для отдыха. Во время одного из своих визитов они остановились в хорошо оборудованном отеле в Пилосе, Мессиния. Миллионы их подписчиков увидели великолепные пейзажи Греции, когда Бекхэмы поделились своим отпуском в Instagram. Снимки невероятных закатов и фотографии семьи, весело проводящей время, еще больше повысили репутацию Греции…

Кэтрин Зета Джонс — Майкл Дуглас

Анджелина Джоли

Оскароносная актриса, одна из ведущих профессионалов Голливуда, сказала в предыдущем интервью, что она действительно любит Грецию, и ей не нравится, когда приходит время отъезда.Последние несколько лет она посещала греческие острова, и Миконос и Санторини делали свой выбор в первую очередь.

Брэд Питт

Знаменитый актер сказал, что уже несколько раз бывал в Греции, и она ему очень понравилась. По его мнению, это одно из красивейших мест на планете! Перед расставанием Брэд и его бывшая жена Анджелина Джоли собирались купить греческий остров в Ионическом море.

Рассел Кроу

Когда Рассел Кроу посетил Миконос, он вызвал переполох в мире социальных сетей, поскольку все пытались выяснить, где находится актер.Покидая Грецию, он написал в своем Твиттере: «Я не знаю, как я прожил 49 лет на этой планете и больше не был на греческих островах. Такой красивый. Привет, Миконос! Я вернусь!»

Леонардо Ди Каприо

Привлекательная звезда Голливуда в прошлом побывала на прекрасном острове Спецес. «У меня перехватило дыхание от Греции», — сказал он. Он признал, что Греция, безусловно, была одним из самых красивых мест, в которых он когда-либо был, и похвалил удивительные острова за то, что они являются отличным сочетанием вкусной еды, истории, конечно же, культуры.Грецию обязательно нужно посетить, завораживающие пейзажи заставят вас почувствовать себя живущим в раю, а греческая еда оживит ваши чувства…

Том Хэнкс

Актер, удостоенный Оскара, Том Хэнкс — еще один известный актер. Грекофил, никогда не скрывавший своей любви к греческой культуре. В прошлом он однажды заявил, что чувствует себя «на 110% греком». Большую часть летних каникул он проводит в Греции со своей семьей. Его жена Рита Уилсон является греческой потомкой. Пара в основном наслаждается летом на Антипаросе, небольшом, но очаровательном острове, расположенном рядом с Паросом.

Ричард Гир

Можно сказать, что лучший посол Патмоса — Ричард Гир. Голливудская звезда посещает остров 17 лет и планирует купить там дом. Этот остров кажется идеальным местом для медитации.

Эмир Кустурица

Сербский директор недавно купил дом на Сифносе. Этим он показал всему миру, как любит бывать в Греции. Остров Сифнос — отличный выбор для еды и напитков с его прекрасными пляжными барами и тавернами из морепродуктов.

Стивен Спилберг

Известный режиссер много раз встречался в Греции и отмечал, что «это страна с прекрасной природной красотой и исключительными людьми. Я горжусь тем, что могу часто навещать ее».

Харрисон Форд

Знаменитый актер в прошлом бывал в Эрмуполисе на Сиросе и наслаждался частыми прогулками по живописным домам. Сирос — остров, который можно посетить в любое время года. Остров богат историей и имеет великолепные пейзажи.

Как морские охраняемые районы помогают рыболовству и океанским экосистемам

123 миллиона человек, которые живут у побережья США, и 3 миллиона американцев, средства к существованию которых зависят от океана, являются первыми свидетелями ужасных и беспрецедентных перемен. В результате изменения климата необычно теплые воды убивают водоросли вдоль западного побережья, а также кораллы на Гавайях, подпитывая цветение токсичных водорослей во Флориде и Калифорнии и угрожая национальной индустрии коммерческого и любительского рыболовства стоимостью 212 миллиардов долларов.Сточные воды и сельскохозяйственные стоки, а также загрязнение пластиком также представляют собой серьезную опасность; В 2017 году ученые измерили самую большую мертвую зону океана — площадь размером с Нью-Джерси — в Мексиканском заливе, и загрязнение пластиком настолько распространено, что оно было обнаружено в самых отдаленных районах глубокого моря.

В то время как в США в настоящее время существует сильная система управления рыболовством, наследие чрезмерного вылова рыбы в прошлом в сочетании с изменением климата и разрушением среды обитания серьезно угрожает некоторым из самых знаковых рыбных промыслов страны.Например, быстрое потепление воды в заливе Мэн препятствует усилиям по восстановлению промысла трески в Новой Англии. В других промыслах, таких как аляскинский камчатский краб, климатические изменения привели к проблемам перелова, поскольку целевые виды группируются в немногих оставшихся холодных районах. А во Флориде токсичные водоросли, связанные с загрязнением прибрежных районов и изменением климата, в 2018 году убили так много снука и морского окуня, что чиновники запретили их вылов.

Одним из самых действенных и эффективных методов защиты рыбных ресурсов и океанской жизни является охраняемая морская зона (МОР) — четко определенное географическое пространство, управляемое для долгосрочного сохранения.В то время как некоторые тихоокеанские островные государства исторически имели закрытые районы для управления прибрежным рыболовством, в 20 веке европейские и американские государства полагались на труднодоступность, удаленность, каменистую местность или глубину территорий, чтобы они фактически служили МОР. По мере того, как технологии совершенствовались и эти районы становились более доступными для рыболовства, необходимость защиты определенных районов и местообитаний для защиты популяций рыб стала очевидной.

За последнее десятилетие мировое сообщество установило цели по охране океана с помощью множества международных механизмов — в основном, целевой задачи 11, принятой в Айти, в Конвенции о биологическом разнообразии и цели 14 в области устойчивого развития Организации Объединенных Наций, — с целью усиления общей защиты мирового океана.Каждая страна имеет автономию для определения и управления МОР в своей исключительной экономической зоне (ИЭЗ), которая относится к области океана, простирающейся на 200 морских миль от берега, в которой прибрежная страна имеет юрисдикцию над природными ресурсами. Чтобы координировать эти усилия и отслеживать прогресс в достижении национальных и глобальных целей, страны предприняли шаги по установлению общих стандартов. В недавно выпущенном Руководстве по МОР — результат сотрудничества Всемирного центра мониторинга охраны окружающей среды ООН и других организаций — описаны этапы создания МОР, различные уровни защиты МОР и ожидаемые природоохранные результаты в зависимости от уровня защиты МОР.

В этом выпуске содержится обзор конкретных связанных преимуществ, которые МОР предлагают рыболовству; обсуждает, когда использование МОР целесообразно, а когда нет; и подробно описаны способы смягчения экономических проблем, которые МОР могут создать для коммерческих рыбаков. В кратком изложении также представлен новый анализ МОР США, в котором изучается их географическое распределение, размер и уровень защиты, чтобы обосновать необходимость расширения системы МОР в Соединенных Штатах.

Спектр защит

Подобно наземным охраняемым территориям, МОР существуют по всему спектру защиты.Следующие четыре классификации, недавно описанные морским экологом Кирстен Гроруд-Колверт и ее коллегами, определяют МОР на основе их уровня защиты биоразнообразия и добычи полезных ископаемых.

Минимально защищенная

Минимально защищенные MPA обозначены как «защищенные», но могут допускать обширное извлечение или не иметь применения, реализации и активного управления. Хотя минимально охраняемые MPA действительно приносят определенную пользу для сохранения района, это относительно минимально, как следует из названия.Например, Пирахубаэ, морской заповедник к югу от Сан-Паулу, Бразилия, считается минимально охраняемым, поскольку после включения в перечень осуществлялись текущие и плохо регулируемые утвержденные правительством инфраструктурные проекты, которые нанесли ущерб прибрежным местам обитания и рыболовным угодьям, что резко подорвало эффективность MPA.

Слабозащищенный

Слегка защищенные МОР запрещают некоторые виды деятельности по добыче полезных ископаемых, такие как бурение нефти и газа и разработка морского дна, но разрешают коммерческое рыболовство в той или иной форме.Уровень защиты для этого типа МОР больше всего аналогичен уровню защиты районов управления рыболовством, которые могут защищать определенные виды и среды обитания, но все же позволяют вести коммерческий промысел. Например, 160 из 161 МОР на тихоокеанском побережье Канады разрешают коммерческий промысел в пределах своих границ, но ограничивают использование определенных типов рыболовных снастей. Точно так же в большинстве из 16 национальных морских заповедников Соединенных Штатов разрешено коммерческое рыболовство, регулируемое Законом Магнусона-Стивенса о сохранении и управлении рыболовством, но запрещается бурение на нефть и газ.Например, Национальный морской заповедник на Олимпийском побережье у побережья штата Вашингтон запрещает бурение нефтяных и газовых скважин, разработку морского дна, а также Министерству обороны США проводить бомбардировки в этом районе. Другой пример — Национальный морской заповедник Флорида-Кис, где движение судов строго регулируется, а бурение нефтяных и газовых скважин запрещено.

Сильно защищенный и полностью защищенный

Как хорошо защищенные, так и полностью защищенные МОР запрещают любую промышленную добычу полезных ископаемых в пределах своих границ, включая бурение нефти и газа, разработку морского дна и коммерческое рыболовство.Сильно охраняемые природные заповедники, включая национальные морские памятники Соединенных Штатов, позволяют заниматься легкой добычей полезных ископаемых, например, натуральным хозяйством и любительским рыболовством. Тип и объем разрешенной деятельности указываются в прокламации об учреждении каждого памятника, например, меры защиты, изложенные в прокламации Папаханаумокуакеа. (см. текстовое поле ниже)

Полностью охраняемые МОР, такие как государственный морской заповедник Стюартс-Пойнт в Северной Калифорнии и сеть морских заповедников в Орегоне, запрещают любую добывающую деятельность.

Пять морских национальных памятников Соединенных Штатов были обозначены президентским указом в соответствии с Законом о древностях 1906 года, который позволяет президенту выделять общественные места для защиты.

Морской национальный памятник Папаханаумокуакеа, первоначально обозначенный президентом Джорджем Бушем в 2006 году как Морской национальный памятник северо-западных Гавайских островов, был первым ООР, в котором использовался термин «морской национальный памятник», и в настоящее время является третьим по величине ООР в мире.Прокламация о назначении каждого памятника определяет уровень его защиты от добывающей деятельности, и в процессе определения нет ничего, что требовало бы определенных уровней защиты. Однако все пять существующих морских памятников запрещают коммерческую деятельность по добыче полезных ископаемых, что означает, что они классифицируются как особо охраняемые природные заповедники.

Охраняемые океанические воды в США

Лишь 4,8 процента мирового океана охраняются морскими охраняемыми территориями, причем 2 процента от этого общего количества обозначены как особо или полностью охраняемые районы.Для сравнения: более 15 процентов земной площади в той или иной форме находятся под управлением или защитой.

Около 26 процентов ИЭЗ США защищены, из которых 23 процента имеют как минимум высокую степень защиты. Однако 97 процентов этой территории находится на удаленной территории США в западной части Тихого океана. Обозначение в 2016 году Морского национального памятника Северо-восточные каньоны и подводные горы добавило некоторой репрезентативности на восточном побережье, но на эту территорию приходится лишь немногим более 1 процента всей территории США.Южная территория Атлантического океана. Несмотря на то, что Соединенные Штаты являются мировым лидером в определении МОР, остается огромный потенциал для того, чтобы в будущем определения МОР были распределены между репрезентативными местообитаниями и биорегионами в водах США.

Управление рыболовством не может обеспечить все природоохранные преимущества высоко и полностью защищенных МОР

В Соединенных Штатах ведутся серьезные дискуссии по поводу полезности особо и полностью охраняемых МОР для управления рыболовством.0.CO; 2.] По сути, вопрос заключался в том, необходимы ли МОР с учетом существующей системы управления рыболовством в Соединенных Штатах. Эта нынешняя система успешно реализует планы управления промыслом и восстанавливает ранее истощенные рыбные запасы, и эти планы играют важную роль в обеспечении вылова коммерчески важных видов на устойчивом уровне.

Однако наука ясна: даже самое лучшее управление рыболовством не может обеспечить всех преимуществ высоко или полностью защищенных МОР.Как подытожила в своем отчете за 2016 год ученый по охране океана Эллен Пикитч, высоко и полностью охраняемые МОР служат принципиально иной и дополняющей цели, чем управление рыболовством:

MPA сохраняют биоразнообразие, повышают устойчивость, улучшают рыболовство и действуют как страховой полис, если другие виды управления рыболовством не работают. Они защищают и восстанавливают исчезающие виды и экосистемы. Это сайты для обучения и исследований. Они могут привлекать туристов и обеспечивать население альтернативными средствами к существованию.Запасы способны вернуть жизнь и восстановить ключевые процессы, такие как очистка воды и улавливание углерода. Кроме того, они играют важную роль в защите и возвращении большой старой рыбы, которая всегда была движущей силой воспроизводства и пополнения популяции. Животные, которые живут дольше, способны давать больше потомства. Резервы могут их вернуть; обычное управление рыболовством не будет. Чем больше будет личинок и взрослых особей, тем дальше они будут путешествовать, содействуя рыболовству и повышая устойчивость на больших территориях.

Здоровый океан с устойчивыми и экономически жизнеспособными рыбными промыслами требует всех доступных инструментов управления. Точно так же, как МОР не могут заменить управление рыболовством, управление рыболовством не может заменить МОР. Обе системы должны использоваться совместно для достижения устойчивой и экономически жизнеспособной защиты океана.

Насколько хорошо охраняемые МОР приносят пользу рыболовству

Предоставляя убежище для целевых видов, сильно или полностью защищенный МОР дает животным внутри его границ время, чтобы вырасти больше, чем их собратья за пределами этого района.Например, более крупная рыба, как правило, дает больше потомства, и этот избыток рыбы выйдет из МОР и поможет в промысле. Этот эффект называется «побочным эффектом» и может рассматриваться в терминах, аналогичных проценту по сберегательному счету: высоко или полностью защищенный МОР защищает «основную сумму», а рыба, покидающая МОР, является «процентом». Одно исследование вторичного распространения из более чем дюжины высоко и полностью охраняемых МОР показало, что почти во всех случаях промысел за пределами МОР, вероятно, был неустойчивым без перелива со стороны популяций внутри сильно или полностью защищенных МОР.

Благоприятное воздействие МОР на рыболовство лучше всего количественно оценить путем измерения биомассы, числовой плотности и размера организмов.

Биомасса

Биомасса — это общая масса живых биологических организмов на данной территории в данный момент времени. Многочисленные доказательства показали, что высоко и полностью охраняемые МОР способствуют крупному, быстрому и устойчивому накоплению биомассы коммерчески важных видов в пределах их границ. Один метаанализ научных исследований показал, что биомасса целых групп рыб в сильно и полностью охраняемых МОР в среднем в шесть-семь раз больше, чем в прилегающих незащищенных территориях, и в три-четыре раза больше, чем в слабозащищенных МОР.

Числовая плотность

Числовая плотность относится к количеству особей определенного вида в данном районе. По мере увеличения числа особей все больше и больше людей покидают охраняемую территорию и становятся доступными для рыболовства. Одно исследование показало, что плотность организмов в пределах сильно или полностью защищенных МОР более чем в 1,5 раза превышает плотность в незащищенных районах поблизости. В национальном парке Цицикамма в Южной Африке, одном из старейших полностью охраняемых морских заповедников в мире, плотность промысловой рыбы примерно в 42 раза выше, чем в соседних рыболовных угодьях.А на банке Джорджес в заливе Мэн, всего после пяти лет защиты, плотность гребешков разрешенного размера в 9–14 раз превысила плотность гребешков в промысловых районах.

Другой широко используемый показатель плотности — это улов на единицу усилия (CPUE), который представляет собой общий улов, деленный на общее количество усилий, затраченных на вылов улова. Это считается косвенным показателем численности рыбных запасов. Например, если CPUE уменьшается, рыбаки тратят больше времени на вылов меньшего количества рыбы, что указывает на сокращение запасов.Если CPUE увеличивается, рыбаки вылавливают больше рыбы за меньшее время, что указывает на выздоравливающий или здоровый запас. Одно крупное глобальное исследование показало, что в промысловых районах, расположенных рядом с хорошо или полностью охраняемыми МОР, CPUE увеличился в четыре раза. Другое исследование показало, что CPUE рыбных ловушек за пределами сети полностью защищенных МОР в водах у островного государства Сент-Люсия увеличился на 46–90 процентов в течение пяти лет после включения в список.

Размер организма

Высоко и полностью защищенные МОР увеличивают средний размер организмов на 28 процентов.Размер организма важен для устойчивости промысла, поскольку у многих коммерчески важных видов более крупные самки откладывают яйца, которые больше, многочисленнее и качественнее, чем у более мелких самок. Этот результат не зависит от массы, что означает, что одна крупная самка воспроизводит более двух более мелких самок с одинаковой общей массой тела. Например, при коммерчески важном промысле атлантической трески одна крупная 30-килограммовая самка дает больше яиц, чем 28 мелких 2-килограммовых самок вместе взятых.Более того, партия икры крупной 30-килограммовой самки имеет в 37 раз больше энергии, что увеличивает выживаемость только что вылупившихся рыб.

В другом примере промысел новозеландского люциана принес выгоду в 14 раз больше рыбы в полностью охраняемых МОР, чем в промысловых районах, в результате чего яйценоскость, по оценкам, в 18 раз выше, чем за пределами охраняемой территории. Точно так же в подводном парке Эдмондс, полностью охраняемой территории в штате Вашингтон, lingcod произвел в 20 раз больше яиц, а медный морской окунь произвел в 100 раз больше яиц, чем их виды за пределами границ морского парка.

Для коммерчески важных видов преимущества сильно или полностью охраняемого МОР могут означать разницу между прекращением местного промысла и быстро восстановившимся. В Нижней Калифорнии местная экономика в первую очередь поддерживается ловлей розового морского ушка. Однако, когда в 2010 г. потепление воды и снижение содержания кислорода привело к гибели большинства видов, более крупные, хорошо репродуктивные морские раковины, выжившие в близлежащем полностью охраняемом МОР, пополнили запасы морских морских ушек во всем регионе.

Подводя итог, можно сказать, что особо охраняемые территории обеспечивают значительные биологические преимущества, способствуя созданию среды, которая позволяет выращивать более крупных самок, дающих больше потомства. В свою очередь, это потомство вырастает в более крупных рыб, некоторые из которых уйдут из дома и восполнят запасы рыбы в окружающих водах. Рыба в этих пополняемых водах привлечет рыбаков, которые поймают ее, тем самым извлекая выгоду из устойчивого предложения более крупной рыбы. Это полезный круг, который начинается с высоко или полностью защищенного МОР.

Высокие и полностью охраняемые МОР увеличивают биоразнообразие, что способствует устойчивости

Было доказано, что особо охраняемые или полностью охраняемые МОР способствуют увеличению биоразнообразия, что способствует общему здоровью и продуктивности экосистем. В ходе метаанализа, посвященного роли утраты биоразнообразия в экосистемных услугах, данные показали, что после включения в перечень уровни биоразнообразия полностью охраняемых МОР увеличились в среднем на 23 процента. В то же время районы, прилегающие к МОР, были связаны со значительным увеличением продуктивности рыболовства.

Было также показано, что биоразнообразие повышает способность экосистем противостоять стрессу и после этого относительно быстро восстанавливаться. В одном примере полностью охраняемая территория в Новой Зеландии смогла перейти от бесплодия морских ежей — экосистемы, разрушенной чрезмерным выпасом неконтролируемой и быстро растущей популяции морских ежей — до своей первоначальной лесной экосистемы ламинарии в течение 12 лет после ее определения. Укрытие, предоставленное полностью защищенным MPA, позволило увеличить численность рыбы, поедающей морских ежей, что привело к общему увеличению местного биоразнообразия.

Исследования показали, что по мере того, как океанские воды нагреваются и становятся более кислыми, биоразнообразие также может служить буфером для изменения климата. Одно исследование, в котором были синтезированы глобальные, независимые от рыболовства данные для проверки важности биоразнообразия для производства рыбы, показало, что более разнообразные рыбные сообщества также обладают большей устойчивостью к колебаниям температуры.

Насколько хорошо защищенные МОР приносят пользу прибрежным экономикам

Экономические исследования стоимости высоко и полностью защищенных МОР показывают значительную отдачу от инвестиций.Одно всеобъемлющее экономическое исследование показало, что общая ценность защиты этих территорий включает выгоды для соседних рыболовных промыслов, сокращение выбросов парниковых газов, создание штормовых буферов, прибыльный экотуризм, новые рабочие места в управлении МОР и выгоды от новых научных открытий. По сути, каждый вложенный доллар приносит примерно 20 долларов прибыли. Это экономическое исследование также показало, что рыболовство со средней или высокой степенью упадка больше всего выиграло от перетока из сильно и полностью защищенных МОР. Другое исследование, в котором рассматривались комбинированные экономические выгоды от МОР, показало, что прибыль как от туризма, так и от соседнего рыболовства увеличилась всего за пять лет после создания заповедника.

МОР с высокой и полной защитой — не панацея

МОР — даже те, которые находятся под строгой или полной защитой — не являются панацеей для здоровья океана или даже улучшения рыболовства. Например, они не могут защитить от инвазивных видов, загрязнения или изменения климата, кроме как за счет повышения устойчивости экосистемы. По этой причине МОР наиболее эффективны, когда они правильно спроектированы и масштабированы для решения конкретной задачи.

Чтобы обеспечить выгоды для рыболовства, успешные МОР по всему миру имеют все или большую часть из следующих пяти ключевых характеристик:

• Они имеют высокую или полную защиту.
• Они хорошо соблюдаются.
• Учреждены сроком на 10 и более лет.
• Они большого размера.
• Они изолированы глубокой водой и песком.

МОР, отвечающие только одному или двум из этих критериев, не приносят значительных промысловых выгод. Для получения максимально возможных выгод для рыболовства и сохранения природных ресурсов необходимо также сильное управление рыболовством за пределами сильно или полностью защищенных МОР.

При соблюдении и надлежащем выполнении всех этих критериев МОР обеспечивают исключительную экологическую и экономическую выгоду и являются одним из наиболее эффективных общих методов устойчивого рыболовства и сохранения морской среды.

Как вовлечь и поддержать прибрежные сообщества и сохранение океана в долгосрочной перспективе

Признать и снизить краткосрочные затраты рыболовства

MPA обычно обращают внимание на потенциальные долгосрочные выгоды для окружающей среды и экономики. Однако краткосрочные издержки, которые наиболее остро испытывает рыболовное сообщество, вполне реальны и могут привести к потере доходов. Один из способов заручиться поддержкой рыболовного сообщества — признать роль краткосрочных затрат; работать над снижением экономических рисков переходного периода, связанных с сильно или полностью защищенными МОР; и прояснить, что долгосрочная жизнеспособность промысла не находится под угрозой из-за обозначений.

Рыболовное сообщество часто рассматривает долгосрочные выгоды от МОР как высокий риск, поскольку нет гарантии, что повышенная продуктивность, связанная с МОР, принесет выгоду в те временные рамки, которые позволят им оставаться в бизнесе. Более того, мало что можно сделать для предотвращения некоторых серьезных негативных последствий, которые могут быть и часто возникают в результате временной потери дохода, например, жилищные проблемы и проблемы со страхованием. Однако исследования показали, что доход после назначения может равняться и даже превышать доход до назначения в течение всего лишь пяти лет.

Одним из подходов к сокращению краткосрочных потерь дохода является разделение выгод между заинтересованными сторонами. В этом методе сборы с пользователей, не занимающихся добычей полезных ископаемых, таких как туристы, обеспечивают источник стабильного дохода для местных рыбаков в течение первых сезонов назначения. Например, в природном парке «Рифы Туббатаха» на Филиппинах часть выгоды финансировалась за счет платы за пользование дайверами и операторами дайвинга, а также за счет выплат грантов от внешних доноров. Эти сборы включали компенсационные выплаты местным рыбакам за потерю доступа к полностью охраняемым МОР.Еще одним важным компонентом этой модели является то, что местным рыбакам были предоставлены исключительные права доступа к рыбной ловле в районах за пределами МОР в обмен на их поддержку в обеспечении соблюдения полностью охраняемых МОР.

Другие механизмы финансирования, снижающие риски, могут иметь форму краткосрочных государственных субсидий, ссуд под низкие проценты или выкупа акций. В конце 1990-х и начале 2000-х годов, когда местные МОР становились все более распространенными, различные штаты и содружества в Австралии реализовали программы по уменьшению потерь дохода из-за перемещенных рыболовных промыслов.Некоторые программы внесли поправки в правила рыболовства, включив в них программы компенсации; другие предлагали добровольный выкуп лицензий на рыбную ловлю; и несколько разработали сложные программы структурной перестройки, которые представляли собой сочетание пакетов финансовой помощи, направленных на краткосрочные убытки, и выкупа лицензий с долгосрочными последствиями.

Разобраться в проблемах программ выкупа и компенсации

Рыбаки — не единственные заинтересованные стороны в этих областях. Переработчики морепродуктов, поставщики оборудования и связанные с ними отрасли в сообществе также могут столкнуться с негативными последствиями назначения.Таким образом, как и в случае обозначения стихийного бедствия на рыбном промысле, потенциальные программы компенсации должны учитывать, насколько масштабной должна быть система социальной защиты. Следует также учитывать альтернативные издержки, связанные с отсутствием определения МОР, например, какой доход упускает индустрия туризма или какое влияние закрытие может оказать на местную коренную общину. Таким образом, процесс назначения должен включать все заинтересованные стороны и определять наиболее справедливые методы удовлетворения их потребностей и решения их проблем.

Найдите время, чтобы завоевать доверие

Ключевым моментом является включение местных сообществ и рыбаков в процесс назначения. Как обсуждалось выше, рыболовное сообщество стало частью успеха природного парка «Рифы Туббатаха» на Филиппинах. После нескольких лет неустойчивого успеха после назначения, семинары для заинтересованных сторон и сеансы слушания смогли преодолеть недовольство и начать закладывать основу для возможной поддержки.

В случае особо охраняемого морского национального памятника Марианской впадины определение было сделано при значительной поддержке коренных и местных общин, а также правительства.После значительного участия общественности памятник был спроектирован таким образом, чтобы обеспечить возможность для пропитания, отдыха и традиционного рыболовства коренных народов, если деятельность будет считаться устойчивой. Хотя это не было единодушным мнением, многие рыбаки с небольших лодок на островах поддержали этот уровень защиты. Однако Региональный совет по управлению рыболовством в Западной части Тихого океана (WESPAC), который в значительной степени представляет интересы Тихоокеанского ярусного флота, не поддержал, несмотря на минимальный уровень коммерческого рыболовства в районе памятника.Лобби любительской рыбалки в Вашингтоне также оказало сопротивление. Успешное определение морского национального памятника Марианской впадины показывает, что сильная местная поддержка может преодолеть сопротивление нелокальных интересов.

Однако у локального процесса есть свои ограничения. Обозначение Морского национального памятника Северо-восточные каньоны и подводные горы стало огромным шагом вперед в плане защиты в регионе Новой Англии, в котором до этого момента не было особо или полностью охраняемых территорий.После многочисленных встреч с представителями промысловой рыболовной индустрии назначенные лица включили предложения рыбаков, в том числе исключить район Кеш-Ледж из рассмотрения статуса памятника; разделение территории Северо-восточных каньонов и подводных гор на два отдельных компонента, а не на единое целое; уменьшение размера каньона на 60 процентов по сравнению с первоначальным предложением; и беспрецедентное семилетнее введение правил в отношении омаров и краболов.Тем не менее, несмотря на эти значительные изменения, местное рыболовецкое сообщество оказывало и продолжает оказывать сопротивление: одна рыболовная ассоциация даже поставила под сомнение законность памятника в суде.

Даже при наличии убедительных научных доказательств преимуществ для МОР и комплексных консультаций, вероятно, всегда найдутся те, кого нельзя убедить поддержать определение МОР. В Тихом океане WESPAC утверждает, что суда потеряли десятки миллионов долларов из-за этих охраняемых территорий, но, поскольку тунцовые флоты постоянно увеличивают свои промысловые возможности и ловят всю рыбу, которую им разрешено ловить каждый год, данные не поддерживают эти утверждения.В случае с Северо-восточными каньонами и подводными горами существует глубоко укоренившаяся давняя враждебность между федеральными регулирующими органами и интересами коммерческого рыболовства в Новой Англии, поэтому любые действия правительства — назначение MPA или иное — скорее всего, не получат поддержки рыболовного сообщества. .

Путь вперед: защита ключевых экосистем на нижнем уровне 48

Текущее состояние МОР в США

Центр американского прогресса проанализировал размер, местоположение, уровень защиты и тип обозначения для всех MPA в Соединенных Штатах.(см. «Методологию» для получения более подробной информации). После отнесения каждого МОР к географическим регионам, которые приблизительно соответствуют районам, управляемым восемью региональными советами по управлению рыболовством — региональными советами заинтересованных сторон, которые помогают Национальному управлению океанических и атмосферных исследований в управлении рыболовством — CAP обнаружил, что МОР США В системе преобладают несколько очень больших, очень удаленных памятников. Девяносто семь процентов всей территории МОР находится в западной части Тихого океана, и 99 процентов всей сильно или полностью защищенной зоны МОР расположены в этой удаленной зоне.(см. рис. 1a и 1b)

Только в пяти из восьми основных регионов есть районы, которые находятся под защитой от высокой до полной. В трех областях — Мексиканском заливе, средней части Атлантического океана и северной части Тихого океана — нет охраняемых морских охраняемых районов с высокой или полной степенью защиты. Суммарная площадь охраняемых морских охраняемых районов с высокой или полной степенью защиты за пределами западной части Тихого океана составляет менее 1 процента от общей площади. Более того, 84 процента из этого крошечного процента находится в Национальном морском памятнике Северо-восточные каньоны и подводные горы.

В целом размер МОР США относительно невелик. (см. Рисунки 2a и 2b) Семьдесят процентов всех МОР США имеют площадь менее 100 квадратных километров — меньше, чем город Вашингтон, округ Колумбия. Более того, только 27 из 822 МОР США, или 3 процента, имеют площадь более 1000 квадратных километров. в области. Тихоокеанское побережье — район у Калифорнии, Орегона и Вашингтона — имеет наибольшее количество МОР в целом, а также наибольшее количество охраняемых МОР с высокой или полной степенью защиты. (см. Рисунки 3a и 3b) В Мексиканском заливе и в Южной Атлантике также есть относительно большое количество МОР, хотя большинство из них слабо защищены.

Морские национальные памятники составляют 96 процентов всей территории МОР США и более 99 процентов сильно или полностью охраняемых территорий США. (см. рис. 4a и 4b). Государственные и территориальные ООР являются самыми многочисленными, так как их 639, но они, как правило, слабо защищены, и их общая площадь составляет менее 1 процента от общей площади. Другие федеральные механизмы, такие как национальные морские заповедники и национальные заповедники дикой природы, составляют остальные охраняемые территории.

Движение вперед

В настоящее время в Соединенных Штатах Америки два основных подхода к политике в области МОР оказались успешными и доказали свою полезность для рыбаков и других местных сообществ заинтересованных сторон. Один из подходов — это крупные, относительно удаленные морские национальные памятники, которые в большинстве случаев находятся под охраной от очень высокой до полной. Если сильно или полностью защищенные МОР будут хорошо спроектированы, они принесут экологические и экономические выгоды. Однако крупные МОР могут охватывать целые экосистемы и взаимозависимые среды обитания.Крупные МОР также лучше способны противостоять крупномасштабным нарушениям, например, вызванным изменением климата, а также другим антропогенным и экологическим нарушениям. Такая устойчивость может помочь местным рыбным промыслам быстрее прийти в норму после этих событий.

Другой успешный подход включает в себя многоцелевые сети малых MPA. Наиболее ярким примером является сеть МОР в водах штата Калифорния, созданная в соответствии с Законом штата о защите морской флоры и фауны. МОР Калифорнии намного меньше по размеру, чем морские национальные памятники, но они примечательны своей близостью к берегу, значительным участием рыболовного сообщества и спектром мер защиты, которые они предлагают.Рыболовное сообщество Западного побережья начинает осознавать преимущества этого подхода: запасы сильно истощенных морских окуней восстанавливаются быстрее, чем ожидалось.

Поскольку изменение климата вызывает беспрецедентные изменения в океане, МОР являются одним из самых мощных инструментов США для защиты уникального биоразнообразия, рыболовства и образа жизни каждого региона. Международное сообщество призывает отдельные страны к 2030 году защитить 30 процентов каждой морской среды обитания в своих территориальных водах.CAP настоятельно рекомендует Соединенным Штатам выйти за рамки общей цели в 30 процентов и перейти к цели, которая обеспечит защиту 30 процентов каждого крупного географического региона. Учитывая преимущества высоко или полностью защищенных МОР и тот факт, что подавляющее большинство вод США за пределами удаленного Тихого океана имеют относительно минимальную защиту, следует сосредоточить внимание на обеспечении того, чтобы все ключевые регионы и экосистемы получили обозначения, которые более репрезентативны для уникальных и важные места обитания в водах США.

Маргарет Куни — руководитель кампании по вопросам океана в Центре американского прогресса. Мириам Гольдштейн — управляющий директор по вопросам энергетики и окружающей среды и директор по вопросам океанской политики в Центре. Эмма Шапиро — бывший стажер Центра по вопросам общественных земель и океанов.

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Джейн Любченко, выдающегося профессора университета и советника президента по морским исследованиям в Университете штата Орегон; Эми Кенни из Национальной коалиции по защите океана; Анджело О’Коннор Вильягомес, старший сотрудник Pew Bertarelli Ocean Legacy в Pew Charitable Trusts ; Александра Картер, политический аналитик Центра океанической политики; Майкл Мадовиц, экономист Центра; Бет Пайк, менеджер базы данных Атласа защиты морской среды в Институте охраны морской среды; и Карлу Ченслеру, Кристиану Родригесу, Стиву Бонитатибусу и Честеру Хокинсу из производственной группы CAP за их вклад.

Методология

Авторский анализ текущего состояния МОР в Соединенных Штатах основан на данных, предоставленных как базой данных MPAtlas, так и непосредственно Институтом охраны морской среды (MCI). Эти данные включают в себя список всех МОР в Соединенных Штатах и ​​каждый рассчитанный морской район МОР, его высокий или полностью защищенный статус, а также район, который находится в пределах МОР с высокой или полностью защищенной защитой в тех случаях, когда он отличается от общей расчетной морской зоны МОР. .

Используя карты восьми региональных советов по управлению рыболовством США и инструмент MPAtlas, авторы отнесли каждый МОР к наиболее подходящей территории регионального совета. Они также присвоили каждому MPA тип обозначения: «памятник», «святилище», «штат или территория» и «другой федеральный». Категория «прочие федеральные» включает федеральные типы обозначений, такие как национальные заповедники дикой природы (NWR) и Национальная система эстуарных исследовательских заповедников.

Для некоторых памятников Тихоокеанского региона СЗР расположены в различных частях памятников.К ним относятся два из трех объектов морского национального памятника Марианской впадины, морской национальный памятник атолла Роуз и морской национальный памятник Папаханаумокуакеа. В базовых данных они считаются двумя отдельными МОР, но с полностью перекрывающимися территориями. Во избежание двойного учета охраняемых территорий авторы использовали расчетную морскую площадь только для памятников. Хотя эти вложенные NWR исключаются из расчетов площадей, они включаются в числовые подсчеты. Поскольку территории СЗР были обозначены независимо от памятников, они классифицируются как «прочие федеральные» в анализе типов обозначений авторов.

Для морского национального памятника «Тихоокеанские отдаленные острова» МСИ отделил прилегающую территорию, защищенную как NWR, от территории, защищенной памятником, поэтому они также отделены в анализе авторов.

Сноски

Естественно увеличенная ширина нейтрализации SARS-CoV-2 через год после заражения

Отчетность по данным

Никакие статистические методы не использовались для предварительного определения размера выборки. Эксперименты не были рандомизированы, и исследователи не были закрыты для распределения во время экспериментов и оценки результатов.

Участники исследования

Ранее включенных в исследование участников попросили вернуться на 12-месячный контрольный визит в больницу Рокфеллерского университета в Нью-Йорке в период с 8 февраля по 26 марта 2021 года. предыдущие визиты в рамках нашего продольного когортного исследования выздоровевших от COVID-19 лиц ^3,4 . У всех участников в анамнезе была подтвержденная инфекция SARS-CoV-2, диагностированная во время острой инфекции с помощью ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) или ретроспективно подтвержденная сероконверсией.Критерии исключения включали наличие симптомов, указывающих на активную инфекцию SARS-CoV-2. Большинство участников исследования были жителями трех штатов Большого Нью-Йорка, и их попросили вернуться примерно через 12 месяцев после появления симптомов COVID-19. Участники явились в больницу Рокфеллерского университета для сбора образцов крови, и их спросили о возможном сохранении симптомов после 6,2-месячного визита, лабораторно подтвержденных эпизодах повторного заражения SARS-CoV-2 и о том, получали ли они какие-либо заболевания, связанные с COVID-19. лечение или вакцинация против SARS-CoV-2 в промежуточный период.Участники исследования, получившие вакцинацию от COVID-19, были исключительно реципиентами одной из двух одобренных в настоящее время EUA мРНК-вакцин, Moderna (мРНК-1273) или Pfizer-BioNTech (BNT162b2), и люди, получившие обе дозы, сделали это в соответствии с текущими данными. рекомендуемые интервалы, а именно 28 дней (диапазон 28–30 дней) для Moderna и 21 день (диапазон 21–23 дней) для Pfizer-BioNtech. Подробные характеристики симптоматики и тяжести острой инфекции, кинетики симптомов и фазы немедленного выздоровления (через 7 недель после появления симптомов до 6.2-месячный визит) ранее сообщалось ⁴ . Участники, у которых наблюдались стойкие симптомы, связанные с COVID-19, были идентифицированы на основании хронической одышки или усталости, дефицита спортивных способностей и / или трех или более дополнительных долгосрочных симптомов, таких как стойкая необъяснимая лихорадка, боль в груди, новые- возникновение сердечных осложнений, артралгии, нарушение концентрации внимания / остроты ума, нарушение обоняния / вкуса, невропатия или кожные проявления, как описано ранее ⁴ .Сбор и обработка клинических данных проводились с использованием программного обеспечения iRIS от iMedRIS. Все участники Рокфеллеровского университета предоставили письменное информированное согласие перед участием в исследовании, и исследование было проведено в соответствии с Надлежащей клинической практикой. Подробные характеристики участников см. В дополнительной таблице 2. Исследование было проведено в соответствии со всеми соответствующими этическими нормами, а протокол (DRO-1006) для исследований с участием людей был одобрен Наблюдательным советом учреждения Рокфеллерского университета.

Молекулярные тесты SARS-CoV-2

Слюну собирали в гуанидинтиоцианатный буфер, как описано ранее ⁴² . РНК экстрагировали с использованием либо колоночного метода (Qiagen QIAmp DSP Viral RNA Mini Kit, каталожный номер 61904), либо метода на основе магнитных шариков, как описано ранее ⁴³ . КДНК с обратной транскрипцией амплифицировали с использованием праймеров и зондов, утвержденных CDC или Лабораторией персонализированной медицины Колумбийского университета, соответственно, и одобренных FDA в соответствии с разрешением на экстренное использование.Вирусная РНК считалась обнаруженной, если C _t для двух вирусных праймеров / зондов было <40.

Обработка и хранение образцов крови

Мононуклеарные клетки периферической крови, полученные из образцов, собранных в Университете Рокфеллера, очищали, как сообщалось ранее, градиентным центрифугированием и хранили в жидком азоте в присутствии FCS и DMSO ^3,4 . Образцы гепаринизированной плазмы и сыворотки разделяли на аликвоты и хранили при -20 ° C или ниже. Перед экспериментами аликвоты образцов плазмы инактивировали нагреванием (56 ° C в течение 1 ч), а затем хранили при 4 ° C.

ELISA

ELISA ^44,45 для оценки связывания антител с SARS-CoV-2 RBD и N проводили путем покрытия 96-луночных планшетов с высоким связыванием (Corning 3690) 50 мкл на лунку 1 мкг мл раствора белка ^-1 в PBS в течение ночи при 4 ° C. Планшеты промывали 6 раз промывочным буфером (1 × PBS с 0,05% Tween-20 (Sigma-Aldrich)) и инкубировали со 170 мкл на лунку блокирующего буфера (1 × PBS с 2% BSA и 0,05% Tween-20 (Sigma). ) в течение 1 ч при комнатной температуре.Сразу после блокирования моноклональные антитела или образцы плазмы добавляли в PBS и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Образцы плазмы анализировали при начальном разведении 1:66 и 7 (IgA и IgM анти-RBD) или 11 (IgG анти-RBD) дополнительных трехкратных серийных разведениях. Моноклональные антитела тестировали при начальной концентрации 10 мкг / мл ^-1 и 10 дополнительных четырехкратных серийных разведениях. Планшеты промывали 6 раз промывочным буфером, а затем инкубировали с вторичными антителами против человеческого IgG, IgM или IgA, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP) (Jackson Immuno Research 109-036-088 109-035-129 и Sigma A0295) в блокирующем буфере. при разведении 1: 5000 (IgM и IgG) или при разведении 1: 3000 (IgA).Планшеты проявляли добавлением субстрата HRP, TMB (ThermoFisher) в течение 10 минут (образцы плазмы) или 4 минут (моноклональные антитела). Проявление реакции останавливали добавлением 50 мкл 1 М H ₂ SO ₄ и измеряли поглощение при 450 нм с помощью считывающего устройства для микропланшетов ELISA (FluoStar Omega 5.11, BMG Labtech) с программным обеспечением Omega MARS для анализа. Для образцов плазмы положительный контроль (плазма от COV72 участника, разбавленная в 66,6 раза и семь дополнительных трехкратных серийных разведений в PBS) был добавлен в каждый аналитический планшет для проверки.Среднее значение его сигнала использовалось для нормализации всех других значений на той же пластине с программным обеспечением Excel перед вычислением площади под кривой с помощью Prism v.9.1 (GraphPad). Для моноклональных антител EC ₅₀ определяли с использованием четырехпараметрической нелинейной регрессии (GraphPad Prism v.9.1).

Белки

Векторы экспрессии млекопитающих, кодирующие RBDs SARS-CoV-2 (GenBank MN985325.1; остатки белка S 319-539) или мутантов RBD K417N, E484K, N501Y с N-концевым человеческим IL-2 или Mu-фосфатазой сигнальный пептид был ранее описан ⁴⁶ .Нуклеокапсидный белок (N) SARS-CoV-2 был приобретен в Sino Biological (40588-V08B).

Псевдотипный репортерный вирус SARS-CoV-2

Панель плазмид, экспрессирующих RBD-мутантные белки SARS-CoV-2 S в контексте pSARS-CoV-2-S _Δ19 , была ранее описана ^{2,9, 26} . Варианты псевдовирусов, напоминающие варианты, вызывающие озабоченность, B.1.1.7 (впервые выделены в Великобритании), B.1.351 (впервые выделены в Южной Африке), B.1.526 (впервые выделены в Нью-Йорке) и P.1 (впервые выделены в Бразилии. ) были получены путем введения замен с использованием синтетических фрагментов гена (IDT) или с помощью ПЦР с перекрывающимся удлинением, опосредованного мутагенезом и сборкой Гибсона.В частности, введенные вариантно-специфичные делеции и замены были: B.1.1.7: ΔH69 / V70, ΔY144, N501Y, A570D, D614G, P681H, T761I, S982A, D1118H; B.1.351: D80A, D215G, L242H, R246I, K417N, E484K, N501Y, D614G, A701V; B.1.526: L5F, T95I, D253G, E484K, D614G, A701V; Ч.1: L18F, R20N, P26S, D138Y, R190S, K417T, E484K, N501Y, D614G, H655Y.

Замена E484K и K417N / E484K / N501Y (KEN), а также делеции и замены, соответствующие рассматриваемым вариантам, были включены в S-белок, который также включает замену R683G, которая разрушает сайт расщепления фурином и увеличивает инфекционность частиц. .Нейтрализующую активность против мутантных псевдовирусов сравнивали с последовательностью SARS-CoV-2 S дикого типа (NC_045512), несущей R683G, где это необходимо.

Псевдотипированные частицы SARS-CoV-2 были созданы, как описано ранее ^3,13 . Вкратце, клетки 293T трансфицировали pNL4-3ΔEnv-nanoluc и pSARS-CoV-2-S _Δ19 , частицы собирали через 48 часов после трансдукции, фильтровали и хранили при -80 ° C.

Анализ микронейтрализации с аутентичным SARS-CoV-2

Анализы микронейтрализации вируса SARS-CoV-2 проводили, как описано ранее ³ .За день до заражения клетки Vero E6 высевали из расчета 1 × 10 ⁴ клеток на лунку в 96-луночные планшеты. Разбавленную плазму и антитела смешивали с SARS-CoV-2 WA1 / 2020 или вариантом B.1.351 и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C. Затем смесь антитело-вирус наносили непосредственно на клетки Vero E6 и инкубировали в течение 22 часов при 37 ° C. Затем клетки фиксировали путем добавления в лунки равного объема 70% формальдегида с последующей пермеабилизацией 1% Triton X-100 в течение 10 мин. После отмывки клетки инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C с блокирующим раствором 5% козьей сыворотки в PBS (каталожный номер.005–000-121; Jackson ImmunoResearch). Кроличьи поликлональные нуклеокапсидные антитела против SARS-CoV-2 (каталожный номер GTX135357; GeneTex) добавляли к клеткам при разведении 1: 1000 в блокирующем растворе и инкубировали при 4 ° C в течение ночи. Козье антитело против кролика AlexaFluor 594 (номер по каталогу A-11012; Life Technologies) использовали в качестве вторичного антитела в разведении 1: 2,000. Ядра окрашивали Hoechst 33342 (номер по каталогу 62249; Thermo Fisher Scientific) в концентрации 1 мкг / мл ^-1 . Изображения получали с помощью флуоресцентного микроскопа и анализировали с помощью ImageXpress Micro XLS (Molecular Devices).Все эксперименты проводились в лаборатории с уровнем биобезопасности 3.

Анализ нейтрализации псевдотипированного вируса

Четырехкратно серийно разведенная плазма выздоравливающих пациентов с COVID-19 или моноклональные антитела инкубировали с псевдотипированным вирусом SARS-CoV-2 в течение 1 часа при 37 ° C. Затем смесь инкубировали с клетками 293T _Ace2 ³ (для сравнения плазменных или моноклональных антител от выздоравливающих людей) или с клетками HT1080Ace2 cl14 ¹³ (для анализов с участием панелей мутантных или вариантных псевдовирусов), как указано, в течение 48 часов. после чего клетки промывали PBS и лизировали реагентом Luciferase Cell Culture Lysis 5 × (Promega).Активность люциферазы нанолюк в лизатах измеряли с использованием системы анализа люциферазы Nano-Glo (Promega) с Glomax Navigator (Promega). Полученные относительные единицы люминесценции были нормализованы к единицам, полученным из клеток, инфицированных псевдотипированным вирусом SARS-CoV-2, в отсутствие плазмы или моноклональных антител. NT ₅₀ или полумаксимальные и 90% ингибирующие концентрации для моноклональных антител (IC ₅₀ и IC ₉₀ ) определяли с помощью четырехпараметрической нелинейной регрессии (метод регрессии наименьших квадратов без взвешивания; ограничения: вверху, 1; внизу, 0) (GraphPad Prism).

Биотинилирование вирусного белка для использования в проточной цитометрии

Очищенный и меченный Avi мутант SARS-CoV-2 RBD или SARS-CoV-2 RBD KEN (K417N, E484K, N501Y) был биотинилирован с использованием биотин-белковой лигазы – BIRA набор в соответствии с инструкциями производителя (Avidity), как описано ранее ³ . Овальбумин (Sigma, A5503-1G) был биотинилирован с использованием набора EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotinylation согласно инструкциям производителя (Thermo Scientific). Биотинилированный овальбумин конъюгировали со стрептавидином-BV711 (BD biosciences, 563262) и RBD со стрептавидином-PE (BD Biosciences, 554061) и стрептавидином-AF647 (Biolegend, 405237) ³ .

Проточная цитометрия и сортировка отдельных клеток

Сортировка отдельных клеток с помощью проточной цитометрии была описана ранее ³ . Вкратце, мононуклеарные клетки периферической крови обогащали B-клетками путем отрицательной селекции с использованием набора для выделения пан-B-клеток в соответствии с инструкциями производителя (Miltenyi Biotec, 130-101-638). Обогащенные В-клетки инкубировали в буфере FACS (1 × PBS, 2% FCS, 1 мМ EDTA) со следующими антителами против человека (все в разведении 1: 200): анти-CD20-PECy7 (BD Biosciences, 335793), анти-CD3-APC-eFluro 780 (Invitrogen, 47-0037-41), анти-CD8-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0086-42), анти-CD16-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0168 -41), анти-CD14-APC-eFluor 780 (Invitrogen, 47-0149-42), а также Zombie NIR (BioLegend, 423105) и меченные флуорофором RBD и овальбумин (Ova) в течение 30 минут на льду.Одиночный CD3 ^— CD8 ^— CD14 ^— CD16 ^— CD20 ⁺ Ova ^— RBD ^— PE ⁺ RBD ^— AF647 ⁺ В-клетки были отсортированы по отдельным лункам -луночные планшеты, содержащие 4 мкл буфера для лизиса (0,5 × PBS, 10 мМ DTT, 3000 единиц на мл ингибиторов рибонуклеазы RNasin (Promega, N2615) на лунку с использованием программного обеспечения FACS Aria III и FACSDiva (Becton Dickinson) для сбора и FlowJo для анализа Отсортированные клетки замораживали на сухом льду, а затем хранили при -80 ° C или сразу использовали для последующей обратной транскрипции РНК.Для анализа фенотипа В-клеток, помимо вышеуказанных антител, В-клетки также окрашивали следующими антителами против человека: анти-IgG-PECF594 (BD biosciences, 562538), анти-IgM-AF700 (Biolegend, 314538), анти-IgA. -Viogreen (Miltenyi Biotec, 130-113-481).

Секвенирование, клонирование и экспрессия антител

Антитела были идентифицированы и секвенированы, как описано ранее ³ . Вкратце, РНК из отдельных клеток подвергали обратной транскрипции (SuperScript III Reverse Transcriptase, Invitrogen, 18080-044), и кДНК хранили при -20 ° C или использовали для последующей амплификации вариабельных генов IGH, IGL и IGK с помощью вложенной ПЦР и Сэнгера. последовательность действий.Анализ последовательности выполнялся с помощью MacVector. Ампликоны из первой реакции ПЦР использовали в качестве матриц для независимого от последовательности и лигирования клонирования в векторы экспрессии антител. Рекомбинантные моноклональные антитела получали и очищали, как описано ранее ³ .

Биослойная интерферометрия

Анализы BLI проводили, как описано ранее ³ . Вкратце, мы использовали прибор Octet Red (ForteBio) при 30 ° C со встряхиванием при 1000 об / мин. Анализы связывания эпитопа выполняли с помощью биосенсора протеина А (ForteBio 18-5010) в соответствии с протоколом производителя «классический сэндвич-анализ».(1) Проверка сенсора: сенсоры погружают на 30 секунд только в буфер (кинетический буфер 10x (ForteBio 18-1105), разведенный 1x в PBS1x). (2) Захват первого антитела: сенсоры погружают на 10 мин с Ab1 при 30 мкг мл ^-1 . (3) Исходный уровень: датчики погружают только в буфер на 30 с. (4) Блокирование: сенсоры погружают на 5 минут с контролем изотипа IgG при 50 мкг мл ^-1 . (6) Ассоциация антигена: сенсоры погружают на 5 мин с RBD при 100 мкг мл ^-1 . (7) Исходный уровень: датчики погружают только в буфер на 30 с. (8) Ассоциация Ab2: сенсоры погружают на 5 мин с Ab2 при 30 мкг мл ^-1 .Подбор кривой выполняли с использованием программного обеспечения для анализа данных Fortebio Octet Data (ForteBio). Измерение аффинности связывания IgG против SARS-CoV-2 корректировали путем вычитания сигнала, полученного из кривых, выполненных с IgG в отсутствие RBD дикого типа. Кинетический анализ с использованием биосенсора протеина А (ForteBio 18-5010) выполняли следующим образом: (1) исходный уровень: 60-секундное погружение в буфер. (2) загрузка: 200 с погружение в раствор с 30 мкг мл ^-1 IgG. (3) исходный уровень: 200 с погружение в буфер.(4) Ассоциация: 300-секундное погружение в раствор с RBD дикого типа при 200, 100, 50 или 25 мкг / мл. (5) диссоциация: погружение в буфер на 600 с. Подгонку кривой проводили с использованием быстрой модели связывания 1: 1 и программного обеспечения для анализа данных (ForteBio). Средние значения K _D определяли путем усреднения всех кривых связывания, которые соответствовали теоретическому соответствию со значением R ² ≥ 0,8.

Анализ авидности антител в плазме

Анализ авидности антител к SARS-CoV-2 в плазме выполняли, как описано ранее ⁴⁷ .

Вычислительный анализ последовательностей антител

Последовательности антител были обрезаны по качеству и аннотированы с использованием Igblastn v.1.14. с системой разграничения доменов IMGT. Аннотации проводились систематически с использованием инструментария Change-O toolkit v.0.4.540 ⁴⁸ . Тяжелые и легкие цепи, полученные из одной и той же клетки, были спарены, и клонотипы были назначены на основе их генов V и J с использованием собственных сценариев R и Perl (рис. 2d). Все скрипты и данные, используемые для обработки последовательностей антител, общедоступны на GitHub (https: // github.com / stratust / igpipeline).

Частотные распределения человеческих генов V в антителах против SARS-CoV-2 из этого исследования сравнивали с 131 284 220 последовательностями IgH и IgL, полученными с помощью ссылки. ⁴⁹ и загружена из cAb-Rep ⁵⁰ , базы данных общих клонотипов BCR человека, доступной на https://cab-rep.c2b2.columbia.edu/. На основе 91 отдельного гена V, которые составляют 6902 проанализированных последовательности из репертуара Ig 10 участников, присутствующих в этом исследовании, мы выбрали последовательности IgH и IgL из базы данных, которые частично кодируются одними и теми же генами V, и подсчитали их. в соответствии с постоянным регионом.Частоты, показанные на рис. 4 с расширенными данными, относятся к анализируемому источнику и изотипу. Мы использовали двусторонний биномиальный тест, чтобы проверить, различается ли количество последовательностей, принадлежащих конкретному гену IgHV или IgLV в репертуаре, в зависимости от частоты одного и того же гена IgV в базе данных. Скорректированные значения P были рассчитаны с использованием поправки на частоту ложного обнаружения (FDR). Существенные различия отмечены звездочками.

Соматическая гипермутация нуклеотидов и длина CDR3 определялись с использованием собственных сценариев R и Perl.Для соматических гипермутаций нуклеотидные последовательности IGHV и IGLV выравнивали относительно их ближайших зародышевых линий с использованием Igblastn, и количество различий считали нуклеотидными мутациями. Средние мутации для генов V рассчитывали путем деления суммы всех нуклеотидных мутаций всех участников на количество последовательностей, используемых для анализа.

Иммуноглобулины, сгруппированные в одну и ту же клональную линию, слили их соответствующие последовательности IgH и IgL, а затем выровняли их с помощью TranslatorX v.1.1 ⁵¹ , с неизмененной наследственной последовательностью, полученной из справочного каталога IMGT / V-QUEST ⁵² . GCTree (https://github.com/matsengrp/gctree) ⁵³ в дальнейшем использовался для построения филогенетических деревьев. Каждый узел представляет собой уникальную комбинацию IgH и IgL, и размер каждого узла пропорционален количеству идентичных последовательностей. Пронумерованные узлы представляют ненаблюдаемые наследственные генотипы между последовательностью зародышевой линии и последовательностями на нисходящей ветви.

Представление данных

Рисунки были упорядочены в Adobe Illustrator 2020.

Сводка отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета исследований природы, связанном с этим документом.